เทคโนโลยีการขยายกรดนิวคลีอิกแบบไอโซเทอร์มอลสามารถแบ่งออกได้เป็นหลายประเภทตามหลักการขยายที่แตกต่างกัน ในปัจจุบัน เทคโนโลยีการขยายกรดนิวคลีอิกแบบไอโซเทอร์มอลที่ใช้ลูปเป็นตัวกลาง (LAMP) เป็นเทคโนโลยีที่ใช้กันแพร่หลายที่สุดและแพร่หลายที่สุด ซึ่งพัฒนาโดยนักวิชาการชาวญี่ปุ่น Notomi et al. ในปี 2000 Bst DNA polymerase เป็นเอนไซม์หลักของเทคโนโลยีการขยายกรดนิวคลีอิกแบบไอโซเทอร์มอล Bst DNA polymerase ใน LAMP มีหน้าที่และประสิทธิภาพอย่างไร

1. Bst DNA polymerase มีบทบาทอย่างไรใน LAMP
2. Lyophilized Bst Plus DNA Polymerase คืออะไร?
3.ผลิตภัณฑ์มีคุณสมบัติอย่างไร แช่เยือกแข็ง บีเอสที พลัส ดีเอ็นเอ โพลิเมอเรส(14405ES)-
4. ผลิตภัณฑ์ Lyophilized มีประสิทธิภาพอย่างไร บีเอสที พลัส ดีเอ็นเอ โพลิเมอเรส(14405ES)?
5. สินค้าที่เกี่ยวข้อง
6. เรื่องการอ่านหนังสือ

1. Bst DNA polymerase มีบทบาทอย่างไรใน LAMP

คุณสมบัติทางเทคนิคของ LAMP คือการออกแบบไพรเมอร์สี่ตัวสำหรับยีนเป้าหมายหกภูมิภาคและดำเนินปฏิกิริยาการขยายโดยใช้ BST DNA polymerase ภายใต้สภาวะอุณหภูมิคงที่ 60~65 ℃ ทำให้ขยายได้ 109-1010 เท่าภายใน 15-60 นาที Bst DNA polymerase มีเสถียรภาพทางความร้อนสูง มีกิจกรรมการเคลื่อนตัวของสาย และกิจกรรมของพอลิเมอเรส สามารถเป็นเทมเพลตการขยายที่รวดเร็ว มีประสิทธิภาพ และเฉพาะเจาะจงภายใต้สภาวะอุณหภูมิคงที่โดยไม่ต้องใช้วงจรขยายการเปลี่ยนแปลงสภาพทางความร้อนด้วย PCR และทำการทดลอง LAMP ทั้งหมดให้เสร็จสิ้นภายใน 1 ชั่วโมง

2. Lyophilized Bst Plus DNA Polymerase คืออะไร?

โพลิเมอร์ดีเอ็นเอ Bst Plus แบบไลโอฟิไลซ์ใช้สำหรับแช่แข็งโพลิเมอร์ดีเอ็นเอ Bst Plus ที่ปราศจากกลีเซอรอล ซึ่งช่วยแก้ปัญหาความไม่เสถียรของเอนไซม์ Bst ที่ปราศจากกลีเซอรอล ในเวลาเดียวกัน ผลิตภัณฑ์นี้มีกิจกรรมโพลิเมอร์ดีเอ็นเอ 5'-3' ที่แข็งแกร่ง กิจกรรมการเคลื่อนย้ายสาย และความทนทานต่อ dUTP ซึ่งเหมาะสำหรับปฏิกิริยาการขยายไอโซเทอร์มอลต่อต้านมลพิษมากกว่า สะดวกสำหรับลูกค้าในการใช้ในการผลิตผลิตภัณฑ์แช่แข็งแห้ง

รูปที่ 1: 14405ES-Lyophilized Bst Plus DNA Polymerase (60 U/μL, ปราศจากกลีเซอรอล)

3. คุณสมบัติของสินค้า Lyophilized คืออะไร บีเอสที พลัส ดีเอ็นเอ โพลิเมอเรส(14405ES)?

• เอนไซม์ที่ปราศจากกลีเซอรอล เหมาะสำหรับการทำแห้งแบบแช่แข็ง
• ขนส่งในอุณหภูมิปกติเพื่อลดต้นทุน
• กิจกรรมการเคลื่อนตัวของเส้นใยที่แข็งแกร่ง มีความละเอียดอ่อนและมีเสถียรภาพ
• การละลายซ้ำอย่างรวดเร็วและการทำงานที่สะดวกสบาย

4. ผลิตภัณฑ์ Lyophilized มีประสิทธิภาพอย่างไร บีเอสที พลัส ดีเอ็นเอ โพลิเมอเรส(14405ES)?

4.1 รูปร่างของผงแห้งแบบแช่แข็ง: เมื่อเปรียบเทียบกับโมเมนต์ T0 รูปร่างของผงจะยังคงไม่เปลี่ยนแปลงหลังจากการทำให้แห้งแบบแช่แข็งที่ 45 ℃ - 15 วัน

รูปที่ 2. รูปร่างผง Freeze-Dried

4.2 ความเสถียร

ประสิทธิภาพของผงแช่แข็งแห้งหลังจากการเร่งด้วยความร้อนยังคงสอดคล้องกับประสิทธิภาพของรีเอเจนต์ของเหลว และผงแช่แข็งแห้ง (14405ES) คือ
สากลและสามารถนำไปใช้กับวิธีสีย้อมเรืองแสงและวิธีตัวบ่งชี้ค่า pH ได้

4.2.1 วิธีการย้อมเรืองแสง——ความเสถียร

ในระบบขยายสีย้อมเรืองแสง RT-LAMP ประสิทธิภาพของผง Bst แช่แข็งแห้งที่ปราศจากกลีเซอรอลหลังจากเร่งความร้อน T0 45℃-7 วัน และ 45℃-15 วัน จะสอดคล้องกับประสิทธิภาพของเอนไซม์ Bst ปราศจากกลีเซอรอลในรูปแบบของเหลว และ NTC จะไม่ถึงจุดสูงสุด

เงื่อนไขการทดลอง:

หมายเหตุ: กลุ่มควบคุมเป็นเวอร์ชันของเหลวที่ไม่มีเอนไซม์ Bst กลีเซอรอลที่มีความเข้มข้นเท่ากัน

รูปที่ 3 ผลการทดสอบความเสถียร

4.2.2 วิธีการใช้สีย้อมเรืองแสง——ประสิทธิภาพของเอนไซม์ Bst หลังจากการอบแห้งแบบแช่แข็งของระบบ RT-LAMP

ในระบบขยายสีย้อมเรืองแสง RT-LAMP ประสิทธิภาพของผลิตภัณฑ์ผง Bst แช่แข็งแห้งแบบไม่มีกลีเซอรอลในระบบ RT-LAMP หลังจาก 45 ℃ - 15 วัน สอดคล้องกับเวอร์ชันของเหลวของเอนไซม์ Bst แช่แข็งแห้ง อัตราการตรวจจับของผลิตภัณฑ์ในกลุ่มควบคุมและระบบ RT-LAMP หลังจากแห้งแบบไม่มีกลีเซอรอลคือ 100% (16/16) และ 94% (15/16) ตามลำดับ

เงื่อนไขการทดลอง:

หมายเหตุ: กลุ่มควบคุมเป็นเวอร์ชันของเหลวที่ไม่มีเอนไซม์ Bst กลีเซอรอลที่มีความเข้มข้นเท่ากัน

รูปที่ 4 การทำงานของเอนไซม์ Bst หลังจากการอบแห้งแบบแช่แข็งของระบบ RT-LAMP

4.2.3 วิธีตัวบ่งชี้ค่า pH ——ความคงตัว

ในระบบขยายตัวบ่งชี้ pH ของ RT-LAMP เมื่อเปรียบเทียบกับเวลา T0 อัตราการตรวจจับผง Bst ที่ผ่านการแช่แข็งแห้งคือ 88% (7/8) หลังจากการเร่งด้วยความร้อนที่ 45 ℃ - 15 วัน

เงื่อนไขการทดลอง:

หมายเหตุ: กลุ่มควบคุมเป็นเวอร์ชันของเหลวที่ไม่มีเอนไซม์ Bst กลีเซอรอลที่มีความเข้มข้นเท่ากัน

รูปที่ 5 ผลการทดสอบความเสถียร

4.2.วิธีการระบุค่า pH 4——ความเสถียรของการแช่แข็งซ้ำ

ในระบบขยายตัวบ่งชี้ pH ของ RT-LAMP หลังจากแช่แข็งซ้ำที่อุณหภูมิ 45 ℃ เป็นเวลา 7 วัน ประสิทธิภาพจะเสถียร กลุ่มควบคุมคือเอนไซม์ Bst ในรูปแบบของเหลว เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุม อัตราการตรวจจับของ 14405ES หลังจากเร่งด้วยความร้อนคือ 94% (30/32)

เงื่อนไขการทดลอง:

หมายเหตุ: กลุ่มควบคุมเป็นเวอร์ชันของเหลวที่ไม่มีเอนไซม์ Bst กลีเซอรอลที่มีความเข้มข้นเท่ากัน

รูปที่ 6 ผลการทดสอบความเสถียรของการแช่แข็งซ้ำ

4.3 ความเฉพาะเจาะจง

ในระบบขยายสีย้อมเรืองแสง RT-LAMP NTC 48 หลุมไม่ได้มีค่าสูงสุด และความจำเพาะของ 14405ES อยู่ที่ 100%

เงื่อนไขการทดลอง:

หมายเหตุ: กลุ่มควบคุมเป็นเวอร์ชันของเหลวที่ไม่มีเอนไซม์ Bst กลีเซอรอลที่มีความเข้มข้นเท่ากัน

รูปที่ 7 ผลลัพธ์เฉพาะ

5. สินค้าที่เกี่ยวข้อง

สินค้าที่เกี่ยวข้องที่ Yeasen สามารถให้ได้ดังแสดงไว้ในตารางที่ 1

ตารางที่ 1.สินค้าที่เกี่ยวข้อง

6. เรื่องการอ่านหนังสือ

เลือกวัตถุดิบเอนไซม์หลักที่เหมาะสมเพื่อให้ LAMP /RT-LAMP มีความไวและรวดเร็วมากขึ้น!

แนวทางการคัดเลือกเอนไซม์ทรานสคริปเทสย้อนกลับ

Yeasen UDG: “ผู้เชี่ยวชาญการป้องกันการเกาะติด” ในปฏิกิริยา PCR