Beskrivning
Enhanced ECL Chemiluminescent Substrate Kit är utformad för att detektera antikroppar och associerade antigener direkt eller indirekt märkta med pepparrotsperoxidas (HRP). Principen för Enhanced ECL Chemiluminescent Substrate Kit är att proteiner eller nukleinsyror överfördes till det präglade membranet efter elektrofores, och målproteinerna på membranet bands av primär antikropp och sekundär antikropp märkt med HRP, eller nukleinsyrorna på membranet bands direkt eller indirekt med HRP-märkta prober. Efter tvättning av membranet användes ECL-arbetslösningen framställd av produkten för att inkubera membranet vid rumstemperatur under flera minuter. Det präglade membranet slogs in med plastfolie och fixerades till röntgenexponeringskassetten. Därefter pressas röntgenfilmen på membranet i ett mörkrum och exponeras i flera sekunder till flera timmar. Efter framkallning och fixering kan protein- eller nukleinsyraband tydligt visas på röntgenfilmen.
Detta kit har ett unikt självlysande substratsystem, vilket minskar exponeringsbakgrunden samtidigt som en ny oxidant förstärker satsens stabilitet avsevärt, vilket gör att den är stabil vid rumstemperatur i upp till ett år. Förutom röntgen kan fluorescerande CCD-skanning också direkt användas främst för WB-detektion och kemiluminescens-immundetektionssystem.
Drag
Hög känslighet och högt signal-brusförhållande, den kan detektera medelhöga antigener.
Lyser snabbt och starkt, det präglade filmbandet kan observeras under lysrör.
Särskilt lämplig för att detektera målöverflöd är högre, konventionella proteinprover.
Ny oxidant, stabil vid rumstemperatur i upp till ett år.
Ansökningar
Kemiluminescens-ELISA
Western Blot
Dot Blot-DNA/RNA
Southern blot-DNA
Northern blot-RNA
Specifikationer
| Rekommenderade antikroppskoncentrationer | primär antikropp (vätskelagringskoncentration 1 mg/ml): 1:1000-1:4000 sekundär antikropp (vätskelagringskoncentration 1 mg/ml): 1:1000-1:4000 |
| Signallängd | < 2 timmar |
| Substrategenskaper | Kemiskt substrat |
| Typ av substrat | HRP (pepparrotsperoxidas) substrat |
| Känslighet | medelhöga antigener |
Komponenter
| Komponentnr. | Namn | 36222ES60 (100 ml) | 36222ES76 (500 ml) |
| 36222-A | Förbättrad ECL - Reagens A | 50 ml | 250 ml |
| 36222-B | Förbättrad ECL - Reagens B | 50 ml | 250 ml |
Frakt och förvaring
Produkten levereras med rumstemperatur och kan förvaras i rumstemperatur i ett år. Om den inte används under en längre tid, rekommenderas att förvara vid 2℃~8℃ att förlänga giltighetstiden.
Anmärkningar: 36222-A bör förvaras borta från ljus!
Instruktioner (till exempel röntgenfilm)
1. Rutinelektrofores, överföringsmembran, antikropp märkt med HRP eller nukleinsyraprob märkt med HRP-inkubations- och tvättmembran.
Anmärkningar: ECL luminescerande lösning är färgsubstratet för HRP, så detektionssystemet måste baseras på HRP-enzymmärkt antikropp eller nukleinsyraprob.
2.Samtidigt som membranet tvättades för sista gången, bereddes den självlysande arbetslösningen färsk (100-200 μL självlysande arbetslösning/cm2 membran): ta samma volym av reagens A och B, blanda väl för senare användning.
Anmärkningar: Ta reagens A och reagens B måste använda olika spetsar. Det rekommenderas att använda arbetsvätskan omedelbart. Den kan fortfarande användas efter några timmar i rumstemperatur, men känsligheten är något reducerad.
3.Använd en platt pincett för att ta ut membranet, lägg det på filterpapper för att rinna av lotionen, gör inte membranet helt torrt. Doppa membranet helt i luminescerande arbetslösning, tillräcklig kontakt med luminescerande arbetsvätska. Inkubera vid rumstemperatur i 1-2 minuter och förbered omedelbart för tablettexponering.
4.Plocka upp membranet med en pincett och lägg det på filterpapper för att dränera den självlysande arbetsvätskan. Men tvätta inte bort den självlysande vätskan.
5. Lägg en bit plastfolie som är större än membranet på insidan av röntgenfilmen obscura. Fäst det präglade membranet på plastfolien, vik plastfolien helt runt det präglade membranet, och ta bort gasbubblan och vik, kan skära av kanten på överflödig plastfolie. Använd filterpapper för att suga upp överflödig lysande arbetsvätska. Fäst plastfolien som täcker det präglade membranet i obscura med tejp, med proteinbandet uppåt.
6. En bit röntgenfilm togs från mörkrummet och placerades på det lindade membranet. Filmen pressades och exponerades i 30 sekunder - 2 minuter. Sedan framkallades och fixades filmen.
Anmärkningar: Exponeringstiden bör justeras efter exponeringsintensiteten.Om bakgrunden är för hög, använd två röntgenfilmer samtidigt.
Andra exponeringsmetoder
Om användningen av CCD-fotografering: membranet kan placeras i arbetsvätskan, efter stöveln enligt användningen av instruktionerna, ta bort filmen, ta bilder. Dessutom kan maskinens mätparametrar justeras efter situationen för att förbättra signal-brusförhållandet.
Anteckningar
1. Bubblor bör undvikas vid membranöverföring, försegling och inkubation. Dessutom kommer handskar att undvika att lämna fingeravtryck på membranet och hålla det rent.
2. Långvarig exponering eller för mycket protein kommer att fördjupa bakgrunden och göra att förändringen av bandstyrkan tappar linjär relation. Underexponering kommer att sudda ut banden.
3. En del plastfolie kan släcka fluorescensen när du lindar in det präglade membranet. Högkvalitativ plastfolie bör väljas.
4. Undvik att placera flera membran i samma tvättmembranlåda, eftersom ömsesidig adsorption eller friktion kan orsaka en djup bakgrund.
5. Positionen och storleken på banden på filmen kan bestämmas exakt med hjälp av synliga förfärgade proteinmarkörer och fluorescerande autoradiografiexponeringstaggar.
6. Använd ett biotin-avidin-system och undvik att använda mjölktillslutning, vilket kan göra att bakgrunden blir för hög.
7. Metalloxidpartiklar kan orsaka granulära fläckar på membranet. Undvik att använda rostiga saxar och pincett. Använd platt pincett av plast.
8. Natriumazid (NaN3) kan hämma HRP-aktivitet, om återvinningen av HRP-märkt sond eller antikropp bör undvika att använda NaN3, om nödvändigt, inte mer än 0,01 %.
9. Denna produkt har ingen speciell toxicitet, enligt vanlig kemisk behandling.
10. Vänligen använd nödvändig personlig skyddsutrustning, såsom labbrock och handskar, för att säkerställa din hälsa och säkerhet!
11. Endast för forskning!
Dokument:
Säkerhetsdatablad
Manualer
Citat och referenser:
[1] He X, Li J, Zhou G, et al. Gating av hippocampus rytmer och minne genom synaptisk plasticitet i hämmande interneuroner. Neuron. 2021;109(6):1013-1028.e9. doi:10.1016/j.neuron.2021.01.014(IF:17.173)
[2] Wang X, Zhang S, Jin D, et al. μ-opioidreceptoragonist underlättar cirkulerande tumörcellbildning i blåscancer via MOR/AKT/Slug-vägen: en omfattande studie inklusive randomiserad kontrollerad studie.Cancer Commun (Lond). 2023;43(3):365-386. doi:10.1002/cac2.12408(IF:16.2)
[3] Li Y, Zhou S, Song H, Yu T, Zheng X, Chu Q. CaCO3-nanopartiklar inkorporerade med KAE för att möjliggöra cancerterapi med förstärkt kalciumöverbelastning. Biomaterial. 2021;277:121080. doi:10.1016/j.biomaterials.2021.121080(IF:12.479)
[4] Xu Z, Xu J, Sun S, et al. Mecheliolid framkallar ROS-medierad ERS-driven immunogen celldöd i hepatocellulärt karcinom. Redox Biol. 2022;54:102351. doi:10.1016/j.redox.2022.102351(IF:11.799)
[5] Cai Z, Zhang Y, Zhang W, et al. Arsenikretention i erytrocyter och överdriven erytrofagocytos är relaterat till låg selenstatus genom nedsatt redoxhomeostas. Redox Biol. 2022;52:102321. doi:10.1016/j.redox.2022.102321(IF:11.799)
[6] Kaushik AC, Wu Q, Lin L, et al. Exosomal ncRNA-profilering av mykobakteriell infektion identifierade miRNA-185-5p som en ny biomarkör för tuberkulos. Kort Bioinform. 2021;22(6):bbab210. doi:10.1093/bib/bbab210(IF:11.622)
[7] Hu P, Li H, Sun W, et al. Kolesterol-associerad lysosomal störning utlöser celldöd av hematologisk malignitet: Dynamisk analys av cytotoxiska effekter av LW-218. Acta Pharm Sin B. 2021;11(10):3178-3192. doi:10.1016/j.apsb.2021.02.004(IF:11.614)
[8] Wang X, Ni J, You Y, et al. SNX10-medierad LPS-avkänning orsakar tarmbarriärdysfunktion via en kaspas-5-beroende signalkaskad. EMBO J. 2021;40(24):e108080. doi:10.15252/embj.2021108080(IF:11.598)
[9] Jiang K, Chen H, Fang Y, et al. Exosomal ANGPTL1 dämpar levermetastaser i kolorektal cancer genom att reglera Kupffer-cellsekretionsmönster och hindra MMP9-inducerad vaskulär läckage. J Exp Clin Cancer Res. 2021;40(1):21. Publicerad 2021 7 januari. doi:10.1186/s13046-020-01816-3(IF:11.161)
[10] Zhang S, Yang Z, Bao W, et al. SNX10 (sortering av nexin 10) hämmar initiering och progression av kolorektal cancer genom att kontrollera autofagisk nedbrytning av SRC. Autofagi. 2020;16(4):735-749. doi:10.1080/15548627.2019.1632122(IF:11.059)
[11] Liu L, Liang L, Yang C, Zhou Y, Chen Y. Extracellulära vesiklar av Fusobacterium nucleatum kompromissar tarmbarriären genom att rikta in sig på RIPK1-medierad celldödsväg. Tarmmikrober. 2021;13(1):1-20. doi:10.1080/19490976.2021.1902718(IF:10.245)
Betalning och säkerhet
Din betalningsinformation behandlas säkert. Vi lagrar inte kreditkortsuppgifter och har inte heller tillgång till din kreditkortsinformation.
Förfrågan
Du kanske också gillar
Vanliga frågor
Produkten är endast avsedd för forskningsändamål och är inte avsedd för terapeutisk eller diagnostisk användning hos människor eller djur. Produkter och innehåll skyddas av patent, varumärken och upphovsrätt som ägs av Yeasen Biotechnology. Varumärkessymboler anger ursprungsland, inte nödvändigtvis registrering i alla regioner.
Vissa applikationer kan kräva ytterligare immateriella rättigheter från tredje part.
Yeasen är dedikerad till etisk vetenskap, och anser att vår forskning bör behandla kritiska frågor samtidigt som den säkerställer säkerhet och etiska standarder.