รูปที่ 1 สูตรโครงสร้างของ AbA, CAS#127785-64-2

งานวิจัยพบว่ายีน AUR1 ของ Saccharomyces cerevisiae และยีน AURA ของ Aspergillus nidulans เป็นยีนที่เหมือนกัน โดยทั้งคู่เข้ารหัส IPC synthase ดังนั้น การกลายพันธุ์ในยีนทั้งสองนี้จึงสามารถทำให้เกิดความต้านทาน AbA ต่อสายพันธุ์ได้อย่างมาก เช่น ยีนที่กลายพันธุ์ AUR1-C AbA เหมาะมากสำหรับใช้เป็นเครื่องหมายการคัดเลือกยาเพื่อคัดกรองโคลนที่มีผลบวก และไม่จำเป็นต้องมีการปรับสภาพให้เหมาะสม โดยมีพื้นหลังที่ต่ำมาก ความต้านทาน AbA ยังเป็นตัวรายงานที่เหมาะสำหรับการศึกษายีสต์ไฮบริดเดี่ยว/คู่ และเข้ากันได้กับระบบยีสต์ไฮบริดที่มีความต้านทานที่สอดคล้องกัน

ระบบไฮบริดยีสต์เดี่ยว/คู่คืออะไร

ระบบยีสต์ทูไฮบริด (Yeast two-hybrid assay) สร้างขึ้นโดย Fields และ Song และคนอื่นๆ โดยอาศัยลักษณะเฉพาะของการควบคุมการถอดรหัสของยูคาริโอต ระบบนี้สามารถวิเคราะห์การโต้ตอบระหว่างโปรตีนที่รู้จักได้อย่างรวดเร็วและโดยตรง และใช้กันอย่างแพร่หลายในการศึกษาการโต้ตอบระหว่างแอนติเจนและแอนติบอดี การค้นพบโปรตีนใหม่และหน้าที่ของโปรตีนใหม่ การคัดกรองเป้าหมายของยา และการสร้างแผนที่การเชื่อมโยงโปรตีนในจีโนม หลักการของยีสต์ทูไฮบริดคือตัวกระตุ้นการถอดรหัสของยูคาริโอตมีโดเมนโครงสร้างที่แตกต่างกันสองโดเมน ได้แก่ โดเมนการจับ DNA (โดเมนการจับ DNA หรือ DNA-BD) และโดเมนการกระตุ้นการถอดรหัส DNA (โดเมนการกระตุ้น AD) ซึ่งสามารถแยกออกจากกันได้อย่างอิสระโดยไม่ส่งผลกระทบต่อการทำงานของกันและกัน BD และ AD เพียงอย่างเดียวไม่สามารถกระตุ้นการตอบสนองการถอดรหัสได้ เฉพาะเมื่อทั้งสองอยู่ใกล้กันเพียงพอในเชิงพื้นที่เท่านั้น จึงจะแสดงกิจกรรมของตัวกระตุ้นการถอดรหัสที่สมบูรณ์ ช่วยให้สามารถถอดรหัสยีนที่อยู่ปลายน้ำได้ โดยการสร้างพลาสมิดฟิวชั่นของโปรตีนสองตัวภายใต้การศึกษา (โปรตีน X และโปรตีน Y) ที่มีโดเมน BD และ AD ตามลำดับ และแสดงออกในเซลล์ยีสต์ตัวเดียวกัน หากไม่มีปฏิสัมพันธ์ระหว่างโปรตีนทั้งสอง ยีนรายงานจะไม่ถูกถอดรหัส แต่หากโปรตีนทั้งสองโต้ตอบกัน โดเมน BD และ AD จะอยู่ใกล้กันในเชิงพื้นที่ ดังนั้นจึงสามารถถอดรหัสยีนรายงานได้

รูปที่ 2 แผนภาพหลักการของยีสต์ไฮบริดสองชนิด ^[1]

เทคโนโลยียีสต์ไฮบริดหนึ่งตัวเป็นเครื่องมือสำหรับศึกษาปฏิสัมพันธ์ระหว่างกรดนิวคลีอิกกับโปรตีน ซึ่งพัฒนาบนพื้นฐานของยีสต์ไฮบริดสองตัว และใช้กันอย่างแพร่หลายในการศึกษาการควบคุมการแสดงออกของยีนในเซลล์ยูคาริโอต เช่น การระบุว่ามีปฏิสัมพันธ์ระหว่างดีเอ็นเอที่รู้จักและโปรตีนที่รู้จักหรือไม่ การแยกโปรตีนใหม่ที่จับกับองค์ประกอบควบคุมซิสเป้าหมายหรือไซต์การจับดีเอ็นเอระยะสั้นอื่นๆ การระบุตำแหน่งไซต์การจับดีเอ็นเอที่ได้รับการพิสูจน์แล้วว่าโต้ตอบกันได้อย่างแม่นยำ และการวิเคราะห์โดเมนการจับดีเอ็นเอของโปรตีน หลักการพื้นฐานคือการสร้างองค์ประกอบที่ออกฤทธิ์ซิสที่รู้จักก่อนโปรโมเตอร์ที่พื้นฐานที่สุด (โปรโมเตอร์ขั้นต่ำ Pmin) และเชื่อมต่อยีนรายงานที่อยู่ใต้ Pmin cDNA ที่เข้ารหัสปัจจัยการถอดรหัสที่จะทดสอบจะถูกหลอมรวมกับเวกเตอร์การแสดงออกของโดเมน AD ของยีสต์และนำเข้าสู่เซลล์ยีสต์หากผลิตภัณฑ์ของยีนนี้สามารถจับกับองค์ประกอบที่ทำหน้าที่ cis ได้ ก็จะสามารถกระตุ้นโปรโมเตอร์ Pmin ได้ ซึ่งจะทำให้ยีนรายงานสามารถแสดงออกได้

รูปที่ 3 แผนภาพหลักการของยีสต์ไฮบริดหนึ่งชนิด ^[2]

สำหรับการศึกษายีสต์ไฮบริดเดี่ยว/คู่ Yeasen เสนอผลิตภัณฑ์ 60231ES ออเรโอบาซิดิน เอ (AbA)สารละลาย AbA ที่ละลายในเมทานอลที่มีความบริสุทธิ์ ≥ 97% และความเข้มข้น 1 มก./มล. Yeasen แนะนำความเข้มข้นที่ยับยั้ง AbA ที่ 100-1000 ng/mL ในการทดลองยีสต์ไฮบริดเดี่ยว/คู่ และความเข้มข้นในการทำงานที่เฉพาะเจาะจงขึ้นอยู่กับความไวของเซลล์โฮสต์ (ดูตารางต่อไปนี้ ความเข้มข้นที่ยับยั้งขั้นต่ำ (MIC) ของ AbA สำหรับสายพันธุ์ยีสต์ต่างๆ)

บีสายพันธุ์แอทเทอเรียม		ไมค์ (นกรัม/มล.-
ส.เซเรวิเซีย	เอทีซีซี9763 (ดิพลอยด์)	200-400
	SH3328 (ฮาพลอยด์)	100
	ยีสต์สาเก (ดิพลอยด์)	100-200
	ยีสต์โชชู (ดิพลอยด์)	100
	ยีสต์เบียร์ (ทริปพลอยด์หรือเททราพลอยด์)	100
	ยีสต์ขนมปัง (ดิพลอยด์)	200-400
โรคจิตเภท	เจวาย-745 (โมโนพลอยด์)	100
ซี.อัลบิกันส์	ทิมม์-0136 (ดิพลอยด์)	40
ซี.ทรอปิคัลลิส	ทิมม์-0324 (ดิพลอยด์)	80

กรณีการใช้งาน

เพื่อศึกษาตำแหน่งการจับของโปรตีน GmWRKY31 บนโปรโมเตอร์ของยีน GmSAGT1 ในการทดลองยีสต์ไฮบริดตัวเดียว ลำดับดีเอ็นเอเป้าหมายถูกแทรกเข้าไปในเวกเตอร์ pBait-AbAi ที่มียีนรายงานยูราซิล Ura3 ซึ่งอยู่ต้นน้ำของยีน AUR1-C หลังจากการแปลงยีสต์ด้วยพลาสมิดที่เกี่ยวข้อง จะถูกแขวนลอยในสารละลาย NaCl 0.9% และปรับ OD600 เป็น 0.005 จากนั้น 100 μL ของตัวอย่างจะถูกกระจายบนจานที่มี AbA 500 ng/mL คว่ำลงและเพาะเลี้ยงที่ 30℃ เป็นเวลา 3-5 วัน^[3]-

รูปที่ 3 ปฏิสัมพันธ์ระหว่างโปรตีน GmWRKY31 กับสายพันธุ์ยีสต์ที่ประกอบด้วยชิ้นส่วน F16, F20, F73, delF16, delF20 หรือ delF73

บทความที่ตีพิมพ์โดยใช้สารเคมีของเรา

[1] Shunan Zhang, Yuyi Zhang, Kangning Li, และคณะ ไนโตรเจนช่วยควบคุมเวลาการออกดอกและประสิทธิภาพการใช้ไนโตรเจนผ่านสารควบคุมการออกดอกในข้าว Current Biology เล่มที่ 31 ฉบับที่ 4 ปี 2564, https://doi.org/10.1016/j.cub.2020.10.095- (ถ้า:10.834-

[2] Jiaying Kuang, Yingchun Xu, Yidan Liu และคณะ เครือข่ายควบคุมที่เน้น NnSnRK1 ของการยุติการออกดอกก่อนกำหนดที่เกิดจากร่มเงาในดอกบัว สิ่งแวดล้อมและพฤกษศาสตร์เชิงทดลอง เล่มที่ 221, 2024, 105725 https://doi.org/10.1016/j.envexpbot.2024.105725- (ถ้า:5.7-

สินค้าที่เกี่ยวข้อง

ชื่อสินค้า	แมว#	ข้อมูลจำเพาะ
ซิโปรฟลอกซาซิน ไฮโดรคลอไรด์	60201ES05/25/60	5/25/100กรัม
แอมพิซิลลิน โซเดียมซอลท์	60203ES10/60	10/100กรัม
ดอกซีไซคลินไฮเคลต	60204ES03/08/25	1/5/25กรัม
คลอแรมเฟนิคอล เกรด USP	60205ES08/25/60	5/25/100กรัม
คาเนมัยซินซัลเฟต	60206ES10/60	10/100กรัม
เตตราไซคลิน HCl เตตราไซคลินไฮโดรคลอไรด์ (USP)	60212ES25/60	25/100กรัม
แวนโคไมซินไฮโดรคลอไรด์	60213ES60/80/90	100มก./1ก./5ก.
เกลือเจนตามัยซินซัลเฟต	60214ES03/08/25	1/5/25กรัม
สเปกติโนไมซิน ไฮโดรคลอไรด์	60215ES08	5กรัม
เฟลโอไมซิน (20 มก./มล. ในสารละลาย)	60217ES20/60	20/5×20มก.
บลาสติซิดิน เอส (บลาสติซิดิน)	60218ES10/60	10/10×10มก.
ไนสแตติน	60219ES08	5กรัม
G418 ซัลเฟต (เจเนติซิน)	60220ES03/08	1/5กรัม
พูโรไมซิน (สารละลาย 10 มก./มล.)	60209ES10/50/60/76	1×1 /5 ×1 / 1 0 ×1 /50 ×1 มล.
พูโรไมซิน ไดไฮโดรคลอไรด์	60210ES25/60/72/76/80	25/100/250/500 มก. / 1 ​​ก.
ไฮโกรไมซิน บี (50 มก./มล.)	60224ES03	1 กรัม (20 มล.)/10×1 กรัม (20 มล.)
ไฮโกรไมซิน บี	60225ES03/10	1/10กรัม
อีริโทรไมซิน	60228ES08/25	5/25กรัม
ทิเมนติน	60230ES07/32	3.2/10×3.2กรัม
ออเรโอบาซิดิน เอ (AbA)	60231ES03/08/10	1/5×1/10×1มก.
โพลีมิกซินบีซัลเฟต	60242ES03/10	1/10หมู่

เอกสารอ้างอิง

[1] Paiano A และคณะ การทดสอบยีสต์ทูไฮบริดเพื่อระบุโปรตีนที่โต้ตอบกัน Curr Protoc Protein Sci. 2019 กุมภาพันธ์;95(1):e70

[2] John S และคณะ การทดสอบยีสต์ไฮบริดหนึ่งตัว: มุมมองทางประวัติศาสตร์และเทคนิค วิธีการ สิงหาคม 2012;57(4): 441-447

[3] Dong H และคณะ การวิเคราะห์ทรานสคริปโตมของ WRKY TFs ของถั่วเหลืองในการตอบสนองต่อการติดเชื้อ Peronospora manshurica Genomics 2019 ธ.ค.;111(6):1412-1422