Linearized Polyethyleneimin PEI 25000 Transfection Reagent är en högladdad katjonisk polymer som enkelt binder negativt laddade nukleinsyramolekyler, bildar ett komplex och låter komplexet komma in i cellen. Transfektionsreagenset är ett transient transfektionsreagens med låg cytotoxicitet, hög transfektionseffektivitet och hög genuttryckseffektivitet i celler som HEK293 och CHO. Det har verifierats att det linjära PEI-transfektionsreagenset är allmänt tillämpbart på en mängd olika cellinjer, inklusive HEK-293, HEK293T, CHO-K1, COS-1, COS-7, NIH/3T3, Sf9, HepG2 och Hela-celler, etc. Reagenset är kompatibelt med serum-innehållande cellsyra- och syraeffektiva medier.

Specifikation

Frakt och förvaring

Produkten levereras i rumstemperatur och pulvret kan förvaras vid 2-8ºC i två år. Stamlösningen förvaras vid 2-8 ºC i 3 månader.

Varningar


1) Efter att den beredda PEI-lösningen har tagits ut från -20 ºC och tinats, kan den förvaras i ett 4 ºC kylskåp och får inte frysas igen.

2) För de flesta celler kan 3,0 μL PEI-transfektionsreagens per 1 μg DNA uppnå hög transfektionseffektivitet. Du kan också försöka använda 1,5 ~ 4 μL volym linjär PEI-transfektionsreagens per 1 μg DNA för optimering.

3) För din säkerhet och hälsa, vänligen bär en labbrock, engångshandskar och ett dragskåp för användning.

4) Denna produkt är endast avsedd för vetenskapliga forskningsändamål, inte för mänskligt bruk.

Stamlösningsberedning (1 mg/ml)


1. Material

PEI 25000, Milli-Q® vatten/vatten för injektion (WFI) eller liknande vatten av biologisk kvalitet, 12 mol/L saltsyra (HCl), 10 mol/L natriumhydroxid (NaOH), engångs 0,1~0,2 μm PES vakuum sterilt filter, steril HDPE eller polypropen förvaringsflaska.

2. Bered stamlösning (1 mg/ml)

1) I en 1 L glasbägare, tillsätt 1 g PEI 25000-pulver i 900 ml Milli-Q® ultrarent vatten eller annat likvärdigt biologiskt vatten, och rör om jämnt på en magnetisk omrörare för att skapa en liten virvel.

2) Tillsätt saltsyra (12 mol/L) droppvis under omrörning för att justera pH tills pH <2,0.

3) Täck toppen av bägaren och rör om i 3 timmar tills den är helt upplöst; håll pH < 2,0 under hela processen.

【Obs】: Det kan finnas några små fibrösa partiklar som inte kan lösas upp, vilket är ett normalt fenomen.

4) Tillsätt NaOH (10 mol/L) droppvis under omrörning för att justera pH tills det når 6,9 ~7,1.

5) Överför lösningen till en graderad cylinder och tillsätt vatten för att fylla upp till 1 L.

6) Filtrera och sterilisera med ett 0,1-0,2 µm PES-vakuumfilter för engångsbruk för att erhålla en 1 mg/ml stamlösning.

7) Alikvotera efter behov och förvara vid -20 °C, stabilt i 1 år.

【Obs】: Efter att ha tinat upp förvaringslösningen kan den förvaras vid 4 °C och är stabil i 2 veckor, men den får inte frysas igen

Transfektionsförfarande (med 6-brunnars platta som ett exempel)


1. Cellympning: För att förbättra transfektionseffektiviteten rekommenderas det att inokulera cellerna en dag före transfektion, och celldensiteten vid tidpunkten för transfektion är företrädesvis 70%~80%.

2. Förbered DNA-PEI-komplexet: Förbered DNA-PEI-nukleinsyra-transfektionsreagenskomplexet enligt följande system:

1) För varje brunn av celler, späd 2 μg mål-DNA med 100 μL serumfritt medium och blanda noggrant för att bilda en DNA-spädning.

[Notera]: Opti-MEM eller ddH2O rekommenderas för serumfritt spädningsmedel

2) Tillsätt omedelbart 5 μL PEI 25000 transfektionsreagens till 100 μL DNA-spädningsmedel, vortexa i 10 sekunder och blanda väl.

3) Inkubera vid rumstemperatur i 10-25 minuter för att bilda DNA-PEI katjonisk nukleinsyratransfektionsreagenskomplex.

3. Transfekterade celler:

1) Under komplexbildning, ta bort celltillväxtmediet och tillsätt 2 mL färskt förvärmt komplett medium till varje brunn.

2) Tillsätt 100 μL DNA-PEI-nukleinsyra-PEI-komplex direkt till cellerna, skaka odlingsplattan och blanda försiktigt.

3) Odla i en 37°C, 5% CO2-inkubator, och uttrycket av transgenen kan detekteras så snart som 7 timmar efter transfektion. Bestäm lämplig testtid själv.

4. Skärning med stadig rotation (valfritt)

24 timmar efter transfektion subodlades cellerna i färskt tillväxtmedium (spädde ut cellerna mer än 10 gånger) och inkuberades över natten vid 37 ° C i en 5% CO2-inkubator. Nästa dag tillsattes ett screeningläkemedel som matchade transfektionsresistensgenen. Läkemedelsresistenta kloner kan screenas på cirka 1 till 2 veckor. Under denna period måste odlingsmediet som innehåller screeningläkemedlen bytas ut ofta.

Transfektionsdosering för olika cellodlingskärl (endast för referens):