giriiş
İlaç geliştirmede vazgeçilmez bir temel araç olan Luciferase muhabir gen Analiz Kitleri, gen ifadesini ve sinyal iletimini gerçek zamanlı olarak izleme yetenekleri nedeniyle yüksek verimli tarama, etkinlik değerlendirmesi ve hedef doğrulama gibi temel süreçlerde önemli bir rol oynar. Bu teknolojinin uygulanması, ilaç taraması ve değerlendirmesinin verimliliğini önemli ölçüde artırarak yeni ilaçların keşfini ve geliştirilmesini hızlandırmıştır.
Luciferase Reporter Gen Tespiti Prensibi
Luciferase muhabir gen tespit teknolojisi, luciferinin oksiluciferine oksidasyonunu katalize ederek ve biyolüminesans oluşturarak ateş böceği luciferaz aktivitesinin kantitatif analizini sağlar. Bu teknoloji, miRNA hedef gen doğrulaması ve promotör transkripsiyonel aktivite düzenlemesi alanlarında önemli uygulama değerine sahiptir. Luciferase geninin yukarı ve aşağı akışına hedef genin düzenleyici elemanlarını ekleyerek bir luciferase muhabir plazmidi oluşturarak hücreler transfekte edilebilir ve karşılık gelen uyarım veya işleme tabi tutulabilir. Daha sonra, hücreleri lize ederek ve luciferase aktivitesini ölçerek, farklı uyarım koşulları altında düzenleyici elemanların aktivite değişimleri değerlendirilebilir ve böylece genin düzenleyici mekanizmaları hakkında daha derin bir anlayış elde edilebilir. ifade.
Tek ve çift lüsiferaz tespiti uygulamaları arasındaki farklar
Muhabir gen analizleri temel olarak tek-lüsiferaz muhabir gen analizleri ve çift-lüsiferaz muhabir gen analizleri olarak ikiye ayrılır. Belirli uygulamalarda, deneyin tek-lüsiferaz mı yoksa çift-lüsiferaz tespit sistemi mi kullandığını nasıl belirleyebilirsiniz? Farklılıklara bir göz atalım.
Tek Lüsiferaz Raporlayıcı Analiz Sistemi
Muhabir Gen Sayısı: Tek bir ateş böceği lüsiferaz haberci geni;
Transfeksiyon Tipi: Tek bir haberci gen plazmidi, transfeksiyondan sonra, ilaç seçimi kullanılarak, lüsiferaz ekspresyonu gösteren stabil bir haberci gen hücre hattı oluşturulur;
Tespit Süreci: Sadece ateş böceği lüsiferaz sinyalinin tespit edilmesi yeterlidir, basit çalışma, kısa tespit süresi, yüksek verimli ilaç taramaları için uygundur;
Uygulama Senaryosu Analizi: Genellikle kararlı aşırı ifade eden bir monoklonal hücre hattının inşasıyla olur, çünkü bu hücre hatlarının ifade seviyesi, transfeksiyon verimliliği ve hücre canlılığı nedeniyle deneysel varyasyonların etkisi olmadan nispeten kararlı ve düzgündür. İşlem basittir ve yalnızca ateş böceği lüsiferaz sinyali tespit edildiğinden, veri analizi daha uygundur. Kısa tespit süresinin avantajlarıyla birleştiğinde, özellikle yüksek verimli ilaç taraması için uygundur ve büyük ölçekli örnek tespitinin ihtiyaçlarını karşılar.
Çift-Lusiferaz Raporlayıcı Gen Tespit Sistemi
Bildirilen Gen Miktarı: Ateş böceği lüsiferazının ve Renilla lüsiferazının çift muhabir genleri;
Transfeksiyon Tipi: İki haberci gen plazmidinin, esas olarak geçici transfeksiyon yoluyla, eş-transfeksiyonu;
Tespit Süreci: Öncelikle ateş böceği sinyalinin, ardından da Renilla sinyalinin algılanması ve ikisinin oranının (Ateş Böceği/Renilla) nihai veri hesaplamasında kullanılması gerekmektedir;
Uygulama Senaryosu Analizi: Genellikle geçici transfeksiyon yoluyla, deney için bir kıstas sağlayan dahili referans olarak Renilla luciferase genini içeren bir plazmidin eş transfeksiyonu ile yapılır, böylece hücre canlılığı ve transfeksiyon verimliliği gibi dış faktörlerin müdahalesi azaltılır. Oran hesaplaması yoluyla, hücre sayısındaki, transfeksiyon verimliliğindeki ve hücre aktivitesindeki varyasyonları düzeltmek, deneysel sonuçların doğruluğunu artırmak mümkündür. Gen ifadesi düzenlemesi, sinyal iletim yolları ve ilaç taraması alanlarında önemli bir araçtır.
ürün serisi
Yeasen Luciferase Reporter Gen Detection ürün serisi, kullanışlı ve etkili bir kantitatif tespit çözümü sunar. Tek bileşenli tasarım, kullanım sürecini basitleştirir ve yüksek hassasiyetin 5 saatlik süper uzun sinyal yarı ömrüyle mükemmel birleşimi, büyük ölçekli ilaç tarama tespitinin ihtiyaçlarını karşılar. Farklı hassasiyet ve kararlılık gereksinimlerine uyum sağlamak için üç ürün sunuyoruz: Bio-One Step, Steady-One Step ve Bright-One Step.
| ürün adı | Biyo-Bir Adım | Sabit-Bir Adım | Parlak-Bir Adım |
| Ürün Kodu | |||
| Uygulama Senaryoları ve Özellikler | Bu kit, sinyal yoğunluğu ve kararlılık arasında göreceli bir denge kurar. Belirli bir zaman dilimi boyunca sinyal yoğunluğunu nispeten sabit tutarken nispeten yüksek bir sinyal yoğunluğunu korur. | Yarı ömür 5 saatten fazla sürebilir. Özellikle ilk 2 saat içinde lüminesans değeri değişimleri minimumdur. Ultra yüksek verimli veya 384-kuyulu plaka analizleri için uygundur. | Yüksek hassasiyet ve yüksek sinyal yoğunluğu. Yüksek hassasiyet gerektiren deneyler için uygundur. |
| Sinyal Yarı Ömrü | 60 dakika | 5 saat | 30 dakika |
| Operasyonel Özellikler | Bir Adım | Bir Adım | Bir Adım |
Ürün Avantajları
Uzun sinyal yarı ömrü: Sinyal yarı ömrü 5 saate kadar ulaşabilmekte olup, yüksek verimli deneylerin ihtiyacını karşılamakta ve çok sayıda örnek nedeniyle ilk ve son kuyular arasındaki zaman farkından kaynaklanan sinyal farklılıklarını önleyerek daha kararlı ve güvenilir sonuçlar sağlamaktadır.
Güçlü floresan sinyali: Sinyal değeri 8 büyüklük mertebesine kadar ulaşabiliyor, bu da erken ilaç taraması ve etkinlik değerlendirmesi için geniş bir tespit penceresi ve güçlü veri desteği sağlıyor.
Kolay kullanım: Tek adımlı işlem karmaşık deneysel prosedürlerden kaçınır. Sadece tespit reaktifini ekleyin ve tespit için makineyi başlatmadan önce 5 dakika bekleyin.
Çoktan seçmeli: Farklı uygulama senaryolarına göre, sinyal değeri ve sinyal kararlılığına yönelik deneysel gereksinimlere bağlı olarak seçilebilecek 3 farklı ürün mevcuttur.
Ürün Verileri
01 Yeasen için Performans Karşılaştırması Farklı Muhabir Geni Deneme Kitleri
Üç tip Analiz Kitinin doğrulanması Ateş böceği lüsiferazını stabil şekilde ifade eden hücre hatlarında gerçekleştirilen çalışmada, Bright-One Step ürününün daha yüksek sinyal değerlerine sahip olduğu; Steady-One Step ürününün daha uzun bir sinyal yarı ömrüne ve daha stabil sinyallere sahip olduğu; Bio-One Step ürününün ise sadece yüksek sinyal değerlerine sahip olmadığı, aynı zamanda daha uzun bir sinyal yarı ömrüne sahip olduğu görülmüştür.
Şekil 1. Farklı Yeasen Reporter Gen Analiz Kitleri için Performans Karşılaştırması
02 Yeasen Bio-One Step Luciferase Reporter Gen Tespiti Reaktifinin Rakip Ürünlerle Karşılaştırılması
Ateş böceği lüsiferazını stabil olarak aşırı ifade eden bir hücre hattında Yeasen Bio-One Step, rakip P ve rakip V kullanıldığında, sonuçlar Yeasen Bio-One Step'in sinyal değeri ve sinyal yarı ömrünün esasen rakip P ile tutarlı olduğunu ve sinyal yarı ömrünün rakip V'den üstün olduğunu göstermektedir.
Şekil 2. Yeasen Bio-One Step Luciferase Reporter Gen Tespiti Reaktifinin Rakipleriyle Karşılaştırılması
03 Yeasen Bio-One Step Luciferase Reporter Gen Tespiti Reaktifi Donma-Çözülme Stabilite Testi
Yeasen Bio-One Step Luciferase Reporter Gen Detection Reagent, tekrarlanan dondurma-çözme deneylerine tabi tutuldu ve sonuçlar, 5 dondurma-çözme döngüsünden sonra bile ürün performansının önemli bir değişiklik göstermeden stabil kaldığını gösterdi.
Şekil 3.Yeasen Bio-One Step Luciferase Reporter Gen Tespit Reaktifinin Tekrarlanan Dondurma-Çözme Testi
Operasyonel Prosedür
01 Hücre Transfeksiyonu
Reaktifi doğrudan hücre süspansiyonuna ekleyin, sonra iyice karışmasını sağlamak için 5 kez yukarı aşağı pipetleyin, hücrenin tamamen lizisine izin vermek için 5 dakika bekleyin.
02 Örnek Yükleme
Karışımdan (tespit reaktifi + hücre kültürü ortamı) 100 μL'yi tespit plakasının her bir kuyusuna pipetleyin.
03 Floresan Tespiti
Plaka okuyucusundaki parametreleri ayarlayın. Algılama plakasını plaka okuyucusuna yerleştirin, birkaç saniye titretin ve ardından algılamaya devam edin.
Ürün Listesi
| Ürün Kategorisi
| Ürün Adı | Ürün Kodu | Ürün Özellikleri |
| Luciferase Reporter Gen Analiz Kiti | 11411ES60/80/81 | 100T/10×100T/1000T | |
| 11413ES60/80/81 | 100T/10×100T/1000T | ||
| 11412ES60/80/81 | 100T/10×100T/1000T | ||
| Çift-Lusiferaz Raporlayıcı Gen Analiz Kiti
| 11402ES60/80 | 100T/1000T | |
| 11405ES60/80 | 100T/1000T |