ในกระบวนการเพาะเลี้ยงเซลล์ มักต้องมีการย่อยเซลล์ ดังนั้น ทริปซินที่ใช้ในการย่อยเซลล์จึงมีความจำเป็นสำหรับการเพาะเลี้ยงเซลล์ และยังมีความสำคัญมาก ซึ่งจะส่งผลต่อสภาวะการเจริญเติบโตของเซลล์

ทริปซินสามารถแบ่งออกกว้างๆ ได้เป็น 2 ประเภท หนึ่งคือทริปซินแบบรีคอมบิแนนท์ และอีกประเภทหนึ่งคือทริปซินแบบไม่รีคอมบิแนนท์

• ทริปซินที่ไม่ใช่รีคอมบิแนนท์ได้มาจากสารสกัดจากสัตว์ ซึ่งมีต้นกำเนิดจากสัตว์ และยังเป็นทริปซินแบบดั้งเดิมที่มักพบในระบบย่อยอาหารของสัตว์ และสกัดโดยตรงจากเนื้อเยื่อตับอ่อนของวัวหรือหมู
• ทริปซินแบบรีคอมบิแนนท์ผลิตโดยใช้เทคโนโลยีรีคอมบิแนนท์ทางพันธุกรรม และไม่มีต้นกำเนิดจากสัตว์

การแนะนำและการใช้งานผลิตภัณฑ์

ทริปซินที่ไม่ใช่รีคอมบิแนนท์ (จากสัตว์)

คุณสมบัติผลิตภัณฑ์：

ทริปซินที่ไม่ใช่รีคอมบิแนนท์ (เรียกอีกอย่างว่าทริปซิน) เป็นเอนไซม์โปรตีโอไลติกเซอรีนที่สกัดจากตับอ่อนของวัว แกะ และหมู ซึ่งสามารถแยกส่วนปลายคาร์บอกซิลของไลซีนและอาร์จินีนที่มีประจุบวกได้โดยเฉพาะ จากนั้นจึงทำการบริสุทธิ์ด้วยการตกผลึกหลายครั้ง และเตรียมเพิ่มเติมโดยใช้เทคโนโลยีโครมาโทกราฟีและอัลตราฟิลเตรชัน โดยมีแหล่งกำเนิดจากสัตว์

เนื่องจากเอนไซม์ของตับอ่อนสามารถออกฤทธิ์กับโปรตีนที่ผ่านเยื่อหุ้มเซลล์และโปรตีนในเมทริกซ์นอกเซลล์ เช่น แคดเฮอริน อินทิกริน เป็นต้น จึงนิยมใช้เอนไซม์เหล่านี้ในการแยกเนื้อเยื่อและเซลล์โมโนเลเยอร์ แม้ว่าทริปซินจะสามารถไฮโดรไลซิสโปรตีโอไลซิสระหว่างเซลล์เพื่อแยกเซลล์ออกจากกัน แต่ปฏิกิริยาระหว่างเนื้อเยื่อหรือเซลล์ต่าง ๆ กับทริปซินจะแตกต่างกัน และกิจกรรมของเซลล์ที่กระจัดกระจายยังเกี่ยวข้องกับความเข้มข้นของทริปซิน อุณหภูมิและเวลาในการเกิดปฏิกิริยา และความสามารถของทริปซินในการกระจายเซลล์จะแข็งแกร่งที่สุดภายใต้สภาวะ pH 7-9 และอุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส การเติม EDTA ลงในสารละลายทริปซินในฐานะตัวแทนคีเลตจะจับแคลเซียมและแมกนีเซียมเข้าในโครงสร้างหกซี่ ซึ่งสามารถทำให้การยึดเกาะระหว่างเซลล์อ่อนแอลงและเพิ่มการได้รับพันธะเปปไทด์เป้าหมายที่ไฮโดรไลซ์ของทริปซิน

การประยุกต์ใช้ทริปซินหลักในช่วงแรกๆ ของสาขาชีวเภสัชกรรมคือการผลิตอินซูลิน และในไม่ช้าก็ถูกนำมาใช้ในสาขาการเพาะเลี้ยงเซลล์อื่นๆ เช่นกัน เอนไซม์จากตับอ่อนของสัตว์มักใช้ในการเพาะเลี้ยงซีรั่ม และองค์ประกอบและความเข้มข้นของทริปซินที่เติมลงในเซลล์แต่ละเซลล์ก็แตกต่างกัน

แอปพลิเคชั่น

1. การผลิตอินซูลินและวัคซีนที่ไม่ทำงาน
2. การแยกและเพาะเลี้ยงเซลล์เนื้อเยื่อ
3. การใช้ทางคลินิกและการผ่าตัด
4. สารช่วยในการแปรรูปในอุตสาหกรรมอาหาร

ทริปซินรีคอมบิแนนท์ (ไม่มีแหล่งกำเนิดจากสัตว์)

คุณสมบัติผลิตภัณฑ์

ทริปซินรีคอมบิแนนท์เป็นเอนไซม์ที่ผลิตโดยใช้เทคโนโลยีการตัดแต่งพันธุกรรม ซึ่งมีข้อดีคือมีความเสถียรดี มีความบริสุทธิ์สูง และไม่มีแหล่งกำเนิดจากสัตว์ ในกระบวนการผลิตผลิตภัณฑ์ชีวเภสัชสมัยใหม่ การใช้สารตั้งต้นที่มีแหล่งกำเนิดจากสัตว์อาจทำให้มีแหล่งไวรัสที่อาจทำให้เกิดโรคติดต่อจากสัตว์สู่คน เช่น โรควัวบ้า โรคปากและเท้าเปื่อย เป็นต้น เพื่อลดแหล่งที่มาของมลพิษ ทริปซินจึงถูกสังเคราะห์โดยใช้เทคโนโลยีการตัดแต่งพันธุกรรม ซึ่งจะช่วยแก้ปัญหาความเสี่ยงของการปนเปื้อนของไวรัสที่อาจเกิดจากทริปซินในสุกรหรือโคแบบดั้งเดิม

ทริปซินรีคอมบิแนนท์ส่วนใหญ่แสดงออกโดยรีคอมบิแนนท์โดยอีโคไลรีคอมบิแนนท์หรือระบบยีสต์ และทำการทำให้บริสุทธิ์โดยโครมาโทกราฟีหลายขั้นตอน โดยไม่มีการปนเปื้อนของเฮเทอโรไซม์ เช่น ไคโมทริปซิน ทริปซินรีคอมบิแนนท์มีคุณสมบัติเช่นเดียวกับทริปซินที่สกัดจากธรรมชาติ โดยมีลำดับกรดอะมิโนที่คล้ายคลึงกับลำดับทริปซินของหมู ซึ่งจะแยกกลุ่มคาร์บอกซิลในสารตกค้างไลซีนและอาร์จินีนในห่วงโซ่โพลีเปปไทด์โดยเฉพาะเนื่องจากเป็นมลพิษจากแหล่งกำเนิดที่ไม่ใช่จากสัตว์และมีความบริสุทธิ์สูง จึงมีการใช้งานที่หลากหลายในด้านการพัฒนาเภสัชกรรม การวิจัยทางชีวเคมี โปรตีโอมิกส์ และสาขาอื่นๆ

ทริปซินรีคอมบิแนนท์กระแสหลักในตลาดคือทริปซินหมูรีคอมบิแนนท์ที่แสดงออกใน Escherichia coli หรือยีสต์โดยใช้เทคโนโลยีดีเอ็นเอรีคอมบิแนนท์ และลำดับกรดอะมิโนนั้นสอดคล้องกับทริปซินหมูอย่างสมบูรณ์ โดยมีกิจกรรมและความจำเพาะเช่นเดียวกับทริปซินธรรมชาติ ประกอบด้วยกรดอะมิโน 223 ตัวและมีพันธะไดซัลไฟด์ 6 คู่ เอนไซม์ประกอบด้วยทริปซินที่ใช้งานได้ 2 รูปแบบ ได้แก่ อัลฟา-ทริปซินและบีตา-ทริปซิน กิจกรรมของเอนไซม์นี้ถูกยับยั้งโดยสารยับยั้งเซอรีนโปรตีเอส เช่น PMSF และ TLCK สารคีเลตไอออนโลหะ เช่น EDTA เป็นต้น ทริปซินรีคอมบิแนนท์ใช้ในวัฒนธรรมที่ไม่มีซีรั่ม และเช่นเดียวกับทริปซิน เซลล์ต่างๆ จะถูกเติมด้วยส่วนประกอบและความเข้มข้นของทริปซินที่แตกต่างกัน

แอปพลิเคชั่น

1. การผลิตวัคซีนและอินซูลินแบบรีคอมบิแนนท์
2. การเตรียมตัวอย่างเนื้อเยื่อเพื่อการวิเคราะห์เซลล์;
3. การบำบัดด้วยเซลล์ภูมิคุ้มกัน;
4. การผลิตทางชีวเภสัชกรรม;
5. การวิจัยลำดับโปรตีน โครงสร้าง และโอเมิกส์

การเปรียบเทียบสินค้าอย่างละเอียด

สินค้า	ทริปซินที่ไม่ใช่รีคอมบิแนนท์ (จากสัตว์)	ทริปซินรีคอมบิแนนท์ (ไม่มีแหล่งกำเนิดจากสัตว์)
รายการ	40123ES（ฟีนอลเรด(-), EDTA(+)) 40124ES（ฟีนอลเรด(-),EDTA(-)) 40126ES（ฟีนอลเรด(+),EDTA(-)) 40127ES（ฟีนอลเรด(+),EDTA(+))	40512ES 20416ES（MS-SAFE）
แหล่งที่มา	นำมาจากตับอ่อนของวัว หมู และแกะ	โคลิบาซิลลัส（40512ES） พิเชีย พาสตอริส（20416ES）
ความปลอดภัย	การปนเปื้อนของเชื้อโรคที่อาจเกิดขึ้น	ไม่มีการปนเปื้อนไวรัสจากภายนอก
ความบริสุทธิ์	มากกว่า 90% ของสารละลายทริปซิน 1:250 เป็นสารเจือปน	ความบริสุทธิ์สูง (β-trypsin≥ 70%, อัลฟา-ทริปซิน≤20%)
ชนิดของเซลล์ย่อยอาหาร	เซลล์ที่มีการยึดเกาะแน่นมากที่สุด	เซลล์ที่มีการยึดเกาะแน่นมากที่สุด
ไคโมทริปซินจำกัด	ไคโมทริปซินไม่เกิน 50 หน่วยต่อทริปซิน 2,500 หน่วย	ไม่มีการปนเปื้อนของเอนไซม์ไมโรซิเนสและสิ่งเจือปนอื่นๆ
กิจกรรมเฉพาะ	≥2500 หน่วย USP/มก. โปรตีน	≥3800 หน่วย USP/มก. โปรตีน
ผลกระทบต่อระบบย่อยอาหาร	ความไม่มั่นคง	ระบบย่อยอาหารแข็งแรงและมีเอนไซม์ในปริมาณต่ำ
อัตราการตัดด้วยตนเอง	สามารถทำการตัดและผลิตชิ้นส่วนที่ตัดเองได้ง่าย ซึ่งส่งผลต่อผลการวิเคราะห์ด้วยสเปกโตรมิเตอร์มวล	สามารถทำการตัดและผลิตชิ้นส่วนที่ตัดเองได้ง่าย ซึ่งส่งผลต่อผลการวิเคราะห์ด้วยสเปกโตรมิเตอร์มวล
ของเหลวที่ละลาย	สารละลาย HBSS ที่มีหรือไม่มี Ca2+, Mg2+	สารละลาย HBSS ที่มีหรือไม่มี Ca2+ และ Mg2+ (40512ES) 1 มิลลิโมลาร์ HCL（20416ES）
การอยู่รอดของเซลล์	ปกติ	ปกติ
จำเป็นต้องแช่แข็งและละลายหรือไม่	ใช่	ใช่

นอกเหนือจากทริปซินที่ใช้กันทั่วไปในการย่อยเซลล์แล้ว ยังมีผลิตภัณฑ์เอนไซม์ย่อยอาหารอีกหลายประเภทที่อาจนำมาใช้ได้เช่นกัน ดังต่อไปนี้

เกี่ยวกับการประยุกต์ใช้คอลลาจิเนส

คอลลาจิเนสเป็นเอนไซม์เปปไทเดสเอ็นโดนิวคลีเอสที่สามารถจดจำลำดับ Pro-X-Gly-Pro ได้โดยเฉพาะ และแยกพันธะเปปไทด์ระหว่างกรดอะมิโนที่เป็นกลาง (X) และไกลซีน (Gly) ในลำดับ คอลลาจิเนสเป็นโปรตีเอสชนิดเดียวที่สามารถย่อยสลายเส้นใยคอลลาเจนตามธรรมชาติด้วยโครงสร้างแบบสามสายซุปเปอร์คอยล์ และสามารถไฮโดรไลซ์โปรตีนชนิดอื่นๆ โพลิแซ็กคาไรด์ และลิปิดในเมทริกซ์นอกเซลล์ของเนื้อเยื่อเกี่ยวพันและเนื้อเยื่อบุผิวได้อย่างมีประสิทธิภาพ ทำให้ผลิตภัณฑ์นี้เหมาะสำหรับการย่อยเนื้อเยื่อเป็นอย่างยิ่ง

1. คอลลาจิเนส I มักใช้ในการเตรียมเซลล์เยื่อบุผิว ตับ ปอด ไขมัน และเซลล์เนื้อเยื่อต่อมหมวกไต
2. คอลลาจิเนส II ซึ่งใช้ในการเตรียมเซลล์ที่ได้จากเนื้อเยื่อ เช่น หัวใจ กระดูก กล้ามเนื้อ ตับ ต่อมไทรอยด์ และกระดูกอ่อน
3. คอลลาจิเนส III มักใช้ในการเตรียมเซลล์เต้านม
4. คอลลาจิเนส IV ซึ่งมักใช้ในการเตรียมเซลล์เกาะของตับอ่อน หรือสำหรับการทดลองเตรียมเซลล์ที่จำเป็นต้องรักษาความสมบูรณ์ของตัวรับไว้
5. คอลลาจิเนส V. เหมาะสำหรับการแยกเซลล์เกาะของตับอ่อนและเซลล์เนื้อเยื่อเกี่ยวพัน

เกี่ยวกับการประยุกต์ใช้สารประกอบทริปซิน

Accutase เป็นเอนไซม์ย่อยเซลล์ที่มีกิจกรรมการย่อยสลายด้วยโปรตีโอไลติกและคอลลาจิเนส และสามารถใช้ทดแทนเอนไซม์ย่อยทริปซิน-EDTA ได้อย่างสมบูรณ์แบบในการย่อยเซลล์จากภาชนะเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อทั่วไปและภาชนะเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อที่มีการยึดเกาะ Accutase เหมาะสำหรับการแตกตัวของเนื้อเยื่อและการแยกเซลล์ เนื่องจากเซลล์ที่แยกออกมาจะคงแอนติเจนบนพื้นผิวที่สมบูรณ์ไว้ และไม่มีส่วนประกอบใดๆ ที่ได้จากสัตว์หรือแบคทีเรีย ซึ่งสามารถตอบสนองความต้องการของการทดลองในภายหลัง เช่น การติดฉลากบนพื้นผิวเซลล์ การวิเคราะห์การเจริญเติบโตของไวรัส การไหลของไซโตเมทรี และการทดสอบที่เกี่ยวข้องกับไบโอรีแอคเตอร์

พื้นที่การประยุกต์ใช้สำหรับสารทดแทนเอนไซม์ของตับอ่อน

ผลิตภัณฑ์เอนไซม์ PerfCell Tryzyme™ Express มีความบริสุทธิ์สูง ทำลายเซลล์ได้น้อย ย่อยง่าย และสามารถเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้องได้อย่างเสถียร ทำให้เป็นเอนไซม์ย่อยอาหารที่เหมาะสำหรับเพาะเลี้ยงเซลล์สายพันธุ์ต่างๆ ผลิตภัณฑ์ประเภทนี้ไม่จำเป็นต้องใช้สารยับยั้งทริปซินในการทำให้ไม่ทำงาน และไม่มีส่วนประกอบจากสัตว์ ซึ่งเป็นมิตรต่อการทดลองเซลล์ที่ยึดเกาะกับการเจริญเติบโตแบบไม่ใช้ซีรั่มมากกว่า

เกี่ยวกับพื้นที่การใช้งานของการแพร่กระจาย

ดิสเพส II ดิสเพส II เป็นเมทัลโลโปรตีเนสแบบไม่จำเพาะ มักใช้ในทางชีววิทยาเซลล์เพื่อแยกเซลล์เดี่ยวจากเนื้อเยื่อหรืออวัยวะที่แตกต่างกัน และใช้ในการเพาะเลี้ยงเซลล์ในภายหลัง เช่น การแยกเซลล์หลัก การผ่านเซลล์ เป็นต้น และยังสามารถใช้เพื่อกำจัดการรวมตัวของเซลล์ที่เกิดขึ้นระหว่างการเพาะเลี้ยงเซลล์แบบแขวนลอยได้อีกด้วย เมื่อเปรียบเทียบกับโปรตีเอสอื่นๆ ที่ใช้กันทั่วไปในทางชีววิทยาเซลล์ (เช่น ทริปซิน คอลลาจิเนส โพรเนส เป็นต้น) เอนไซม์นี้มีข้อดีดังต่อไปนี้:

1. เอนไซม์ย่อยเซลล์ที่รวดเร็ว มีประสิทธิภาพและอ่อนโยน โดยสร้างความเสียหายต่อเซลล์เพียงเล็กน้อย และสามารถรักษาความสมบูรณ์ของเยื่อหุ้มเซลล์ได้
2. มาจากแบคทีเรีย ปราศจากไมโคพลาสมาหรือไวรัสจากสัตว์อื่นๆ
3. ความคงตัวที่แข็งแกร่ง ไม่ได้รับผลกระทบจากอุณหภูมิ ค่า pH และส่วนประกอบของเซรั่ม
4. สามารถนำไปใช้ในการแยกเนื้อเยื่อและเซลล์ได้หลายประเภท

คำแนะนำสินค้าที่เกี่ยวข้อง

หมายเลขแคตตาล็อก	ชื่อสินค้า	ขนาด
40123ES60	PerfCel™l Trypsin-EDTA (0.25%) ฟีนอลสีแดง	100 มล.
40124ES60	PerfCell™ Trypsin-ไม่มี EDTA (0.25%) ไม่มีฟีนอลแดง	100 มล.
40126ES60	PerfCell™ ทริปซิน (0.25%) ฟีนอลเรด	100 มล.
40127ES60	PerfCell™ Trypsin-EDTA (0.25%) ฟีนอลสีแดง	100 มล.
40101ES25	ทริปซิน 1:250(ผง)	25 กรัม
40512ES10/60	PerfCell™ Recombinant Trypsin (ผง)	10 มก./100 มก.
20416ES60	ทริปซินรีคอมบิแนนท์（MS-SAFE）	100 ไมโครกรัม
40134ES60	เพอร์ฟเซลล์ ไทรไซม์™ เอ็กซ์เพรส	100 มล.
40135ES60	เพอร์ฟเซลล์ ไทรไซม์™ เอ็กซ์เพรส	100 มล.
40506ES60	แอคคูเทส	100 มล.
40104ES60/80	ดิสเพส II	100 มก./1 ก.