ไมโตคอนเดรีย
ไมโตคอนเดรียเป็นแหล่งผลิตพลังงานของเซลล์ ซึ่งเป็นแหล่งหลักของการฟอสโฟรีเลชันออกซิเดชันภายในเซลล์และการสังเคราะห์อะดีโนซีนไตรฟอสเฟต (ATP) ซึ่งให้พลังงานแก่กิจกรรมของเซลล์ พลังงานที่จำเป็นสำหรับกิจกรรมของเซลล์ 95% มาจากไมโตคอนเดรีย นอกจากการให้พลังงานแก่เซลล์แล้ว ไมโตคอนเดรียยังเกี่ยวข้องกับกระบวนการต่างๆ เช่น การแบ่งตัวของเซลล์ การถ่ายโอนข้อมูลของเซลล์ และอะพอพโทซิส และมีความสามารถในการควบคุมการเจริญเติบโตของเซลล์และวงจรของเซลล์ ดังนั้น การทดสอบ เช่น ไมโตคอนเดรียและเยื่อหุ้มไมโตคอนเดรียจึงเป็นส่วนสำคัญของการศึกษาเซลล์
ความหมายและความสำคัญของศักย์เยื่อหุ้มไมโตคอนเดรีย
ศักยภาพของเยื่อหุ้มไมโตคอนเดรียเป็นผลจากการกระจายประจุทั้งสองด้านของเยื่อหุ้มไมโตคอนเดรียชั้นในและเป็นปัจจัยสำคัญในการรักษาหน้าที่ปกติของไมโตคอนเดรีย ในไมโตคอนเดรีย ห่วงโซ่การขนส่งอิเล็กตรอนจะสร้างการไล่ระดับโปรตอนผ่านปฏิกิริยารีดอกซ์ที่ขับเคลื่อนการสังเคราะห์ ATP เสถียรภาพของศักยภาพของเยื่อหุ้มไมโตคอนเดรียเกี่ยวข้องโดยตรงกับแหล่งพลังงานของเซลล์และสถานะการอยู่รอด การศึกษาจำนวนมากแสดงให้เห็นว่าไมโตคอนเดรียมีความเกี่ยวข้องอย่างใกล้ชิดกับอะพอพโทซิส ซึ่งการลดลงของศักยภาพของเยื่อหุ้มไมโตคอนเดรียถือเป็นเหตุการณ์แรกสุดอย่างหนึ่งในกระบวนการปฏิกิริยาอะพอพโทซิสแบบคาสเคด เกิดขึ้นก่อนที่จะปรากฏลักษณะของอะพอพโทซิส (การควบแน่นของโครมาติน การแตกของดีเอ็นเอ) ในนิวเคลียส และเมื่อศักยภาพของเยื่อหุ้มไมโตคอนเดรียพังทลาย อะพอพโทซิสก็จะไม่สามารถย้อนกลับได้ ดังนั้น การลดลงของศักยภาพเยื่อหุ้มไมโตคอนเดรียจึงเป็นเหตุการณ์สำคัญในระยะเริ่มแรกของอะพอพโทซิส
หลักการทำงานของหัววัด JC-1
เจซี-1 เป็นสีย้อมเรืองแสงลิพิดประจุบวก ซึ่งสามารถใช้เป็นตัวบ่งชี้ศักยภาพของเยื่อหุ้มเซลล์ไมโตคอนเดรียได้ JC-1 มีอยู่ในสองสถานะ ได้แก่ โมโนเมอร์และมัลติเมอร์ เมื่อมีความเข้มข้นต่ำ จะมีลักษณะเป็นโมโนเมอร์ และสามารถตรวจจับการเรืองแสงสีเขียวได้ และเมื่อตรวจจับโดยการวิเคราะห์ไหลผ่าน มักจะอยู่ในช่อง FL-1 (ช่องเดียวกับ FITC) เมื่อมีความเข้มข้นสูง จะมีอยู่เป็นมัลติเมอร์ และสามารถตรวจจับแสงสีแดงได้ และเมื่อตรวจพบด้วยวิธีไหลผ่าน มักจะอยู่ในช่อง FL-2 (ช่องเดียวกับ PE) JC-1 ยังสามารถใช้เป็นสีย้อมลิพิดเรืองแสงบวกได้ และสามารถใช้เป็นตัวบ่งชี้ศักย์ทรานส์เมมเบรนของไมโตคอนเดรียได้ (และช่อง PE เดียวกัน) เนื่องจากการเปลี่ยนแปลงความเข้มข้นของ JC-1 จึงทำให้เกิดกระบวนการเปลี่ยนผ่านแบบกลับได้ระหว่างโมโนเมอร์และมัลติเมอร์
ในเซลล์ปกติ เมื่อศักย์เยื่อหุ้มเซลล์เป็นปกติ JC-1 จะเข้าสู่ไมโตคอนเดรียผ่านขั้วของเยื่อหุ้มเซลล์ไมโตคอนเดรียและสร้างมัลติเมอร์เรืองแสงสีแดงเนื่องจากความเข้มข้นที่เพิ่มขึ้น ในขณะที่ในเซลล์ที่เกิดอะพอพโทซิส ศักย์ทรานส์เยื่อหุ้มเซลล์ไมโตคอนเดรียจะเกิดการดีโพลาไรซ์ และ JC-1 จะถูกปลดปล่อยออกจากไมโตคอนเดรียในความเข้มข้นที่ลดลง และเปลี่ยนกลับเป็นรูปแบบโมโนเมอร์เรืองแสงสีเขียว ดังนั้น การเปลี่ยนแปลงศักย์เยื่อหุ้มเซลล์ไมโตคอนเดรียจึงสามารถตรวจพบได้โดยการตรวจจับการเรืองแสงสีเขียวและสีแดง
หมายเหตุ: รูปภาพอ้างอิงจากอินเตอร์เน็ต
หัววัด JC-10
เจซี-10ซึ่งเป็นอนุพันธ์ของ JC-1 เป็นโพรบที่ขึ้นอยู่กับศักย์ไฟฟ้าที่ใช้เพื่อกำหนดศักย์ไฟฟ้าของเยื่อหุ้มเซลล์ไมโตคอนเดรียโดยใช้การไหลเวียนของไซโตเมทรี กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์ และการทดสอบฟลูออเรสเซนซ์บนไมโครไทเตอร์เพลต ในเซลล์ที่มีสุขภาพดี JC-10 จะสะสมในไมโตคอนเดรียอย่างเลือกเฟ้น โดยสร้างกลุ่มสีแดงที่แสดงสเปกตรัมการกระตุ้นที่กว้างและปล่อยค่าขนาดใหญ่ที่ 590 นาโนเมตรอย่างไรก็ตาม ในเซลล์ที่เกิดอะพอพโทซิสและเซลล์เนื้อตายที่มีศักยภาพทรานส์เมมเบรนของไมโตคอนเดรียต่ำ JC-10 จะแพร่กระจายออกจากไมโตคอนเดรียและสร้างโมโนเมอร์ JC-10 ส่งผลให้เกิดการเปลี่ยนแปลงไปสู่การปล่อยแสงสีเขียว (525 นาโนเมตร) ซึ่งได้รับการใช้เป็นตัวบ่งชี้ศักยภาพทรานส์เมมเบรนของไมโตคอนเดรียสำเร็จแล้วในตัวอย่างประเภทต่างๆ รวมถึงไมโอไซต์ เซลล์ประสาท เนื้อเยื่อที่สมบูรณ์ และไมโตคอนเดรียที่แยกออกมา
JC-10--ทดแทน JC-1
- ความเสถียร: JC-10 มีความลำเอียงในการตรวจจับน้อยกว่าเนื่องจากมีความสามารถในการละลายที่สูงกว่าและมีความไวที่สูงกว่าในสื่อที่เป็นน้ำ
- สัญญาณเสริม: JC-10 มีอัตราส่วนสัญญาณต่อพื้นหลังสูงกว่า JC-1
- ความไวที่เพิ่มขึ้น: JC-10 สามารถตรวจจับการเปลี่ยนแปลงที่ละเอียดอ่อนในการสูญเสียศักย์เยื่อหุ้มเซลล์ไมโตคอนเดรียได้ดีกว่า JC-1 ในสายเซลล์ทั้งหมดที่ทดสอบ
- การประยุกต์ใช้กว้าง: JC-10 สามารถนำมาใช้ในเซลล์ตับหลักของหนูได้
- สะดวก: JC-10 สามารถใช้งานร่วมกับเครื่องหมายเอนไซม์เรืองแสง เครื่องสร้างภาพเซลล์ และเครื่องไซโตมิเตอร์การไหล
หมายเหตุ: วัดการเปลี่ยนแปลงศักย์ของเยื่อหุ้มไมโตคอนเดรียที่เกิดจากคอมีโดนในเซลล์ Jurkat โดยใช้ JC-10 และ JC-1 หลังจากบำบัดเซลล์ Jurkat ด้วยแคมป์โทธีซิน (10 มิลลิโมลาร์) เป็นเวลา 4 ชั่วโมง เติมสารละลายอัปแซมปลิงสีย้อม JC-1 และ JC-10 ลงในหลุมและฟักเป็นเวลา 30 นาที วัดความเข้มของฟลูออเรสเซนต์ของรูปแบบรวมและโมโนเมอร์ของ JC-1 และ JC-10 ที่ Ex/Em = 490/525 นาโนเมตรและ 490/590 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องติดฉลากเอนไซม์ NOVOstar (BMG Labtech)
การวิเคราะห์ผล
เมื่อตรวจจับโมโนเมอร์ JC-1 สามารถตั้งค่าแสงเร้าเป็น 490 นาโนเมตรและแสงการเปล่งแสงเป็น 530 นาโนเมตรได้ เมื่อตรวจจับโพลิเมอร์ JC-1 สามารถตั้งค่าแสงเร้าเป็น 525 นาโนเมตรและแสงการเปล่งแสงเป็น 590 นาโนเมตรได้ ตรวจจับอะพอพโทซิสด้วยการไหลเวียนของไซโตเมทรี ตรวจจับการเรืองแสงสีเขียวผ่านช่อง FL-1 และตรวจจับการเรืองแสงสีแดงผ่านช่อง FL-2 FL-1+, FL-2 + เป็นเซลล์ปกติ ส่วน FL-1+, FL-2- เป็นเซลล์ที่เกิดภาวะอะพอพโทซิส
หมายเหตุ: แหล่งที่มาของรูปภาพคือฟอรั่มเว็บไซต์ China Streamline Association
ดำเนินการอย่างไม่ต้องสงสัย
ถาม: JC-1 Mitochondrial Membrane Potential Fluorescent Probe ผลิตภัณฑ์นี้ใช้ย้อมส่วนเนื้อเยื่อได้หรือไม่?
A: ย่อยเนื้อเยื่อที่มีชีวิตให้เป็นเซลล์แยกเซลล์เพื่อให้แน่ใจว่าเซลล์มีกิจกรรมก่อนที่จะทำการย้อมสี
ถาม: ฉันสามารถแก้ไขเซลล์ก่อนการย้อมด้วย JC-1 ได้หรือไม่?
ตอบ ไม่ สีย้อม JC-1 จะสะสมในไมโตคอนเดรียในลักษณะที่ขึ้นอยู่กับศักย์ไฟฟ้า และสามารถใช้ตรวจจับเซลล์ เนื้อเยื่อ หรือศักย์ไฟฟ้าของเยื่อหุ้มไมโตคอนเดรียที่บริสุทธิ์แล้ว การตรึงจะรบกวนศักย์ไฟฟ้า ส่งผลให้โพรบไม่สามารถสะสมในไมโตคอนเดรียได้ และสูญเสียความจำเพาะ
ถาม: มีอนุภาครวมตัวกันในสารละลายทำงาน JC-1 และฉันวางแผนที่จะกำจัดมันออกด้วยการปั่นเหวี่ยงก่อนการย้อมสี มีพารามิเตอร์ที่แนะนำสำหรับการปั่นเหวี่ยงหรือไม่
A: สามารถปั่นสารละลายทำงาน JC-1 ที่อัตรา 13,000 g เป็นเวลาประมาณ 1-2 นาที
ข้อมูลการสั่งซื้อ
| ชื่อสินค้า | หมายเลขสินค้า | ข้อมูลจำเพาะ |
| 40705ES03/08 | 1 มก./5 มก. | |
| 40707ES03/08 | 1 มก./5 มก. |