Beskrivning
Hieff Trans™ universella transfektionsreagens är ett multifunktionellt, bekvämt och effektivt liposomtransfektionsreagens utvecklat baserat på den senaste nanoteknologin. Den är lämplig för transfektion av DNA, RNA och oligonukleotider, inklusive primära celler, Svårtransfekterade celler, inklusive neuroner, har hög transfektionseffektivitet. Dess unika formel gör att det kan tillsättas direkt till mediet, och närvaron av serum påverkar inte transfektionseffektiviteten, vilket minskar skadorna på celler som orsakas av serumavlägsnande. Det är inte nödvändigt att ta bort nukleinsyra-transfektionsreagenskomplexet eller ersätta med färskt medium efter transfektion, och det färska mediet kan också ersättas efter 4-6 timmar beroende på cellernas näringsstatus.
Produktkomponenter
| Komponentnummer | Komponenter | Katt#/storlek | ||
| 40808ES02 | 40808ES03 | 40808ES03 | ||
| 40808-A | Universal-A | 0,5 ml | 1 ml | 5×1 ml |
| 40808-B | Universal-B | 0,5 ml | 1 ml | 5×1 ml |
Frakt och förvaring
Produkten levereras med isförpackningar och kan lagras vid 2-8 ℃ i ett år. Frys inte!
Varningar
1) Under transfektionsoperationen är det bättre att cellkonfluensen når 70%-90%, och den specifika pläteringsdensiteten bestäms i enlighet med cellernas situation.
2) Framställning av transfektionskomplex kräver utspädning av DNA och transfektionsreagens i serumfritt medium.
3) Antibiotika kan inte tillsättas till mediet under transfektion.
4) Användningen av högrent DNA eller RNA hjälper till att erhålla högre transfektionseffektivitet, och endotoxin i plasmider är transfektionens fiende.
5) Förvara vid 2-8ºC, var noga med att inte öppna locket upprepade gånger under en längre tid.
6) Nukleinsyrakoncentrationen och reagensvolymen bör optimeras för den första användningen för att erhålla maximal transfektionseffektivitet.
7) Denna produkt är endast avsedd för vetenskapliga forskningsändamål!
Instruktioner
Transfektion av DNA
[Notera] Mängden transfektionsreagens som används påverkas av celltypen och andra experimentella förhållanden. Det rekommenderas att ställa in en gradient för att optimera den optimala mängden användning för första gången.
1) Cellerna är pläterade och cellkonfluensen bör vara 70%-90% vid tidpunkten för transfektion.
2) Späd Universal-B-lösningen med Opti-MEM-medium enligt tabellen nedan och blanda försiktigt.
3) Späd DNA med Opti-MEM-medium för att erhålla DNA-premix, tillsätt sedan Universal-A-lösning och blanda försiktigt för att erhålla utspätt DNA.
4) Tillsätt det utspädda DNA:t till den utspädda Universal-B-lösningen (förhållande 1:1).
5) Inkubera vid rumstemperatur i 5 minuter.
6) Tillsätt DNA-liposomkomplexet till cellerna droppvis och blanda försiktigt.
7) Inkubera vid 37°C, 5% CO2-inkubator i 48-96 timmar tills genuttrycksanalys.
Transfektion av siRNA
Proceduren för transfektion av siRNA är densamma som för DNA-transfektion, förutom att Universal-A-lösning (steg 3) inte behöver tillsättas vid spädning av siRNA.
Tabell 1 Mängden transfektion i olika cellodlingskärl (endast för referens)
| Cellodlingskärl | 96-brunn | 24-brunn | 6-brunn | |
| Vidhäftande celler | 1-4×104 | 0,5-2×105 | 0,25-1×106 | |
| Späd Universal-B-lösningen med Opti-MEM-medium enligt tabellen nedan och blanda försiktigt. | Opti-MEM medium | 5 μL | 25 μL | 125 μL |
| Universal-B | 0,2 μL | 1 μL | 5 μL | |
| Späd DNA med Opti-MEM-medium för att erhålla DNA-premix, tillsätt sedan Universal-A-lösning och blanda försiktigt för att erhålla utspätt DNA. | Opti-MEM medium | 5 μL | 25 μL | 125 μL |
| DNA (0,5–5 μg/μL) | 0,1 μg | 0,5 μg | 2,5 μg | |
| Universal-A(2 μL/μg DNA) | 0,2 μL | 1 μL | 5 μL | |
| Tillsätt det utspädda DNA:t till den utspädda Universal-B-lösningen (förhållande 1:1). | Utspädd DNA-lösning | 5 μL | 25 μL | 125 μL |
| Universal-B | 5 μL | 25 μL | 125 μL | |
| Inkubera vid rumstemperatur i 5 minuter. | ||||
| DNA-liposomkomplex | Komponenter (varje brunn) | 96-brunn | 24-brunn | 6-brunn |
| Opti-MEM | 10 μL | 50 μL | 250 μL | |
| DNA (0,5–5 μg/μL) | 0,1 μg | 0.5 μg | 2,5 μg | |
| Universal-B | 0,2 μL | 1 μL | 5 μL | |
| Universal-A | 0,2 μL | 1 μL | 5 μL | |
| Tillsätt DNA-liposomkomplexet till cellerna droppvis och blanda försiktigt. | DNA-liposomkomplex | 10 μL | 50 μL | 250 μL |
[Notera] Det belopp som används i tabellen är endast för referens. Den specifika mängden DNA och Universal-B-lösning som används bör optimeras enligt celltypen och andra experimentella förhållanden. Det rekommenderas att hålla förhållandet mellan 1:0,5-1:5.
(1) F: Kan serum vara närvarande vid beredning av nukleinsyratransfektionsreagenskomplex?
S: Närvaron av serum kommer att påverka bildandet av liposomer. Det rekommenderas att använda serumfritt medium (vanligen MEM-medium) vid beredning av nukleinsyratransfektionsreagenskomplex.
(2) F: Kan transfektionsreagenset frysas?
S: Detta reagens måste förvaras vid 2-8°C och bör undvikas upprepade och långvariga öppnande av locket, eftersom långvarig öppning av locket kommer att orsaka liposomoxidation och påverka transfektionseffektiviteten.
(3) F: Vad ska jag vara uppmärksam på när jag använder Hieff Trans™ Universal Transfection Reagent?
S: 1) Under transfektionsoperationen är det bättre att cellkonfluensen når 70%-90%, och den specifika pläteringsdensiteten bestäms i enlighet med cellernas situation.
2) Framställning av transfektionskomplex kräver utspädning av DNA och transfektionsreagens i serumfritt medium.
3) Antibiotika kan inte tillsättas till mediet under transfektion.
4) Användningen av högrent DNA eller RNA hjälper till att erhålla högre transfektionseffektivitet, och endotoxin i plasmider är transfektionens fiende.
5) Förvara vid 2-8ºC, var noga med att inte öppna locket upprepade gånger under en längre tid.
6) Nukleinsyrakoncentrationen och reagensvolymen bör optimeras för den första användningen för att erhålla högsta transfektionseffektivitet.
(4) F: Behöver den avslutas efter transfektion?
A: Inget behov. Det är inte nödvändigt att ta bort nukleinsyra-transfektionsreagenskomplexet eller ersätta med färskt medium efter transfektion, och det färska mediet kan också ersättas efter 4-6 timmar beroende på cellernas näringsstatus.
(5) F: Kan transfektionsreagenset användas för transfektion av viral vektorförpackning?
A: Ja.Effektiviteten av viral vektorförpackning är inte nödvändigtvis relaterad till effektiviteten av transfektion, utan också till valet av förpackningsplasmider och förhållandet mellan plasmider.
Betalning och säkerhet
Din betalningsinformation behandlas säkert. Vi lagrar inte kreditkortsuppgifter och har inte heller tillgång till din kreditkortsinformation.
Förfrågan
Du kanske också gillar
Vanliga frågor
Produkten är endast avsedd för forskningsändamål och är inte avsedd för terapeutisk eller diagnostisk användning hos människor eller djur. Produkter och innehåll skyddas av patent, varumärken och upphovsrätt som ägs av Yeasen Biotechnology. Varumärkessymboler anger ursprungsland, inte nödvändigtvis registrering i alla regioner.
Vissa applikationer kan kräva ytterligare immateriella rättigheter från tredje part.
Yeasen är dedikerad till etisk vetenskap, och anser att vår forskning bör behandla kritiska frågor samtidigt som den säkerställer säkerhet och etiska standarder.