-
การจับกันของฟลูออเรสซีน-dUTP กับดีเอ็นเอที่ถูกกัดโดย TdT transferase เป็นหนึ่งในวิธีการทั่วไปที่สุดในการตรวจหาอะพอพโทซิส เช่น ชุด In Situ Cell Death Kit จาก Roche ที่ใช้หลักการนี้ กิจกรรม TdT transferase ในผลิตภัณฑ์ส่งผลโดยตรงต่อประสิทธิภาพการติดฉลาก
ปัจจุบันกลุ่มวิจัยมากกว่า 120 กลุ่มกำลังใช้ผลิตภัณฑ์นี้และได้ตีพิมพ์บทความภาษาอังกฤษจำนวนมากในวารสารที่มีอำนาจ เช่น Theranostics และ EMBO Molecular Medicine
กลไกการตรวจจับ
ในระยะปลายของอะพอพโทซิส การแตกหักของสายคู่ของดีเอ็นเอโครโมโซมหรือการแตกหักของสายเดี่ยวจะสร้างปลาย 3-OH ที่เหนียวแน่นจำนวนมาก และภายใต้การกระทำของการถ่ายโอนปลายดีออกซีไรโบนิวคลีโอไทด์ (TdT) dUTP ที่ถูกติดฉลากด้วยฟลูออเรสซีน/เอนไซม์จะถูกจับกับปลาย 3 ปลายของดีเอ็นเอ ทำให้สามารถตรวจจับอะพอพโทซิสได้โดยการตรวจจับการเรืองแสง ซึ่งเรียกอีกอย่างว่าการติดฉลากปลายนิคที่เกิดจากการถ่ายโอนปลายดีออกซีไรโบนิวคลีโอไทด์ (deoxyribonucleotide terminal transferase) วิธีนี้เรียกว่าการติดฉลากปลายนิคที่เกิดจากการถ่ายโอนปลายดีออกซีไรโบนิวคลีโอไทด์ (Terminal-Deoxynucleotidyl Transferase Mediated Nick End Labeling หรือ TUNEL) และหลักการจะแสดงอยู่ในรูปที่ 1
รูปที่ 1: แผนผังของการติดฉลากนิคเอ็นด์ที่ควบคุมโดยเทอร์มินัลดีออกซีไรโบนิวคลีโอไทดิลทรานสเฟอร์เรส (TUNEL)
คุณสมบัติผลิตภัณฑ์
- ขอบเขตการใช้งานที่กว้างขวาง
สามารถใช้ได้สำหรับชิ้นเนื้อที่ฝังพาราฟิน ชิ้นเนื้อแช่แข็ง เซลล์ที่เพาะเลี้ยง และเซลล์ที่แยกจากเนื้อเยื่อ
- ความไวในการตรวจจับสูง
สามารถตรวจพบเซลล์ที่เกิดภาวะอะพอพโทซิสได้ในปริมาณเล็กน้อยมาก
- การรบกวนพื้นหลังต่ำ
อัตราส่วนสัญญาณต่อสัญญาณรบกวนสูง
- ความสามารถในการสังเกตที่หลากหลาย
การสังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์เรืองแสง การตรวจจับการไหลผ่าน
การนำเสนอข้อมูล
1、การทดสอบทูเนลของพรีอะดิโปไซต์ของหนู (3T3-L)
รูปที่ 2: การตรวจจับอะพอพโทซิสของพรีอะดิโปไซต์ 3T3-L ในหนู แถวแรกแสดงการควบคุมเชิงลบ และแถวที่สองแสดงการควบคุมเชิงบวก สารตรวจจับ: ชุดตรวจจับอะพอพโทซิส TUNEL หมายเลขแคตตาล็อก 40306 (FITC)
2、การตรวจจับอุโมงค์ของตัวอย่างส่วนพาราฟิน
รูปที่ 3: การใช้ LY3009120 เพียงอย่างเดียวหรือร่วมกับ Vemurafenib และ Obatoclax ชะลอการเกิดมะเร็งต่อมไทรอยด์ได้อย่างมีประสิทธิภาพในแบบจำลองเนื้องอกที่ปลูกถ่ายใต้ผิวหนัง IF=8.8 ประเภทตัวอย่าง: เนื้อเยื่อเนื้องอกที่ฝังพาราฟิน (นำมาจากหนูเปลือย) สารตรวจจับ: ชุดตรวจจับอะพอพโทซิส TUNEL หมายเลขแคตตาล็อก 40307 (Alexa Fluor 488)
3、การตรวจจับอุโมงค์ของการคลานเซลล์
รูปที่ 4: ผลของสังกะสีซัลเฟตต่อภาวะอะพอพโทซิสของเซลล์เยื่อบุผนังหลอดเลือดในกลุ่มย่อยต่างๆ ประเภทตัวอย่าง: HUVEC (เซลล์เยื่อบุหลอดเลือดในสะดือของมนุษย์) สารตรวจจับ: ชุดตรวจจับอะพอพโทซิส TUNEL หมายเลขแคตตาล็อก 40308 (Alexa Fluor 640)
4、การไหลเวียนไซโตเมทรีเพื่อตรวจหาอะพอพโทซิส
รูปที่ 5: การบำบัดด้วย PA สามารถลดการเกิดอะพอพโทซิสระหว่างการรีโปรแกรมได้อย่างมีประสิทธิภาพ IF=3.7 ประเภทตัวอย่าง: เซลล์ iPS สารตรวจจับ: หมายเลขแค็ตตาล็อก 40307 ชุดตรวจจับอะพอพโทซิส TUNEL (Alexa Fluor 488)
การอ้างอิงวรรณกรรม
[1] Li C, Wang Q, Gu X และคณะ นาโนคอมโพสิต SiO2 ที่มีรูพรุนส่งเสริมการอพยพและการแบ่งตัวของเซลล์ต้นกำเนิดเนื้อเยื่อเกี่ยวพันของไขกระดูกหนูเพื่อเร่งการสมานกระดูกหักในหนูทดลอง[J]วารสารนาโนเมดิซีนนานาชาติ, 2019, 14: 3845 (ถ้า 4.76)
[2] Miao T, Qian L, Yu F และคณะ ผลการป้องกันของสารไฮดรอกซีแซฟฟลอร์เยลโล่ต่อการบาดเจ็บของเซลล์เยื่อบุหลอดเลือดหัวใจของมนุษย์ที่เกิดจากไลโปโปรตีนความหนาแน่นต่ำที่มีออกซิไดซ์สูง[J] Development, 2019, 22: 581-589(ไอเอฟ 6.208 )
[3] Wen Y, Liu G, Zhang Y และคณะ MicroRNA-205 เกี่ยวข้องกับภาวะหย่อนสมรรถภาพทางเพศที่เกิดจากโรคเบาหวานโดยการลดการทำงานของตัวรับแอนโดรเจน [J] วารสารการแพทย์เซลล์และโมเลกุล 2019, 23(5): 3257-3270(ถ้า 4.41)
[4] Xu T, Ding W, Ao X และคณะ ARC ควบคุมการตายของเซลล์ตามโปรแกรมและการบาดเจ็บจากการขาดเลือด/การไหลเวียนเลือดกลับคืนสู่กล้ามเนื้อหัวใจผ่านการยับยั้งการเปิด mPTP [J] Redox Biology, 2019, 20: 414-426(ไอเอฟ 8.37)
[5] Li P, Hao L, Guo YY และคณะ คลอโรควินยับยั้งออโตฟาจีและทำลายความผิดปกติของไมโตคอนเดรียและอะพอพโทซิสในเซลล์ประสาทหนูที่ขาดออกซิเจน[J] Life Sciences, 2018, 202: 70-77.(ถ้า 3.40)
[6] Chen H, Guan B, Chen X และคณะ Baicalin ช่วยลดการหยุดชะงักของอุปสรรคเลือด-สมองและการเปลี่ยนแปลงของเลือดออก และปรับปรุงผลลัพธ์ทางระบบประสาทในหนูที่เป็นโรคหลอดเลือดสมองขาดเลือดด้วยการรักษาด้วย t-PA ที่ล่าช้า: การมีส่วนร่วมของเส้นทาง ONOO−-MMP-9[J] Translational Stroke Research, 2018, 9(5): 515-529.(ถ้า 4.87)
[7] Liu Q, Qian Y, Li P และคณะ ผลการบำบัดแบบผสมผสานของไมโครสเฟียร์ที่มีคอปเปอร์ซัลไฟด์ที่ทำหน้าที่หลายอย่างและติดฉลากด้วยไอโอดีน 131 ในการรักษามะเร็งเต้านม[J] Acta Pharmaceutica Sinica B, 2018, 8(3): 371-380.(ถ้า 6.88)
[8] Han YQ, Ming SL, Wu HT และคณะ การน็อกเอาต์ไมโอสแตตินทำให้เกิดอะพอพโทซิสในเซลล์มะเร็งปากมดลูกของมนุษย์ผ่านการสร้างอนุมูลอิสระออกซิเจนที่เพิ่มขึ้น[J] Redox Biology, 2018, 19: 412-428.(ไอเอฟ 8.37)
[9] Wang S, Xu Y, Weng Y และคณะ แอสทิลบินช่วยลดพิษต่อไตที่เกิดจากซิสแพลตินโดยลดความเครียดออกซิเดชันและการอักเสบ[J] พิษวิทยาอาหารและเคมี 2561, 114: 227-236.(ถ้า 3.78)
[10] Liu L, Pang XL, Shang WJ และคณะ ไมโครอาร์เอ็นเอ-181a ที่แสดงออกมากเกินไปช่วยลดภาวะกลอเมอรูลาร์สเคลอโรซิสและการบาดเจ็บของเยื่อบุผิวท่อไตในหนูที่เป็นโรคไตเรื้อรังโดยการลดการแสดงออกของเส้นทาง TLR/NF-κB โดยจับกับ CRY1[J] Molecular Medicine, 2018, 24(1): 49.(ถ้า 3.46)
[11] Li G, Yin Q, Ji H และคณะ การศึกษาการคัดกรองและผลต่อต้านเนื้องอกของเปปไทด์ลิแกนด์เฉพาะ CD55 ในเซลล์มะเร็งปากมดลูก[J] การออกแบบยา การพัฒนาและการบำบัด 2018, 12: 3899.(ถ้า 3.27)
[12] Qian Y, Wang Y, Jia F และคณะ นาโนไมเซลล์ที่ควบคุมโดยสภาพแวดล้อมจุลภาคของเนื้องอกที่มีคุณสมบัติ AIE เพื่อส่งเสริมการบำบัดมะเร็งและการติดตามอะพอพโทซิส [J] Biomaterials, 2019, 188: 96-106(ถ้า 9.85)
[13] Li Z, Li D, Li Q และคณะ อนุภาคนาโนที่ควบคุมโคโรนาที่จับกับอัลบูมินที่มีภูมิคุ้มกันต่ำในสถานภาพสำหรับเคมีบำบัดที่กำหนดเป้าหมายเนื้องอก [J] Biomaterials Science, 2018, 6(10): 2681-2693(ถ้า 5.31)
[14] Liu Y, Zhi X, Hou W และคณะ การรวมตัวด้วยตนเองของคาร์บอนดอตที่เหนี่ยวนำโดย Gd3+-Ion ที่บรรจุสารเพิ่มความไวแสงสำหรับการสร้างภาพคู่ฟลูออเรสเซนต์/MRI ที่ดีขึ้นและการบำบัดต่อต้านเนื้องอก[J] Nanoscale, 2018, 10(40): 19052-19063.(ถ้า 7.17)
[15] Liu Q, Qian Y, Li P และคณะ ไมโครสเฟียร์บรรจุคอปเปอร์ซัลไฟด์ที่ติดฉลาก I เพื่อรักษาเนื้องอกของตับผ่านการอุดหลอดเลือดแดงตับ[J] Theranostics, 2018, 8(3): 785.(ถ้า 8.12 )
คำถามที่พบบ่อย
ถาม: ลักษณะที่ปรากฏของฉลากเรืองแสงแบบไม่เฉพาะเจาะจง?
1) เนื้อเยื่อ/เซลล์มีระดับกิจกรรมของนิวคลีเอสหรือโพลีเมอเรสสูง ซึ่งอาจนำไปสู่การปรากฏตัวของการติดฉลากเรืองแสงแบบไม่จำเพาะ เช่น เซลล์กล้ามเนื้อเรียบ วิธีแก้ปัญหาคือตรึงเซลล์หรือเนื้อเยื่อทันทีหลังจากรับยา และตรึงให้เพียงพอเพื่อหยุดเอนไซม์เหล่านี้ไม่ให้ก่อให้เกิดผลบวกปลอม
2) การใช้สารตรึงที่ไม่เหมาะสม เช่น สารตรึงที่มีฤทธิ์เป็นกรดบางชนิด อาจทำให้เกิดผลบวกปลอมได้ แนะนำให้ใช้สารตรึงพาราฟอร์มาลดีไฮด์ที่เป็นกลาง 4% ที่เตรียมขึ้นใหม่
3) การเรืองแสงแบบไม่จำเพาะอาจเกิดขึ้นได้เมื่อเวลาในการทำปฏิกิริยาของการทดสอบ TUNEL นานเกินไป และไม่สามารถทำให้พื้นผิวเซลล์หรือเนื้อเยื่อเปียกได้ ควรควบคุมเวลาในการทำปฏิกิริยาอย่างระมัดระวัง และตรวจสอบให้แน่ใจว่าสารละลายปฏิกิริยาของการทดสอบ TUNEL ครอบคลุมตัวอย่างได้ดี
ถาม: พื้นหลังเรืองแสงสูงมากใช่ไหม?
1) เซลล์ที่แบ่งตัวและขยายตัวด้วยอัตราสูง โดยมีระดับการถอดรหัสสูง บางครั้งก็แสดงการแตกหักของ DNA ในนิวเคลียสด้วย
2) การได้รับแสงกระตุ้นเป็นเวลานานอาจทำให้เกิดผลบวกปลอม
ถาม: ประสิทธิภาพการติดฉลากต่ำ?
1) การตรึงด้วยเอธานอลหรือเมทานอลทำให้ประสิทธิภาพการติดฉลากต่ำ
2) เวลาในการตรึงนานเกินไป ส่งผลให้มีการเชื่อมขวางสูงเกินไป ควรลดเวลาในการตรึงลง
3) ส่วนเนื้อเยื่อมีความหนาเกินไป ทำให้ผลการตรึงไม่น่าพอใจ และควรควบคุมภายใน 10 μm จะดีกว่า
(4) การดับการเรืองแสง: การเรืองแสงจะดับลงอย่างรุนแรงภายใน 10 นาทีภายใต้แสงปกติ วิธีแก้ปัญหาคือหลีกเลี่ยงการใช้แสง
รายละเอียดสินค้า
| ชื่อสินค้า | หมายเลขสินค้า | ข้อมูลจำเพาะ |
| ชุดตรวจหาอะพอพโทซิส Annexin V-FITC/7-AAD | 40311ES20/50/60 | 20ตัน/50ตัน/100ตัน |
| 40302ES20/50/60 | 20ตัน/50ตัน/100ตัน | |
| ชุดตรวจหาอะพอพโทซิส Annexin V-PE/7-AAD | 40310ES20/50/60 | 20ตัน/50ตัน/100ตัน |
| 40303ES20/50/60 | 20ตัน/50ตัน/100ตัน | |
| ชุดตรวจจับอะพอพโทซิส Annexin V-YSFluor™ 488/7-AAD | 40313ES60 | 100ตัน |
| 40305ES20/50/60 | 20ตัน/50ตัน/100ตัน | |
| 40304ES20/50/60 | 20ตัน/50ตัน/100ตัน | |
| ชุดตรวจจับอะพอพโทซิส Annexin V-YSFluor™ 647/7-AAD | 40312ES20/50/60 | 20ตัน/50ตัน/100ตัน |
| 40306ES20/50/60 | 20ตัน/50ตัน/100ตัน | |
| 40307ES20/50/60 | 20ตัน/50ตัน/100ตัน | |
| 40308ES20/50/60 | 20ตัน/50ตัน/100ตัน |