การวัดปริมาณกรดนิวคลีอิกซึ่งเป็นหนึ่งในการทดลองพื้นฐานที่สุดในชีววิทยาโมเลกุล ส่งผลโดยตรงต่อผลลัพธ์ของการทดลองต่อเนื่อง ความแม่นยำของการวัดปริมาณกรดนิวคลีอิกถือเป็นสิ่งสำคัญ ปัจจุบันมีวิธีหลักสองวิธีในการวัดปริมาณไลบรารี NGS ได้แก่ วิธีการดูดกลืนรังสีอัลตราไวโอเลต และวิธีการใช้สีย้อมเรืองแสง

วิธีการดูดกลืนแสงอัลตราไวโอเลตใช้เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ในการวัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 260 นาโนเมตรสำหรับการวัดปริมาณดีเอ็นเอและอาร์เอ็นเอ นอกจากนี้ยังประมาณความบริสุทธิ์ของกรดนิวคลีอิกโดยการคำนวณอัตราส่วน OD260/OD280 อย่างไรก็ตาม ค่าที่ตรวจพบมีความอ่อนไหวสูงต่อการรบกวนจากสารปนเปื้อนอื่นๆ เช่น นิวคลีโอไทด์อิสระ เกลือ และสารประกอบอินทรีย์

การวัดปริมาณฟลูออโรเมตริกของคิวบิตใช้สีย้อมเรืองแสงที่จับกับดีเอ็นเอสายคู่ ดีเอ็นเอสายเดี่ยว อาร์เอ็นเอ หรือโปรตีนโดยเฉพาะ เมื่อถูกกระตุ้นด้วยแหล่งกำเนิดแสงที่มีความยาวคลื่นเฉพาะ สีย้อมจะเปล่งแสงเรืองแสง ซึ่งจะไม่ได้รับผลกระทบจากโมเลกุลสิ่งเจือปนอื่นๆ ที่อาจอยู่ในตัวอย่าง ความเข้มของแสงเรืองแสงจะแปรผันตามความเข้มข้นของโมเลกุลเป้าหมายในตัวอย่าง

ตารางที่ 1 การเปรียบเทียบวิธีการวัดปริมาณกรดนิวคลีอิกแบบหลัก

เป้า	ยูวี เอบีเอส (นาโนดรอป)	คิวบิต ดีเอ็นเอ เอชเอส	คิวบิต ดีเอ็นเอ บีอาร์	คิวบิตอาร์เอ็นเอ	คิวบิต ssDNA
ชนิดของกรดนิวคลีอิก	ดีเอ็นเอ,อาร์เอ็นเอ	ดีเอสดีเอ็นเอ	ดีเอสดีเอ็นเอ	อาร์เอ็นเอ	ssDNA,โอลิโก
ความเข้มข้นของตัวอย่าง (ng/μL)	2 นาโนกรัมต่อไมโครลิตร-15 ไมโครกรัมต่อไมโครลิตร	10 pg/µL-100 ng/µL	0.1 นาโนกรัม/µL-1000 นาโนกรัม/µL	250 พีจี/µl-1000 นาโนกรัม/µl	50 pg/μL-200 ng/μL
ข้อได้เปรียบ	ขีดจำกัดการวัดที่สูงกว่า	ความเฉพาะเจาะจงดี	มีขอบเขตการวัดที่กว้าง	มีการคัดเลือก RNA สูง	ทนทานดี
ข้อจำกัด	ความจำเพาะไม่ดี	ป้องกันแสงขณะใช้งาน	ป้องกันแสงขณะใช้งาน	ป้องกันแสงขณะใช้งาน	ความจำเพาะต่ำและยังจับกับ dsDNA ด้วย

การดูดกลืนแสงยูวีและการวัดปริมาณฟลูออโรเมตริกของ Qubit ต่างก็มีข้อดีและสามารถเสริมซึ่งกันและกันได้ สำหรับการวัดปริมาณเบื้องต้นของตัวอย่างกรดนิวคลีอิกทั่วไปเพื่อกำหนดความเข้มข้น ความบริสุทธิ์ และการมีอยู่ของสารปนเปื้อน สามารถเลือกวิธีการวัดปริมาณการดูดกลืนแสงได้ การวัดปริมาณคิวบิตเหมาะสำหรับตัวอย่างมีค่าที่มีความเข้มข้นต่ำหรือการวัดปริมาณที่แม่นยำซึ่งจำเป็นสำหรับการทดลองปลายน้ำ เช่น การจัดลำดับรุ่นถัดไปและ PCR เชิงปริมาณแบบเรียลไทม์

Yeasen ได้เปิดตัวผลิตภัณฑ์วัดปริมาณ Qubit หลายรายการ: ชุดทดสอบ dsDNA HS สำหรับ Qubit (หมายเลขสินค้า #12640) พร้อมใช้งาน: ชุดทดสอบ dsDNA HS สำหรับ Qubit 1 ชุด (Cat#12642) ชุดทดสอบ ssDNA สำหรับ Qubit (หมายเลขหมวดหมู่ 12645) และ dsDNA BR Assay Kit (หมายเลขหมวดหมู่ 12643) ซึ่งได้รับการยกย่องอย่างกว้างขวางนับตั้งแต่เปิดตัว

โซลูชัน 1 dsDNA HS การวัดค่าความไวสูง

พรีมิกซ์สำหรับวัดปริมาณ dsDNA แบบพร้อมใช้งาน—ชุดทดสอบ dsDNA HS 1× สำหรับ Qubit

^{ใช้งานง่าย: พรีมิกซ์พร้อมใช้งาน ไม่จำเป็นต้องผสมล่วงหน้า}

^{ความไวสูง: ตรวจจับความเข้มข้นต่ำถึง 50 pg/μL}

^{เสถียรภาพที่ดี: สัญญาณการเรืองแสงคงอยู่ได้นาน 3 ชั่วโมง และการเก็บรักษาที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 20 วันไม่ส่งผลกระทบต่อความแม่นยำของการวัดปริมาณ}

^{A. ความเสถียรที่ยอดเยี่ยม: การจัดเก็บที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 2 สัปดาห์ยังคงมีเสถียรภาพ (ค่าที่วัดได้เบี่ยงเบนจากค่าทางทฤษฎีน้อยกว่า 10%)}

ตารางที่ 2 การทดสอบเสถียรภาพของตัวอย่างต่างๆ ที่อุณหภูมิ 4°C และอุณหภูมิห้องเมื่อเปรียบเทียบกับผลิตภัณฑ์คู่แข่ง

สารเคมีเชิงปริมาณ	มุ่งมั่น ความเข้มข้น ของ λDNA（ng/μL）
	0วัน		1วัน		3 มิติ	7วัน			10วัน		14วัน
ต* 4℃	0.51		0.496		0.524	0.534			0.495		0.499
Yeasen 4℃	0.51		0.508		0.513	0.475			0.48		0.495
Yeasen อุณหภูมิห้อง พื้นที่จัดเก็บ	0.51		0.517		0.506	0.486			0.506		0.523
สารเคมีเชิงปริมาณ	มุ่งมั่น ความเข้มข้น ของลูกวัว gDNA（ng/μL）
	0วัน	1วัน		3 มิติ			7วัน	10วัน		14วัน
ต* 4℃	55.3	53.5		55.40			57.9	55.8		58
Yeasen 4℃	59.4	55.4		57.8			56.1	56.3		59.8
Yeasen อุณหภูมิห้อง พื้นที่จัดเก็บ	59	55.7		61.3			58	58.7		56.1

B. ความไวสูง ความเสถียรของชุดต่อชุดดี

ตารางที่ 3.การทดสอบเสถียรภาพของแบตช์ที่แตกต่างกัน

บีแมทช์	ตัวอย่าง	ล*			Yeasen			ข้อผิดพลาด
		ความเข้มข้น1（ng/μL）	ความเข้มข้น2（ng/μL）	ค่าเฉลี่ย (นาโนกรัม/ไมโครลิตร)	ความเข้มข้น1（ng/μL）	ความเข้มข้น2（ng/μL）	ค่าเฉลี่ย (นาโนกรัม/ไมโครลิตร)
D9801060	λDNA	0.3160	0.3250	0.3205	0.320	0.320	0.320	0.16%
D8801050		0.3310	0.3320	0.3315	0.319	0.306	0.3125	5.73%
D7813110		0.345	0.358	0.352	0.334	0.329	0.332	-6.03%

โซลูชัน 2 dsDNA BR การวัดปริมาณแบบช่วงกว้าง

การวัดปริมาณ dsDNA ช่วงกว้าง—ชุดทดสอบ dsDNA BR

ความไวสูง: ตรวจจับความเข้มข้นต่ำถึง 50 pg/μL

ความเป็นเส้นตรงที่ยอดเยี่ยม: ความเป็นเส้นตรงที่ดีในช่วง 2-1000 ng;

ความทนทานต่อสารปนเปื้อนที่แข็งแกร่ง: สามารถทนต่อสารปนเปื้อนทั่วไปได้

ตารางที่ 4 ความเสถียรและความทนทานต่อสารปนเปื้อนเมื่อเทียบกับคู่แข่ง

Yeasen บีอาร์						ต* บีอาร์
มาตรฐาน	รฟยู1	รฟยู2	ค่าเฉลี่ย	ข้อผิดพลาด		มาตรฐาน	รฟยู1	รฟยู2	ค่าเฉลี่ย	ข้อผิดพลาด
เอสวัน	159.63	160.71	160.17	1%		เอสวัน	216.17	211.56	213.865	-2%
S2	24497.0	25078.64	24787.82	2%		S2	20532.46	20452.26	20492.36	0%
การวัด						การวัด
สารปนเปื้อน	ความเข้มข้นในตัวอย่าง 10 μL	ความเข้มข้น1	ความเข้มข้น2	ค่าเฉลี่ย	ที่ต้องทดสอบ/ควบคุม	สารปนเปื้อน	ความเข้มข้นในตัวอย่าง 10 μL	ความเข้มข้น1	ความเข้มข้น2	ค่าเฉลี่ย	ที่ต้องทดสอบ/ควบคุม
การควบคุม (เอช2โอ)	-	49	48.6	48.8	0.0%	การควบคุม (เอช2โอ)	-	49.8	48	48.9	0.0%
บีเอสเอ	1มก./มล.	51.8	52	51.9	6.4%	บีเอสเอ	1มก./มล.	54	51.2	52.6	7.6%
เอธานอล	20%	44.6	44	44.3	-9.2%	เอธานอล	20%	44.8	43.4	44.1	-9.8%
คลอโรฟอร์ม	4.00%	49.0	49.8	49.4	1.2%	คลอโรฟอร์ม	4.00%	50.0	47	48.5	-0.8%
เอสดีเอส	0.2%	46.6	45.8	46.2	-5.3%	เอสดีเอส	0.2%	53.2	51.6	52.4	7.2%
ไทรชั่น-X100	0.20%	41.6	40.6	41.1	-15.8%	ไทรชั่น-X100	0.20%	53	51	52.0	6.3%
dNTPs	2ม.ม.	44.2	45	44.6	-8.6%	dNTPs	2ม.ม.	47.8	46.4	47.1	-3.7%

โซลูชันที่ 3 การหาปริมาณ ssDNA

ตัวเลือกที่เหมาะสำหรับการวัดปริมาณ ssDNA—ชุดทดสอบ ssDNA ที่มีประสิทธิภาพคุ้มต้นทุนสูงสำหรับ Qubit

^{ความไวสูง: ตรวจจับความเข้มข้นต่ำถึง 50 pg/μL
ความเป็นเส้นตรงที่ยอดเยี่ยม: ความเป็นเส้นตรงที่ดีในช่วง 0-200 ng;
สัญญาณเสถียร: สีย้อมคุณภาพเยี่ยมที่ใช้ร่วมกับบัฟเฟอร์ที่ได้รับการอัพเกรดให้เหมาะสม สามารถรักษาความเข้มของการเรืองแสงให้คงที่ที่อุณหภูมิห้อง และสามารถใช้ได้อย่างมีประสิทธิภาพแม้ในสภาพแวดล้อมที่มีมลพิษทั่วไป เช่น เกลือ นิวคลีโอไทด์อิสระ ตัวทำละลาย ผงซักฟอก หรือโปรตีน ช่วยให้วัดปริมาณได้อย่างแม่นยำ
ความเสถียรที่ดี: ไม่มีการเปลี่ยนแปลงประสิทธิภาพที่สำคัญหลังการบำบัดที่อุณหภูมิ 4°C หรือ 25°C เป็นเวลา 6 เดือน
ขอบเขตการใช้งานที่กว้างขวาง: กระบวนการทำงานที่เรียบง่าย ช่วยให้สามารถวัดปริมาณโอลิโคนิวคลีโอไทด์ ไพรเมอร์ DNA ที่ถูกเปลี่ยนสภาพ DNA วงจรสายเดี่ยว ฯลฯ ได้อย่างรวดเร็ว}

A. ความสามารถในการทำซ้ำได้ดี: การวัดปริมาณในเครื่องมือคิวบิตที่แตกต่างกัน ประเภทของตัวอย่างที่แตกต่างกันโดยใช้ Yeasen ทดสอบ Cat#12645 หลายชุดแล้ว อยู่ในช่วง 0-200ng ความสามารถในการทำซ้ำได้ดีในการวัดจากเครื่องมือ Qubit ต่างๆ