1 กลไกการออกฤทธิ์ของ Blasticidin S
บลาสติซิดิน เอส เป็นยาปฏิชีวนะประเภทนิวคลีโอไซด์ที่สกัดจาก Streptomyces griseochromogenes ซึ่งยับยั้งการสังเคราะห์โปรตีนในเซลล์โพรคาริโอตและยูคาริโอตโดยเฉพาะโดยขัดขวางการสร้างพันธะเปปไทด์ในไรโบโซม กลไกการออกฤทธิ์ ได้แก่ การบล็อกการไฮโดรไลซิสของเปปไทดิล-tRNA ที่เกิดจากปัจจัยการปลดปล่อย และเพิ่มการจับของ tRNA กับซับยูนิตไรโบโซมขนาดใหญ่ จึงยับยั้งการสร้างพันธะเปปไทด์ได้ในระดับหนึ่ง
บลาสติซิดิน เอส มีฤทธิ์รวดเร็วและแรง และความเข้มข้นของยาปฏิชีวนะที่ต่ำมากสามารถนำไปสู่การตายของเซลล์ได้อย่างรวดเร็ว ไม่เพียงแต่ยับยั้งการสังเคราะห์โปรตีนในแบคทีเรียและยูคาริโอตได้อย่างมีนัยสำคัญเท่านั้น แต่ยังมีฤทธิ์ต่อเชื้อรา ไส้เดือนฝอย และเซลล์เนื้องอกอีกด้วย พลาทิซิดิน เอส มักใช้ในการคัดกรองเซลล์ที่ถูกถ่ายโอนยีนที่มียีน BSR หรือ BSD
2 การประยุกต์ใช้ Blasticidin S
2.1 การเพาะเลี้ยงเซลล์และการคัดกรอง
- เซลล์ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม: มักใช้ Blast S เพื่อคัดกรองเซลล์ที่ถูกถ่ายโอนยีน bsr หรือ BSD ยีนต้านทานเหล่านี้ ซึ่งมาจาก B. cereus และ Aspergillus ตามลำดับ สามารถเปลี่ยน Murancidin ให้เป็นอนุพันธ์ที่ไม่ก่อโรคได้ จึงทำให้สามารถฆ่าเซลล์ได้อย่างเลือกสรรโดยไม่ต้องมียีนต้านทาน โดยความเข้มข้นของ Blasticidin S ในเซลล์ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมจะอยู่ระหว่าง 1 ถึง 50 μg/mL
| ซีเอล | จีเอนัส | โอ้การจัดระเบียบ | ซีสื่อผสม | ความเข้มข้นของ Blasticidin S (μg/mL) |
| เฮล่า | มนุษย์ | มดลูก | ดีเอ็มอีเอ็ม | 3-10 |
| เอชอีเค293 | มนุษย์ | ไต | ดีเอ็มอีเอ็ม | 3-10 |
| บี16 | หนู | เนื้องอกสีดำ | RPMI | 3-10 |
| พีซี1.0 | หนูแฮมสเตอร์ | มะเร็งต่อมน้ำเหลือง | RPMI | 10-30 |
| โช | หนูแฮมสเตอร์ | รังไข่ | ดีเอ็มอีเอ็ม | 5-15 |
- การคัดเลือกแบคทีเรีย: ในการเพาะเลี้ยงแบคทีเรีย ความเข้มข้นที่แนะนำที่ 25-100 µg/mL สามารถทำให้เซลล์ที่ไม่มียีนต้านทานตายได้อย่างรวดเร็ว
E.coli มีความไวต่อ Blasticidin S น้อยกว่าเล็กน้อย แต่สิ่งมีชีวิตที่เปลี่ยนรูปสามารถทนต่อ Blasticidin S ได้ และสามารถคัดกรองได้ด้วยอาหาร LB ที่มีปริมาณเกลือต่ำ (pH 8) ในช่วงความเข้มข้น 50-100 μg/mL Blasticidin S และค่า pH ที่สูงจะช่วยเพิ่มการทำงานของ Blasticidin S
- เซลล์พืช: สามารถประยุกต์ใช้กับการทดลองถ่ายโอนยีนในเซลล์พืชได้เช่นกัน โดย BSR และ BSD มักใช้เป็นเครื่องหมายคัดกรอง
2.2 การวิจัยเกี่ยวกับการสังเคราะห์โปรตีน
- Blasticidin Swas ใช้เพื่อศึกษาขั้นตอนสังเคราะห์โปรตีนในระดับการสร้างพันธะเปปไทด์ โดยเฉพาะอย่างยิ่งในเซลล์ HEK293-T และเซลล์ HEK-D5 ของโครงสร้าง TLR-2
2.3 คุณสมบัติต้านเชื้อรา
- นอกจากนี้ยังมีฤทธิ์ต้านเชื้อราบางชนิด ซึ่งสามารถใช้ป้องกันและรักษาโรคไหม้ข้าวได้ ฤทธิ์ฆ่าเชื้อแบคทีเรียส่วนใหญ่มีผลต่อการสังเคราะห์โปรตีน และสามารถยับยั้งการงอกของสปอร์ การพัฒนาเส้นใย และการสร้างสปอร์ได้
2.4 แอปพลิเคชันอื่น ๆ
- Blasticidin Shas ยังถูกนำมาใช้เพื่อศึกษาผลการยับยั้งของเซลล์เนื้องอกด้วย
- ยังทำหน้าที่เป็นตัวแทนการคัดเลือกสำหรับเซลล์ที่ถูกเปลี่ยนรูปซึ่งมียีนต้านทาน bls, bsr หรือ BSD
ขั้นตอนการทดลอง 3 ขั้นตอนที่เกี่ยวข้องกับ Blasticidin S (การคัดกรองทรานส์เฟกต์ที่เสถียรของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม)
1) โดยทั่วไปจะใช้ Blasticidin S ในความเข้มข้น 10 μg/mL เซลล์จะถูกถ่ายโอนยีนด้วยพลาสมิดที่มียีน bsr หรือ BSD และฟักในอาหารเลี้ยงเชื้อปกติที่มี Blasticidin S เพื่อคัดเลือกทรานส์เฟกต์ที่เสถียร
2) หลังจากถ่ายยีนไปแล้ว 48 ชั่วโมง ให้นำเซลล์ไปแช่ในอาหารเลี้ยงเชื้อสดที่มี Blasticidin S ในความเข้มข้นที่เหมาะสม (หมายเหตุ: ยาปฏิชีวนะจะได้ผลดีที่สุดเมื่อเซลล์อยู่ในช่วงการแบ่งตัว ประสิทธิภาพของยาปฏิชีวนะจะลดลงหากความหนาแน่นของเซลล์สูงเกินไป เมื่อแบ่งเซลล์ การรวมตัวไม่ควรเกิน 25%)
3) ทุก 3-4 วัน ให้เอาอาหารเลี้ยงเชื้อที่ใช้แล้วออก แล้วเติมอาหารเลี้ยงเชื้อใหม่ที่มีสารปฏิชีวนะลงไป
4) หลังจากผ่านไป 7 วัน ให้ตรวจสอบการก่อตัวของกลุ่มเซลล์ ขึ้นอยู่กับชนิดของเซลล์โฮสต์และประสิทธิภาพของการถ่ายโอน/การคัดเลือก การสร้างกลุ่มเซลล์อาจต้องใช้เวลาเพิ่มเติมอีกหนึ่งสัปดาห์หรือมากกว่านั้น
5) ถ่ายโอนโคลนต้านทาน 5-10 โคลนลงในจานเพาะเลี้ยงเซลล์ขนาด 35 มม. และเก็บรักษาในอาหารเลี้ยงเชื้อแบบเลือกเป็นเวลา 7 วัน จากนั้นทำการทดสอบความเป็นพิษต่อเซลล์
4 คำแนะนำสินค้า
| ชื่อสินค้า | แมว# | ข้อมูลจำเพาะ | รูปร่าง |
| บลาสติซิดิน เอส เลขทะเบียน CAS: 3513-03-9 | 60218ES10 | 10 มิลลิกรัม | สารละลาย (10 มก./มล. ใน HEPES) บัฟเฟอร์ pH 7.5） |
| 60218ES50 | 5×10 มิลลิกรัม | ||
| 60218ES60 | 10×10 มิลลิกรัม | ||
| 60218ES80 | 1 จี | ผง (เตรียมสารละลายสต็อก 5-10 มก./มล. ด้วยน้ำปราศจากเชื้อหรือบัฟเฟอร์เมื่อใช้) |
5 บทความที่ตีพิมพ์โดยใช้สารเคมีของเรา
[1] Mo J, Tan K, Dong Y, Lu W, Liu F, Mei Y, Huang H, Zhao K, Lv Z, Ye Y, Tang Y การกำหนดเป้าหมายการรักษาตัวขับเคลื่อนก่อมะเร็ง EWSR1::FLI1 ในมะเร็งซาร์โคมา Ewing ผ่านการยับยั้งคอมเพล็กซ์ FACT Oncogene 2023 ม.ค.;42(1):11-25 doi: 10.1038/s41388-022-02533-1 Epub 2022 พ.ย. 10 PMID: 36357572 (ถ้า:8.0-
[2] Tan K, Mo J, Li M, Dong Y, Han Y, Sun X, Ma Y, Zhu K, Wu W, Lu L, Liu J, Zhao K, Zhang L, Tang Y, Lv Z. วงจรป้อนกลับเชิงบวก SMAD9-MYCN แสดงถึงความสัมพันธ์เฉพาะตัวสำหรับเนื้องอกของเซลล์ประสาทที่ขยายตัวโดย MYCN J Exp Clin Cancer Res. 2022 Dec 20;41(1):352. doi: 10.1186/s13046-022-02563-3. PMID: 36539767; PMCID: PMC9764568(ถ้า:11.3-
6 สินค้าที่เกี่ยวข้อง
| ชื่อสินค้า | แมว# | ข้อมูลจำเพาะ |
| ซิโปรฟลอกซาซิน ไฮโดรคลอไรด์ | 60201ES05/25/60 | 5/25/100กรัม |
| แอมพิซิลลิน โซเดียมซอลท์ | 60203ES10/60 | 10/100กรัม |
| ดอกซีไซคลินไฮเคลต | 60204ES03/08/25 | 1/5/25กรัม |
| คลอแรมเฟนิคอล เกรด USP | 60205ES08/25/60 | 5/25/100กรัม |
| คาเนมัยซินซัลเฟต | 60206ES10/60 | 10/100กรัม |
| เตตราไซคลิน HCl เตตราไซคลินไฮโดรคลอไรด์ (USP) | 60212ES25/60 | 25/100กรัม |
| แวนโคไมซินไฮโดรคลอไรด์ | 60213ES60/80/90 | 100มก./1ก./5ก. |
| เกลือเจนตามัยซินซัลเฟต | 60214ES03/08/25 | 1/5/25กรัม |
| สเปกติโนไมซิน ไฮโดรคลอไรด์ | 60215ES08 | 5กรัม |
| เฟลโอไมซิน (20 มก./มล. ในสารละลาย) | 60217ES20/60 | 20/5×20มก. |
| บลาสติซิดิน เอส (บลาสติซิดิน) | 60218ES10/60 | 10/10×10มก. |
| ไนสแตติน | 60219ES08 | 5กรัม |
| G418 ซัลเฟต (เจเนติซิน) | 60220ES03/08 | 1/5กรัม |
| พูโรไมซิน (สารละลาย 10 มก./มล.) | 60209ES10/50/60/76 | 1×1 /5 ×1 / 1 0 ×1 /50 ×1 มล. |
| พูโรไมซิน ไดไฮโดรคลอไรด์ | 60210ES25/60/72/76/80 | 25/100/250/500 มก. / 1 ก. |
| ไฮโกรไมซิน บี (50 มก./มล.) | 60224ES03 | 1 กรัม (20 มล.)/10×1 กรัม (20 มล.) |
| ไฮโกรไมซิน บี | 60225ES03/10 | 1/10กรัม |
| อีริโทรไมซิน | 60228ES08/25 | 5/25กรัม |
| ทิเมนติน | 60230ES07/32 | 3.2/10×3.2กรัม |
| ออเรโอบาซิดิน เอ (AbA) | 60231ES03/08/10 | 1/5×1/10×1มก. |
| โพลีมิกซินบีซัลเฟต | 60242ES03/10 | 1/10หมู่ |