แอนติบอดีรอง คืออะไร?
แอนติบอดีทุติยภูมิคือแอนติบอดีที่สามารถจับกับแอนติบอดีปฐมภูมิได้ โดยส่วนใหญ่ใช้เพื่อตรวจหาการมีอยู่ของแอนติบอดีปฐมภูมิ แอนติบอดีปฐมภูมิจะจับกับแอนติเจนโดยเฉพาะ และแอนติบอดีทุติยภูมิจะจับกับแอนติบอดีปฐมภูมิโดยเฉพาะ กล่าวอีกนัยหนึ่ง ภูมิภาค Fc หรือชิ้นส่วน Fab ของแอนติบอดีปฐมภูมิสามารถทำหน้าที่เป็นแอนติเจนเพื่อกระตุ้นให้ร่างกายผลิตแอนติบอดี กล่าวคือ แอนติบอดีปฐมภูมิส่วนใหญ่เป็นอิมมูโนโกลบูลินคลาส IgG ดังนั้นแอนติบอดีทุติยภูมิจึงเป็นแอนติบอดีต่อต้าน IgG
บทบาทของแอนติบอดีรอง
แอนติบอดีปฐมภูมิจะจับกับโปรตีนเป้าหมายโดยเฉพาะ และแอนติบอดีปฐมภูมิจะต้องติดฉลากด้วยสารเรืองแสงหรือกลุ่มโครโมเจนิก ไม่สามารถดูได้ด้วยตาเปล่าว่าแอนติบอดีปฐมภูมิ ผูก โปรตีน อย่างไรก็ตาม แอนติบอดีปฐมภูมิค่อนข้างจำเพาะ และแต่ละชนิดมีการติดฉลากด้วยต้นทุนที่สูง เป็นเรื่องปกติที่จะใช้แอนติบอดีทุติยภูมิที่มีฉลากที่สามารถจับกับแอนติบอดีปฐมภูมิได้และมีฉลากที่ตรวจจับได้ (เช่น กลุ่มเรืองแสง กลุ่มกัมมันตภาพรังสี กลุ่มเคมีเรืองแสง หรือกลุ่มโครโมเจนิก) ดังนั้นการออกแบบปัจจุบันโดยทั่วไปจะมีแอนติบอดีทุติยภูมิพร้อมฉลากที่ตรวจจับได้เพื่อตรวจจับแอนติบอดีปฐมภูมิ ในขณะที่แอนติบอดีปฐมภูมิจะจดจำสารตั้งต้น ด้วยวิธีนี้ เมื่อแอนติบอดีปฐมภูมิจับกับสารตั้งต้น ก็สามารถตรวจจับได้ผ่านแอนติบอดีทุติยภูมิ
เช่น หลักการเรืองแสง ECL: ในสารตั้งต้น ECL มี H2โอ้2 และลูมินอล (และอนุพันธ์) ซึ่งเปล่งแสงเรืองแสงภายใต้การทำงานของ HRP (เอนไซม์เปอร์ออกซิเดสจากพืชตระกูลฮอร์สแรดิช)
จุดสำคัญในการใช้แอนติบอดีรอง
แอนติบอดีรองคือแอนติบอดีที่ผลิตโดยการสร้างภูมิคุ้มกันให้สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม (โดยปกติจะสร้างภูมิคุ้มกันให้แพะ ม้า ลา ล่อ และหนูตะเภา เป็นต้น) ด้วยอิมมูโนโกลบูลิน IgG ของแอนติบอดีหลักชนิดย่อยบางประเภท (เช่น กระต่าย หนู) ดังนั้นแอนติบอดีรองจึงจับกับชนิดและชนิดย่อยเฉพาะของแอนติบอดีหลักเท่านั้น ตัวอย่างเช่น แอนติบอดีของแกะสำหรับหนู (แอนติบอดีรอง) จะจับกับโมโนโคลนัลของหนู (แอนติบอดีหลัก) โดยเฉพาะ และจะไม่จับกับโพลีโคลนัลของกระต่ายหรือโมโนโคลนัลของหนู
เครื่องหมายการจับคู่ของแอนติบอดีรอง
วิธีการทดลองที่แตกต่างกันจะส่งผลให้เกิดกลุ่มการจับคู่ที่แตกต่างกันสำหรับแอนติบอดีรอง ซึ่งส่วนใหญ่คือเอนไซม์ (horseradish peroxidase/HRP และ alkaline phosphatase/AP) กลุ่มเรืองแสง (FITC, Rhodamine, PE, Dylight, Alexa Fluor, cy3 เป็นต้น) ไบโอติน อนุภาคทองคำ เป็นต้น โดยทั่วไป แอนติบอดีรองที่ติดฉลากด้วย HRP ขอแนะนำสำหรับการทดลอง เช่น WB, ELISA, IHC และแอนติบอดีรองที่ติดฉลากด้วยไบโอตินขอแนะนำสำหรับ IHC ในขณะที่ฉลากเรืองแสงเช่น Alexa Fluor 488, FITC, PE ใช้สำหรับ IF, FC เป็นต้น
วิธีการเลือกแอนติบอดีรองให้เหมาะสม
ก. อิมมูโนบล็อตติ้ง (WB)
เลือกแอนติบอดีรองที่ติดฉลากด้วยเอนไซม์เปอร์ออกซิเดสจากพืชชนิดหนึ่งหรือฟอสฟาเตสด่างสำหรับเวสเทิร์นบล็อตแบบดั้งเดิม เลือกแอนติบอดีรองที่ติดฉลากด้วยสารเรืองแสงที่สอดคล้องกันสำหรับเวสเทิร์นบล็อตเรืองแสง
ข. อิมมูโนฮิสโตเคมี (IHC/ICC)
B. สำหรับ ICC (Immunocytochemistry) ให้เลือกแอนติบอดีรองที่มีฉลากไบโอติน
C. อิมมูโนฟลูออเรสเซนต์ (IHF/ICF)
การตกตะกอนภูมิคุ้มกันมักจะช่วยให้เลือกใช้แอนติบอดีรองที่จำเพาะต่อ Fc หรือ Fab ได้ แอนติบอดีรองดังกล่าวสามารถหลีกเลี่ยงการรบกวนจากห่วงโซ่หนัก (น้ำหนักโมเลกุล 55 kDa) หรือห่วงโซ่เบา (น้ำหนักโมเลกุล 25 kDa) ได้
ข้อมูลสินค้าแนะนำ
| กลุ่มฉลาก | หมายเลขสินค้า | ชื่อสินค้า |
| ไม่มีเครื่องหมาย | 34850ES | แพะป้องกันกระต่าย lgG(H+L) |
| 34851ES | แพะต่อต้านเมาส์ lgG(H+L) | |
| 34847ES | ลา แอนตี้ฮิวแมน ไอจีจี(เอช+แอล) | |
| เอชอาร์พี | 33101ES | เปอร์ออกซิเดส แอฟฟินิเพียว แพะ แอนตี้-แรบบิท IgG (H+L) |
| 33201ES | เปอร์ออกซิเดส แอฟฟินิเพียว แพะ แอนตี้เมาส์ IgG (H+L) | |
| 33301ES | เปอร์ออกซิเดส แอฟฟินิเพียว แพะ แอนตี้-แรท IgG (H+L) | |
| 33401ES | เปอร์ออกซิเดส แอฟฟินิเพียว แพะ แอนตี้-แกส พิก IgG(H+L) | |
| 33501ES | เอนไซม์ฮอร์สแรดิชเปอร์ออกซิเดสจากแพะ แอนติ-ฮิวแมน IgG (H+L) | |
| 33701ES | เปอร์ออกซิเดส แอฟฟินิเพียว แรบบิท แอนติ-แพะ IgG (H+L) | |
| 33801ES | เปอร์ออกซิเดส แอฟฟินิเพียว แอนตี้-แกะ IgG (H+L) | |
| 34201ES | เปอร์ออกซิเดส แอฟฟินิเพียว ดองกี้ แอนตี้-แรบบิท ไอจีจี (เอช+แอล) | |
| 34101ES | เปอร์ออกซิเดส แอฟฟินิเพียว ดองกี้ แอนติเมาส์ IgG (H+L) | |
| 34301ES | เปอร์ออกซิเดส แอฟฟินิเพียว ดองกี้ แอนตี้-แพะ IgG (H+L) | |
| 33101ES | เปอร์ออกซิเดส แอฟฟินิเพียว แพะ แอนตี้-แรบบิท IgG (H+L) | |
| สีเขียวเรืองแสง | 33106ES | YSFluor™ 488 แพะต่อต้านกระต่าย IgG (H+L) |
| 33126ES | YSFluor™ 488 แพะต่อต้าน IgG ของมนุษย์ (H+L) | |
| 33206ES | YSFluor™488 แพะต่อต้านเมาส์ IgG (H+L) | |
| 33306ES | YSFluor™ 488 แพะต่อต้าน IgG วัว (H+L) | |
| 33406ES | YSFluor™ 488 แพะป้องกันหนูตะเภา IgG (H+L) | |
| 33706ES | YSFluor™488 กระต่ายต่อต้านแพะ IgG (H+L) | |
| 33906ES | YSFluor™ 488 กระต่ายต่อต้าน IgG ของเมาส์ (H+L) | |
| 34906ES | YSFluor™488 Donkey แอนตี้แกะ IgG (H+L) | |
| 34106ES | YSFluor™488 Donkey แอนตี้เมาส์ IgG (H+L) | |
| 34206ES | YSFluor™488 Donkey แอนตี้-แรบบิท IgG (H+L) | |
| 34306ES | YSFluor™ 488 Donkey แอนตี้แพะ IgG (H+L) | |
| 34406ES | YSFluor™ 488 Donkey แอนตี้-แรท IgG (H+L) | |
| 34506ES | YSFluor™488 ลา แอนตี้-แกสบี้ อิกจี (H+L) | |
| 34606ES | YSFluor™488 ลา แอนตี้-ไก่ IgG (H+L) | |
| 34706ES | YSFluor™488 กระต่ายต่อต้านไก่ IgY(H+L) | |
| 34806ES | YSFluor™488 ดองกี้ แอนตี้ฮิวแมน IgG (H+L) | |
| 34856ES | FITC AffiniPure แพะต่อต้านมนุษย์ IgG(H+L) | |
| 33107ES | FITC-AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) | |
| 33207ES | FITC-AffiniPure แพะต่อต้าน IgG ของเมาส์ (H+L) | |
| 33307ES | FITC-AffiniPure Goat Anti-Rat IgG (H+L) | |
| 33707ES | FITC-AffiniPure กระต่ายต่อต้านแพะ IgG (H+L) | |
| 33807ES | FITC-AffiniPure กระต่ายต่อต้าน IgG แกะ (H+L) | |
| โรดามีน | 33109ES | โรดามีน (TRITC) แพะต่อต้านกระต่าย IgG (H+L) |
| 33209ES | โรดามีน (TRITC) แพะต่อต้านเมาส์ IgG (H+L) | |
| 33709ES | โรดามีน (TRITC) แอฟฟินิเพียว แรบบิท แอนตี้-แพะ IgG (H+L) | |
| 33210ES | โรดามีน เรด-เอ็กซ์ (RRX) แพะ แอนตี้เมาส์ IgG (H+L) | |
| สีส้มเรืองแสง | 33112ES | YSFluor™594 AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) |
| 33212ES | YSFluor™ 594 แพะต่อต้านเมาส์ IgG (H+L) | |
| 33222ES | YSFluor™ 594 แพะต่อต้าน IgG ของมนุษย์ (H+L) | |
| 33412ES | YSFluor™594 แพะป้องกันหนูตะเภา IgG (H+L) | |
| 33312ES | YSFluor™ 594 แพะต่อต้าน IgG วัว (H+L) | |
| 33712ES | YSFluor™594 กระต่ายต่อต้านแพะ IgG (H+L) | |
| 33812ES | YSFluor™ 594 แอนตี้-แกะ IgG (H+L) สำหรับกระต่าย | |
| 33912ES | YSFluor™594 กระต่ายต่อต้านเมาส์ IgG (H+L) | |
| 34712ES | YSFluor™594 กระต่ายต่อต้านไก่ IgY (H+L) | |
| 34112ES | YSFluor™ 594 Donkey แอนตี้เมาส์ IgG (H+L) | |
| 34212ES | YSFluor™594 Donkey แอนตี้-แรบบิท IgG (H+L) | |
| 34312ES | YSFluor™ 594 ลา แอนตี้-แพะ IgG (H+L) | |
| 34412ES | YSFluor™ 594 Donkey แอนตี้-แรท IgG (H+L) | |
| 34512ES | YSFluor™594 ลา แอนตี้-แกสบี้ อิกจี (H+L) | |
| 34612ES | YSFluor™594 ลา แอนตี้-ไก่ IgG (H+L) | |
| 34812ES | YSFluor™594 ดองกี้ แอนติฮิวแมน IgG (H+L) | |
| 34912ES | YSFluor™594 Donkey แอนตี้แกะ IgG (H+L) | |
| 33208ES | Cy3-AffiniPure แพะต่อต้านเมาส์ IgG (H+L) | |
| 33308ES | Cy3-AffiniPure แพะต่อต้านหนู IgG (H+L) | |
| 33708ES | Cy3-AffiniPure กระต่ายต่อต้านแพะ IgG (H+L) | |
| 33808ES | Cy3-AffiniPure กระต่ายต่อต้านแกะ IgG (H+L) | |
| 34855ES | Cy3-AffiniPure Donkey แอนตี้-แพะ IgG(H+L) | |
| การเรืองแสงสีแดง | 33113ES | YSFluor™647 แพะต่อต้านกระต่าย IgG (H+L) |
| 33213ES | YSFluor™ 647 แพะต่อต้านเมาส์ IgG (H+L) | |
| 33223ES | YSFluor™647 แพะต่อต้าน IgG ของมนุษย์ (H+L) | |
| 33313ES | YSFluor™ 647 แพะต่อต้าน IgG วัว (H+L) | |
| 33413ES | YSFluor™ 647 แพะป้องกันหนูตะเภา IgG (H+L) | |
| 33713ES | YSFluor™ 647 กระต่ายต่อต้านแพะ IgG (H+L) | |
| 33813ES | YSFluor™647 กระต่ายต่อต้าน IgG แกะ (H+L) | |
| 33913ES | YSFluor™ 647 กระต่ายต่อต้านเมาส์ IgG (H+L) | |
| 34713ES | YSFluor™647 กระต่ายต่อต้านไก่ IgY (H+L) | |
| 34113ES | YSFluor™ 647 Donkey แอนตี้เมาส์ IgG (H+L) | |
| 34213ES | YSFluor™ 647 Donkey แอนตี้-แรบบิท IgG (H+L) | |
| 34413ES | YSFluor™ 647 Donkey แอนตี้-แรท IgG (H+L) | |
| 34813ES | YSFluor™647 ดองกี้ แอนตี้ฮิวแมน IgG (H+L) | |
| 34913ES | YSFluor™647 Donkey แอนตี้แกะ IgG (H+L) |
อ้างอิง
[1]จาง บี, หวัง เอช, เหลียว เจ. และคณะอนุภาคนาโนที่จับคู่กับ EGFP–EGF1 เพื่อกำหนดเป้าหมายทั้งเซลล์หลอดเลือดใหม่และเซลล์กาวเนื้อสมองในการบำบัดเซลล์กาวเนื้อสมอง[J] Biomaterials, 2014, 35(13): 4133-4145. IF: 8.387[2]Yu X, Wang J, Liu J และคณะ นาโนเอเจนต์เปปไทด์เปปสแตตินเอแบบหลายโหมดสำหรับการสร้างภาพโมเลกุลของ P-glycoprotein ในสมองของหนูที่เป็นโรคลมบ้าหมู[J] Biomaterials, 2016, 76: 173-186 ถ้า:8.402
[3]Liu J, He Y, Zhang J และคณะ ฟังก์ชันนาโนแคริเออร์รวมเวกเตอร์เฉพาะอาการชักที่มีคุณสมบัติปรับเปลี่ยน P-glycoprotein สำหรับการส่งยาต้านโรคลมบ้าหมู[J] Biomaterials, 2016, 74: 64-76. IF:8.402
[4]Ma Y, Ji Y, You M และคณะ การติดฉลากและการติดตามระยะยาวของเซลล์ต้นกำเนิดของเนื้อเยื่อเกี่ยวพันในไขกระดูกในหลอดทดลองโดยใช้อนุภาคนาโน NaYF 4: Yb 3+, Er 3+ อัพคอนเวอร์ชั่น[J] Acta biomaterialia, 2016, 42: 199-208. IF: 6.638
[5]Wang Y, Lin YX, Qiao SL และคณะ อนุภาคนาโนโพลิเมอร์ช่วยย้อนกลับแมคโครฟาจในสภาพแวดล้อมจุลภาคของเนื้องอกเพื่อภูมิคุ้มกันบำบัด[J] Biomaterials, 2017, 112(15): 3e163. IF:8.806
[6] Liu C, He X, Liu W และคณะ การกลายพันธุ์แบบไบอัลลีลใน TTC29 ทำให้เกิดภาวะมีบุตรยากในชายด้วย Asthenoteratospermia ในมนุษย์และหนู[J]. วารสารพันธุศาสตร์มนุษย์แห่งอเมริกา 2562, 105(6): 1168-1181. 34106ES60 ถ้า:9.924
[7]Xu T, Ding W, Ao X และคณะ ARC ควบคุมการตายของเซลล์ตามโปรแกรมและการบาดเจ็บจากการขาดเลือด/การไหลเวียนเลือดกลับคืนสู่กล้ามเนื้อหัวใจผ่านการยับยั้งการเปิด mPTP[J] Redox biology, 2019, 20: 414-426.IF（7.126）（Alexa Fluor 488）
[8] Tan T, Wang Y, Wang J และคณะ การกำหนดเป้าหมายไลโปโปรตีนที่ตกแต่งโดยเปปไทด์ช่วยเพิ่มการแทรกซึมลึกและการเข้าถึงเซลล์มะเร็งในเนื้องอกแข็ง Acta Pharm Sin B. 2020;10(3):529-545 Alexa Fluor 488 ติดฉลาก IgG (H+L)IF: 7.097
[9] ไฮโดรเจล Photoclick สำหรับการทำอิมมูโนบล็อตเซลล์เดี่ยวขั้นสูง [J] วัสดุฟังก์ชันขั้นสูง 2020, 30.33112ES60 ถ้า: 16.836
[10] Bingcheng Yi a,b,1, Lei Yuc,1, Han Tanga และคณะ เคลือบโพลีโดปามีนที่เจือด้วยไลซีน ฤทธิ์ต้านการเกิดลิ่มเลือดและการสร้างหลอดเลือดฝอยที่เรียงตัวกันด้วยกระแสไฟฟ้า กราฟท์..Applied Materials วันนี้ 2021. 33207ES60 ถ้า:10.041