UltraNuclease, även känt som ett icke-restriktivt endonukleas, bredspektrumnukleas, är ett ospecifikt endonukleas som härrör från Serratia Marcescen, som hydrolyserar interna fosfodiesterbindningar mellan alla nukleotider i nukleinsyror för att producera 5'-monofosfatbaser med längd oligonukleot 2-5. Det kan bryta ner DNA och RNA i olika former (dubbelsträngat, enkelsträngat, linjärt, cirkulärt, naturligt eller denaturerat) under ett mycket brett spektrum av förhållanden (6 M urea, 0,1 M Guanidin HCl, 0,4 % Triton X-100, 0,1 % SDS, 1 mM EDTA används brett till 1 mM EDTA, 1 mM SF 1-syra) biologiska produkter. UltraNuclease kan också tas bort med motsvarande metoder i efterhand.

Detta kit använder principen för dubbel-antikropp-sandwich-enzymkopplad immunosorbentanalys (sandwich ELISA) för att detektera resterna av denaturerat och icke-denaturerat UltraNuclease. Belägg först mikroplattan med en polyklonal anti-UltraNuclease-kaninantikropp för att bilda en fastfasantikropp. För det andra, tillsätt UltraNuclease-standard och testprov till fastfas-antikroppsmikroplattan, tillsätt sedan biotinmärkt Anti-UltraNuclease polyklonal antikropp, och slutligen, tillsätt pepparrotsperoxidas-märkt streptavidin (SA-HRP) för att bilda en antikropp + antigen + antikropp-Biotin + SA-HRP-komplex. Därefter tillsattes TMB-substrat till komplexet för att observera färgreaktion efter tvättning av komplexet. TMB omvandlas till blått under katalys av HRP-enzym och omvandlas slutligen till gult i närvaro av syra, och färgnyansen är positivt korrelerad med mängden UltraNuclease i provet.

Detektionskvantifieringsintervallet för detta kit är 0,047-3 ng/ml; den nedre detektionsgränsen är 23,5 pg/ml.

Särdrag

• Mycket känslig: Detekterar så lite som 23 pg/ml av UltraNuclease-rester i pågående och slutliga biologiska prover.
• Säkerställer noggrannhet: UltraNuclease-rester kan detekteras noggrant med en återhämtning på 80%-110%.
• Specificitet: Samarbeta med YEASEN UltraNuclease och kan noggrant detektera resterna.
• Stabil: Skillnaden mellan lot-till-lot är liten, satsegenskapen påverkas inte under 37 ℃ under 6 dagar.
• Enkel signalinsamling: Med hjälp av Biotin-Streptavidin-systemet kan signalen förstoras stabilt.
• Komplett kit: Alla nyckelkomponenter ingår i kitet, det är kostnadseffektivt att använda.

Ansökan

• Residual UltraNuclease-test i biologiska produkter

Specifikation

Komponenter

Frakt och förvaring

UltraNuclease ELISA-kitet levereras med en ispåse och kan förvaras vid 2°C ~8°C. Oöppnad produkt är giltig i ett år. När reagenset väl har öppnats är det giltigt i ett halvt år. Frys aldrig denna produkt.

Förvaring av de beredda reagenserna:

1. Den utspädda tvättbufferten och spädningsbufferten kan förvaras vid 2°C ~8°C i 1 vecka

2. Standard 36701-C är flytande och förvaras vid 2°C ~8°C i 1 år

3. Beredd detektionsantikropp och stoppbuffert kan förvaras vid 2°C ~8°C i 1 månad

Siffror

• Specificitetsdemonstration

Figurer 1. Specificiteten för UltraNuclease ELISA-kit visades i figuren ovan.

8 mimiska prover uppskattades för den icke-specifika reaktionen med antikropparna i kitet. Det fanns ingen signifikant skillnad mellan de 8 proverna och det negativa provet. （*: Signifikant skillnad från negativt urval；NS: Ingen signifikant skillnad från negativt urval）

• Precisionsdisplay

A)

B)

Figurer 2. Precisionen för UCF.ME™ UltraNuclease ELISA analyserades enligt ovan schema.

6 duplicerade testades vid varje koncentration på standardkurvan, och alla CV% var lägre än 5% (Figur 2A). 3 analytiker genomförde UCF.ME™ UltraNuclease ELISA-experimentet och CV% var lägre än 15% (Figur 2B).

• Noggrannhetsvalidering

A)

B)

Figurer 3. Noggrannheten hos UCF.ME™ UltraNuclease ELISA var analyseras enligt följande schema.

UltraNuclease spetsades i 5 μg/mL cellyslösningar (HEK293, E.coli, CHO och Vero) oberoende med en slutlig spetsad konc. av 1,5 ng/ml. Noggrannheten i olika cellprov visade utmärkt än andra leverantörer (Figur 3A). UltraNuclease spetsades i ett faktiskt prov (tillhandahållet av klienten) och är seriellt 2-faldigt utspätt från 3 ng/ml till 0,093 ng/ml. Spike-återvinningen var allt mellan 80% ~ 110% (Figur 3B).