Polyakrylamidgel (PAGE gel) används ofta för proteinelektrofores för att realisera proteinseparation. Denna typ av gel är vanligtvis sammansatt av koncentrerad gel och separationsgel. Den förra spelar rollen som att koncentrera proteinprover, medan den senare separerar proteiner av olika storlekar beroende på koncentrationen av akrylamidmonomer och N,N-metylenbisakrylamid (metylenakrylamid) tvärbindningsmedel som används i gelén.

Detta kit innehåller en mängd olika reagenser som krävs för snabb beredning av PAGE-gel. Användare behöver bara förbereda sin egen gelberedningsutrustning för att förbereda gel, vilket avsevärt förenklar gelberedningen. Gelen som framställs av detta kit kan endast användas för denaturerande PAGE-gelelektrofores. Denna specifikation kan förbereda cirka 125 bitar minigel (beräknat av 0,75 mm tjock gel).

Specifikationer

Komponenter

Frakt och förvaring

Produkten levereras med ispåse och kan förvaras vid 2℃~8℃ i 1 år.

Instruktioner: Det rekommenderas att inte konfigurera för många bitar av gel på en gång för att undvika att tillsätta den övre lösningen för sent (2-3 bitar rekommenderas som mest)

1.Välj lämplig gelkoncentration enligt molekylvikten för målproteinet (se tabell 1)

2.Gelframställningsprocessen (ta en bit 0,75/1,0/1,5 mm minigel som exempel)

2.1 Ta en lika stor volym separationsgelbuffert och separationsgellösning och blanda dem, dvs. ta 2,0/2,7/4,0 mL av de två lösningarna.

2.2 Väg upp 0,1 g ammoniumpersulfat och lös upp det i 1 ml avjoniserat vatten. Kunden måste köpa ammoniumpersulfatet själv.

2.3 Tillsätt 35/45/70 μL APS till den blandade lösningen i steg 1 (mängden APS som används kan minskas med hälften om stelningen är för snabb) och blanda helt.

2.4 Injicera lösningen i steg 2 i den geltillverkande glasplattan. Observera att den koncentrerade gelén ska injiceras i gelformen inom 2 minuter efter att separationsgelen har tillsatts, och hällningen av den koncentrerade gelén ska vara långsam för att förhindra blandning av den koncentrerade gelén och separationsgelen. Om individen har svårt att konfigurera kan den även anpassas för att konfigurera koncentrerad gel efter tätning med etanol.

2.5 Beredning av koncentrerad gel: ta en lika stor volym koncentrerad gelbuffert och koncentrerad gellösning, dvs. ta 0,5/0,75/1,0 mL av de två lösningarna respektive, och tillsätt sedan 10/13/18 μL APS och blanda väl.

2.6 Injicera den i geltillverkningsglasplattan och sätt in kamtänderna (använd inte överdriven kraft för att försiktigt föra in kamtänderna).

2.7 Efter att den koncentrerade gelén stelnat i 15 minuter kan kamtänderna tas bort och användas för elektrofores. Obs: försök att använda nyberedd elektroforesbuffert.

Anteckningar

1. Det föreslås att spänningen under elektrofores ska vara mellan 100-120 V. Om det är nödvändigt att accelerera elektroforeshastigheten kan den ökas till 150 V.

2. Innan gelfyllning, se till att balansera gellösningen till rumstemperatur (till exempel håll den i flera minuter) för att effektivt undvika bildning av bubblor i gelen.

3. Kunden måste köpa ammoniumpersulfatet själv. Vi rekommenderar att du använder produkten med Cat#A3678 från Sigma.

4. Mängden ammoniumpersulfatlösning är endast för referens, och den faktiska mängden kan ökas eller minskas enligt personliga experimentella vanor och erfarenhet. Tillsats av mer ammoniumpersulfat kan accelerera gelhastigheten och vice versa. Koaguleringshastigheten för PAGE-gelen är nära relaterad till temperaturen och mängden ammoniumpersulfat.

5. En lämplig mängd TEMED-ersättningsmedel har lagts till denna produkt. Om det är nödvändigt att ytterligare accelerera gelhastigheten kan en lämplig mängd TEMED tillsättas efter behov innan dispensering.

6. Det finns en signifikant positiv korrelation mellan gelens stelning och temperatur. Under samma förhållanden, ju högre temperatur, desto snabbare stelningshastighet.

7. Färgkoncentrerad gel kan ge en liten mängd utfällning under lagring, vilket är ett normalt fenomen. Använd den gärna.

8. APS lagrades vid -20℃. För enkelhetens skull kan APS som har öppnats och används lagras vid 4℃.

9. Vänligen använd nödvändig personlig skyddsutrustning, såsom labbrock och handskar, för att säkerställa din hälsa och säkerhet!

10. Endast för forskning!

Tabell 1 Referensseparationsområde för SDS-PAGE gel med olika koncentration

Dokument:

Säkerhetsdatablad

20325-A-MSDS-CN20250110

20325-B-MSDS-CN20250110

20325-C-MSDS-CN20250110

20325-D-MSDS-CN20250110

Manualer

20325_Manual_CN20241218_SV

Citat och referenser:

[1] Su G, Wang W, Zhao X, et al. Enhancer-arkitekturberoende flerskiktad transkriptionsreglering orkestrerar RA-signaleringsinducerad tidig linjedifferentiering av ESC:er. Nucleic Acids Res. 2021;49(20):11575-11595. doi:10.1093/nar/gkab1001(IF:16.971)

[2Li M, Niu Y, Tian L, et al. Astragaloside IV lindrar åldrande av makrofager och d-galaktos-inducerad benförlust hos möss genom STING/NF-KB-väg. Int Immunopharmacol. 2024;129:111588. doi:10.1016/j.intimp.2024.111588(IF:5.6)

[3] Song M, Qian C, Zhang T, et al. Salvia mitiorrhiza Bunge vattenhaltigt extrakt dämpar infiltration av tumörassocierade makrofager och potentierar anti-PD-L1-immunterapi vid kolorektal cancer genom att modulera Cox2/PGE2-kaskad. J Etnopharmacol. 2023;316:116735. doi:10.1016/j.jep.2023.116735(IF:5.4)

[4] Zang C, Liu H, Ju C, et al. Gardenia jasminoides J. Ellis-extrakt lindrade skador på vita substanser genom att främja differentieringen av oligodendrocytprekursorceller genom att undertrycka neuroinflammation. Matfunktion. 2022;13(4):2131-2141. Publicerad 2022 21 februari doi:10.1039/d1fo02127c(IF:5.396)