รูปที่ 1 จุดตรวจปนเปื้อนไมโคพลาสมาที่กำหนดโดยกฎระเบียบในประเทศและต่างประเทศ

วิธีการตรวจจับไมโคพลาสมาแบบดั้งเดิมประกอบด้วยวิธีการเพาะเลี้ยงและวิธีการตรวจหาเซลล์ตัวบ่งชี้เป็นหลัก อย่างไรก็ตาม เนื่องจากวงจรการตรวจจับที่ยาวนานหรือปัญหาความไวของทั้งสองวิธีนี้ จึงทำให้วงจรการผลิตหรือการปล่อยผลิตภัณฑ์ของบริษัทขยายออกไป ด้วยการพัฒนาของการบำบัดด้วยเซลล์และยีน ข้อกำหนดของอุตสาหกรรมเกี่ยวกับความตรงเวลาและความไวในการตรวจจับไมโคพลาสมาจึงเข้มงวดยิ่งขึ้น อายุการเก็บรักษาที่สั้นไม่เพียงพอที่จะรองรับช่วงเวลาการตรวจจับที่ยาวนานดังกล่าว ซึ่งเป็นสาเหตุที่วิธีการ NAT (การทดสอบกรดนิวคลีอิก) อย่างรวดเร็วจึงโดดเด่นกว่าวิธีการตรวจจับไมโคพลาสมาอื่นๆ

รูปที่ 2 วิธีการตรวจหาไมโคพลาสมาที่ระบุไว้ในกฎระเบียบในประเทศและต่างประเทศ

โดยอาศัยเทคนิค NAT (เทคนิคขยายกรดนิวคลีอิก) Yeasen ได้พัฒนาชุดตรวจหาไมโคพลาสมาแบบรวดเร็วหลายชุด ซึ่งรวมถึงชุดตรวจหาไมโคพลาสมาแบบเรียลไทม์ qPCR ชุดตรวจหาไมโคพลาสมาขั้นตอนเดียว MycAway™ Plus-Color และชุดทดสอบไมโคพลาสมา GMyc-PCR

1.ชุดตรวจหาเชื้อไมโคพลาสมาแบบเรียลไทม์ qPCR

เป็นผลิตภัณฑ์สำหรับการตรวจจับการปนเปื้อนของไมโคพลาสมาในวัตถุดิบการผลิต ธนาคารเซลล์ เมล็ดไวรัส ของเหลวจากไวรัสหรือเซลล์ที่เก็บเกี่ยว และเซลล์ที่ใช้ในการรักษาอย่างรวดเร็ว โดยส่วนใหญ่ใช้ในกระบวนการวิจัย พัฒนา ผลิต และปล่อยผลิตภัณฑ์ทางชีวเภสัชกรรม

คุณสมบัติผลิตภัณฑ์

การปฏิบัติตามกฎข้อบังคับ: ได้รับการตรวจสอบตามข้อกำหนดของเภสัชตำรับ EP2.6.7, JP G3 และ USP 63 และเป็นไปตามมาตรฐานขององค์กรที่มีอำนาจระดับนานาชาติ

การปฏิบัติตามการตรวจสอบ: การผลิตผลิตภัณฑ์เป็นไปตามมาตรฐานระบบการจัดการคุณภาพ ISO13485 และได้รับการสนับสนุนจากเอกสารการตรวจสอบที่ครอบคลุม

การรับรองคุณภาพ: วัตถุดิบเอนไซม์ทั้งหมดที่จำเป็นสำหรับชุดผลิตทั้งหมดผลิตขึ้นเองและผ่านการผลิตในอุตสาหกรรม ทำให้มั่นใจได้ว่าจะมีอุปทานคงที่

การสะสมประสบการณ์ด้านเทคนิค: วิธี TaqMan นั้นมีพื้นฐานทางเทคนิคที่มั่นคง และความไวของชุดทดสอบสามารถไปถึง 10 CFU/mL และต่ำกว่านั้นได้

มุ่งเน้นประสิทธิภาพผลิตภัณฑ์: ห้องสมุดแอนติบอดีเอนไซม์ Taq ซึ่งมีแอนติบอดีบล็อกคู่ ช่วยเพิ่มความจำเพาะ ความไว และความเสถียรของชุดทดสอบ

คุณสมบัติผลิตภัณฑ์

ประเภทการตรวจจับหลายประเภท: หัววัด TaqMan ที่ได้รับการเพิ่มประสิทธิภาพสามารถตรวจจับไมโคพลาสมาได้มากถึง 183 สายพันธุ์

ง่ายต่อการใช้: ระยะเวลารวมในการเตรียมและทดสอบตัวอย่างไม่เกิน 3 ชั่วโมง โดยไม่ต้องรอนานถึง 28 วันสำหรับวิธีการเพาะเลี้ยง

ความไวสูง: ขีดจำกัดในการตรวจจับต่ำเพียง 10 CFU/mL ทำให้เป็นทางเลือกอื่นแทนวิธีการเพาะเลี้ยงโดยตรง

ความจำเพาะสูง: ไพรเมอร์และโพรบได้รับการออกแบบมาเพื่อกำหนดเป้าหมาย 16S rRNA เพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีปฏิกิริยาร่วมกับสปีชีส์ใกล้ชิด เช่น โคลสตริเดียและแลคโตบาซิลลัส

ความปลอดภัยสูง: การควบคุมเชิงบวก (PC) ในชุดไม่ก่อให้เกิดการติดเชื้อ จึงขจัดความเสี่ยงของการปนเปื้อนได้อย่างสมบูรณ์

ความต้านทานการรบกวนที่แข็งแกร่ง: การนำการควบคุมภายใน (IC) มาใช้ช่วยแยกแยะการรบกวนของตัวอย่างและความผิดปกติในการเตรียมปฏิกิริยา ซึ่งจะช่วยหลีกเลี่ยงผลลบเทียมได้อย่างมีประสิทธิภาพ

รูปที่ 3 เวิร์กโฟลว์สำหรับการตรวจหาไมโคพลาสมาโดยใช้ชุดตรวจหาไมโคพลาสมาแบบเรียลไทม์ qPCR

2.ชุดตรวจหาไมโคพลาสมา MycAway™ Plus-Color ขั้นตอนเดียว

ใช้เทคโนโลยีขยายสัญญาณอุณหภูมิคงที่เฉพาะตัว ทำให้สามารถแยกแยะสีได้ดีขึ้น การเปลี่ยนจากสีน้ำเงินอมม่วง (ลบ) เป็นสีฟ้าอ่อน (บวก) มองเห็นได้ง่ายกว่าด้วยตาเปล่า นอกจากนี้ ยังมีส่วนประกอบป้องกันการปนเปื้อนเพื่อขจัดการเกิดผลบวกปลอม

รูปที่ 4: ขั้นตอนการทำงานสำหรับการตรวจหาไมโคพลาสมาโดยใช้ชุดตรวจหาไมโคพลาสมา MycAway™ Plus-Color ขั้นตอนเดียว

3. GMyc-PCR ไมโคพลาสมา การตรวจจับชุด

ต่างจากวิธีการตรวจจับ PCR ขั้นตอนเดียวแบบเดิม จำนวนไพรเมอร์จะเพิ่มขึ้นจากหนึ่งคู่เป็นสามคู่ โดยกำหนดเป้าหมายไปที่บริเวณอนุรักษ์ของไมโคพลาสมา rRNA 16S และ 23S สำหรับการขยาย PCR แบบซ้อน ซึ่งไม่เพียงช่วยลดผลิตภัณฑ์ที่ไม่จำเพาะเท่านั้น แต่ยังเพิ่มความไวของผลิตภัณฑ์อย่างมีนัยสำคัญอีกด้วย ทำให้สามารถตรวจจับไมโคพลาสมาได้น้อยถึงเพียงสำเนาเดียว

-

รูปที่ 5 ขั้นตอนการทำงานตรวจหาเชื้อไมโคพลาสมาด้วยชุดตรวจเชื้อไมโคพลาสมา GMyc-PCR

การกำจัดไมโคพลาสมา

ในกระบวนการเพาะเลี้ยงเซลล์ การทดสอบเป็นประจำสามารถป้องกันการปนเปื้อนไมโคพลาสมาในวงกว้างได้อย่างมีประสิทธิภาพ อย่างไรก็ตาม หากเซลล์ปนเปื้อนไมโคพลาสมาอยู่แล้ว จำเป็นต้องจัดการทันที แนวทางปฏิบัติที่ดีที่สุดคือการฆ่าเชื้อเซลล์ที่ปนเปื้อนภายใต้แรงดันสูง จากนั้นจึงทิ้งไปเพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนเซลล์สายพันธุ์สะอาดอื่นๆ หากเซลล์ที่ปนเปื้อนมีคุณค่าเป็นพิเศษและจำเป็นต้องกำจัดการปนเปื้อนไมโคพลาสมา สามารถใช้ยาปฏิชีวนะหลายชนิดร่วมกันเพื่อบรรลุเป้าหมายนี้ได้ เนื่องจากไมโคพลาสมาไม่มีผนังเซลล์ ยาปฏิชีวนะแบบดั้งเดิมจึงมักไม่มีประสิทธิภาพต่อเซลล์เหล่านี้ ดังนั้น การเลือกสารกำจัดไมโคพลาสมาที่เหมาะสมจึงมีความสำคัญ

YeasenMycAway™ Treatment (1000×) เป็นยาปฏิชีวนะผสมที่มีส่วนประกอบ 3 ชนิดที่มีฤทธิ์ต้านเชื้อไมโคพลาสมา ได้แก่ ควิโนโลน อนุพันธ์เตตราไซคลิน และยาปฏิชีวนะแมโครไลด์ รีเอเจนต์กำจัดไมโคพลาสมาตัวนี้สามารถกำจัดไมโคพลาสมาได้อย่างมีประสิทธิภาพโดยยับยั้งการสังเคราะห์ DNA และการสร้างโปรตีนที่จำเป็นต่อการเจริญเติบโตของไมโคพลาสมา โดยไม่ทำอันตรายต่อเซลล์ ทำให้สามารถกำจัดเซลล์ได้มากที่สุดและลดการสูญเสียเนื่องจากการปนเปื้อนของไมโคพลาสมาให้เหลือน้อยที่สุด

คุณสมบัติผลิตภัณฑ์

ความเป็นพิษต่ำ: ความเป็นพิษต่อเซลล์ขั้นต่ำ ช่วยให้ไม่รบกวนการทดลองเซลล์ในขั้นตอนต่อไป เช่น การถ่ายโอนยีนและการทดสอบความมีชีวิต

ความเสถียรสูง: สารเคมีสามารถเก็บไว้ได้นานที่อุณหภูมิ -20°C และยังคงประสิทธิภาพสูงไว้ได้

ง่ายต่อการใช้: เพียงเติมผลิตภัณฑ์ลงในอาหารเลี้ยงเชื้อที่ปนเปื้อนไมโคพลาสมาและฟัก

ออกฤทธิ์เร็ว: ‘ผลลัพธ์ทันที’ โดยจะมองเห็นได้ชัดเจนภายใน 3 วัน

สเปกตรัมกว้าง: มีความสามารถในการกำจัดไมโคพลาสมาประเภทต่างๆ ส่วนใหญ่ที่พบในห้องปฏิบัติการได้

รูปที่ 6.ภาพประกอบการทดสอบความเป็นพิษต่อเซลล์ด้วยรีเอเจนต์กำจัดไมโคพลาสมา

การป้องกันไมโคพลาสมา

ในกระบวนการเพาะเลี้ยงเซลล์ มักเกิดการปนเปื้อนของไมโคพลาสมา อย่างไรก็ตาม เนื่องจากลักษณะเฉพาะของมัน จึงยากที่จะตรวจพบด้วยตาเปล่าหรือด้วยกล้องจุลทรรศน์ ดังนั้น จึงมีความสำคัญอย่างยิ่งที่จะต้องทำหน้าที่ป้องกันไมโคพลาสมาให้ดี การป้องกันการปนเปื้อนของไมโคพลาสมาที่มีประสิทธิภาพสามารถทำได้โดยการเติมสารป้องกันไมโคพลาสมาลงในอาหารเลี้ยงเชื้อ

ปัจจุบัน ไมโคพลาสมาในห้องปฏิบัติการส่วนใหญ่มีสาเหตุมาจากการปนเปื้อนข้ามเซลล์ การปนเปื้อนของสภาพแวดล้อมการทำงานหรืออุปกรณ์ห้องปฏิบัติการ เทคนิคปลอดเชื้อที่ไม่ดีของผู้ทดลอง อาหารเลี้ยงเชื้อหรือสารเคมีที่ปนเปื้อน และเนื้อเยื่อหรืออวัยวะเดิมที่มีการปนเปื้อนของไมโคพลาสมา ผลิตภัณฑ์ชุดป้องกันไมโคพลาสมาที่พัฒนาโดย Yeasen มีคุณสมบัติที่เรียบง่าย สะดวกสบาย และความเสถียรสูง จึงเหมาะอย่างยิ่งสำหรับการป้องกันไมโคพลาสมาในเซลล์เพาะเลี้ยงทั่วไป

ข้อมูลสินค้า

ผลิตภัณฑ์	หมายเลขแคตตาล็อก	ชื่อสินค้า	ข้อมูลจำเพาะผลิตภัณฑ์
ชุดตัวอย่างการเตรียมผิวเบื้องต้น	18461ES	ชุดเตรียมตัวอย่าง DNA ตกค้างแม่เหล็ก MolPure®	25ตัน/100ตัน
	18467ES	ชุดเตรียมตัวอย่าง MolPure® Mag48 FN	3×16ตัน/ 6×16ตัน
เครื่องมือสกัดกรดนิวคลีอิก	80511ES	เครื่องสกัดกรดนิวคลีอิกอัตโนมัติ 48 ช่อง	48 ช่อง
ชุดตรวจหาไมโคพลาสมา	40619ES	ชุดตรวจหา Mycoplasma แบบเรียลไทม์ qPCR MycAway® (2จี)	25ตัน/100ตัน
	40612ES	ชุดตรวจหาไมโคพลาสมา MycAway™ Plus-Color ขั้นตอนเดียว	25ตัน/100ตัน
	40601ES	ชุดทดสอบไมโคพลาสมา GMyc-PCR	10 บททดสอบ/20 บททดสอบ
น้ำยาขจัดไมโคพลาสมา	40607ES	มายค์อะเวย์ทีเอ็ม Treatment (1000×) - น้ำยาขจัดไมโคพลาสมา	1มล./5×1มล.
สารป้องกันไมโคพลาสมา	40608ES	มายค์อะเวย์ทีเอ็ม น้ำยาป้องกันไมโคพลาสมา (2000×)	1มล./5×1มล.
	40605ES	มายค์อะเวย์ทีเอ็ม สเปรย์ (พร้อมใช้งาน)	500มล./2×500มล./10×500มล.
	40609ES	มายการ์ดทีเอ็ม-1 สารละลาย (100×) สำหรับฆ่าเชื้อในอ่างน้ำของตู้ฟัก CO2	100มล.
	40610ES	มายการ์ดทีเอ็ม-2 สารละลาย (500×) สำหรับฆ่าเชื้อในอ่างน้ำธรรมดา	100มล.