Beskrivning
Dubbelsträngat RNA (dsRNA) uppstår som en biprodukt under in vitro-transkriptionen av mRNA. Denna biprodukt har immunogena egenskaper i människokroppen, som kan framkalla ett immunsvar, vilket följaktligen minskar mRNA-nivåerna. Detta gör dsRNA till en besvärlig processorenhet som kräver grundlig eliminering och strikt kontroll av dess kvarvarande närvaro.
För att ta itu med detta problem använder det dubbelsträngade RNA (dsRNA) ELISA-detektionssatsen de experimentella principerna för en dubbel-antikroppssandwichenzymkopplad immunanalys (ELISA) för kvantifiering av kvarvarande dsRNA. Kitet kan inte bara användas för att detektera vanliga dsRNA, utan också för att detektera peudo UTP, N1-Me-peudo UTP och 5-OMe-UTP-modifierade dsRNA.
Proceduren involverar att lägga till både en standard och testprovet på en enzymplatta (betecknad som 36717-A) som tidigare belagts med anti-dsRNA-antikroppar. Därefter tillsätts biotinmärkta dsRNA-detektionsantikroppar (36717-F) i utspädd form. Slutligen introduceras Streptavidin-HRP (SA-HRP) (36717-G) för att skapa ett komplex som består av antikroppar, antigener, biotin och SA-HRP.
Efter platttvätt initierar tillsatsen av TMB kromogen lösning (36717-K) färgutveckling. Under påverkan av HRP-enzymkatalys genomgår TMB en transformation från färglös till blå, som sedan stoppas genom applicering av stopplösningen (36717-L). I slutändan resulterar denna transformation i en gul nyans, vars intensitet korrelerar positivt med mängden dsRNA som identifieras i provet.
Detta kit tjänar ett mångsidigt syfte, vilket möjliggör optimering av den biologiska produktreningsprocessen, föroreningskontroll under mellanstadier och frisättningstestning för slutlig produktbedömning.
Pprodukt Validation Rapportera
Komponenter
| Inga. | Namn | 36717ES48 | 36717ES96 |
| 36717-A | Anti-dsRNA-belagda mikrotiterremsor | 48 T | 96 T |
| 36717-B | STD 1: omodifierad, 5 ng/μL | 7.5 μL | 15 μL |
| 36717-C | STD 2: pUTP modifierad, 5 ng/μL | 7.5 μL | 15 μL |
| 36717-D | STD 3: N1-Me-pUTP modifierad, 5 ng/μL | 7.5 μL | 15 μL |
| 36717-E | STD 4: 5-OMe-UTP modifierad, 5 ng/μL | 7.5 μL | 15 μL |
| 36717-F | Upptäckt Antikropp: Biotinkonjugerad Antikroppar (100x) | 60 μL | 120 μL |
| 36717-G | Streptavidin-HRP (100x) | 60 μL | 120 μL |
| 36717-H | Spädningsbuffert 1 | 25 ml | 50 ml |
| 36717-I | Spädningsbuffert 2 | 15 ml | 30 ml |
| 36717-J | Tvättbuffertkoncentrat（20×) | 20 ml | 40 ml |
| 36717-K | TMB-substrat | 6 ml | 12 ml |
| 36717-L | Stoppa lösning | 3 ml | 6 ml |
| 36717-M | Plattförseglare | 2 | 4 |
Frakt och förvaring
Satsen levereras med en ispåse och kan förvaras vid 2°C ~8°C. Oöppnad produkt är giltig i ett år. När reagenset väl har öppnats är det giltigt i ett halvt år. Frys aldrig denna produkt.
Instruktioner
1. Förberedelse före experiment
1) Experimentmaterial som inte ingår i detta kit men som krävs för experimentet:
a. RNase-fria tips;
b. RNasfritt centrifugrör;
c. Dammfritt papper;
d. RNas-fri provförbehandlingsplatta;
e. Avjoniserat vatten eller dubbeldestillerat vatten.
2) Instrument och utrustning som krävs men tillhandahålls inte:
a. Multifunktionell mikroplattläsare (inklusive dubbelvåglängdsdetektionsläge, täcker 450nm och 650nm; kan använda 450nm som detektionsvåglängd och 650nm som referensvåglängd);
b. Helautomatisk platttvätt, vortexblandare, konstanttemperaturblandare, centrifug;
c. Precisionsmikropipetter och flerkanalsmikropipetter med olika specifikationer;
d. Timer, 4℃ kylskåp;
e. Skakare för mikroplattor.
2. Resultatanalys
a. Om OD-värdet för provet som ska testas överstiger OD-värdet vid standardkurvans högsta punkt, måste provet spädas ut och mätas på nytt.
b. Kurvutvecklingsprocedur: Skapa en standardkurva genom att plotta standardkoncentrationerna på x-axeln och motsvarande kalibrerade standardabsorbansvärden på y-axeln. Olika ritnings- och statistiska mjukvaruverktyg kan hjälpa till att skapa standardkurvor och bestämma okända provkoncentrationer. Det är tillrådligt att använda en anpassningsmetod med fyra eller fem parametrar för detta experiment.Beräkna slutligen den kvarvarande mängden dsRNA i provet genom att hänvisa till standardkurvan och ta hänsyn till provets utspädningsfaktor.
c. Den medföljande standardkurvan är ett illustrativt exempel (endast för referensändamål). Faktiskt provinnehåll bör bestämmas med hjälp av en standardkurva som är specifikt genererad för samma experimentella standard.
3. Experimentflödesschema
Figur 5 Experimentflödesschema
4. Produktens prestanda
Prestandan för detta kit har utvärderats fullständigt. För detaljer, vänligen kontakta teknisk personal för att få motsvarande prestandaverifieringsrapport.
5. Anteckningar
- Läs denna bruksanvisning noggrant innan du använder denna sats.
- Använd denna produkt inom giltighetsperioden och det är förbjudet att blanda relaterade reagenser från olika batcher.
- Alla reagenser måste återställas till rumstemperatur före användning.
- För din säkerhet och hälsa, vänligen bär en labbrock och engångshandskar.
- Denna produkt är endast avsedd för vetenskapliga forskningsändamål.
Betalning och säkerhet
Din betalningsinformation behandlas säkert. Vi lagrar inte kreditkortsuppgifter och har inte heller tillgång till din kreditkortsinformation.
Förfrågan
Du kanske också gillar
Vanliga frågor
Produkten är endast avsedd för forskningsändamål och är inte avsedd för terapeutisk eller diagnostisk användning hos människor eller djur. Produkter och innehåll skyddas av patent, varumärken och upphovsrätt som ägs av Yeasen Biotechnology. Varumärkessymboler anger ursprungsland, inte nödvändigtvis registrering i alla regioner.
Vissa applikationer kan kräva ytterligare immateriella rättigheter från tredje part.
Yeasen är dedikerad till etisk vetenskap, och anser att vår forskning bör behandla kritiska frågor samtidigt som den säkerställer säkerhet och etiska standarder.