1 Blasticidin S'nin Etki Mekanizması
Blastisidini S Streptomyces griseochromogenes'ten elde edilen, prokaryotik ve ökaryotik hücrelerde protein sentezini ribozomdaki peptit bağlarının oluşumuna müdahale ederek spesifik olarak engelleyen bir nükleozid antibiyotiktir. Etki mekanizması, salım faktörleri tarafından indüklenen peptidil-tRNA'nın hidrolizini bloke etmeyi ve tRNA'nın büyük ribozomal alt birime bağlanmasını artırmayı içerir, böylece peptit bağlarının oluşumunu belirli bir ölçüde engeller.
Blasticidin S hızlı ve güçlü bir etki mekanizmasına sahiptir ve çok düşük antibiyotik konsantrasyonları hızlı hücre ölümüne yol açabilir. Sadece bakteri ve ökaryotlarda protein sentezinin önemli bir inhibisyonuna sahip olmakla kalmaz, aynı zamanda mantarlara, nematodlara ve tümör hücrelerine karşı da aktivite gösterir. Pltocidin S genellikle bsr veya BSD genleri taşıyan transfekte hücreleri taramak için kullanılır.
2 Blasticidin S'nin Uygulanması
2.1 Hücre Kültürü ve Tarama
- Memeli hücreleri: Blast S, genellikle bsr veya BSD genleri taşıyan transfekte hücreleri taramak için kullanılır. Sırasıyla B. cereus ve Aspergillus'tan gelen bu direnç genleri, murancidini avirulent türevlere dönüştürebildi ve böylece direnç genleri taşımayan hücrelerin seçici olarak öldürülmesini sağladı; memeli hücrelerinde Blasticidin S'nin çalışma konsantrasyonları 1 ila 50 μg/mL arasında değişiyordu.
| Cell | Genüs | Oorganizasyon | Ckültür ortamı | Blasticidin S konsantrasyonu (μg/mL) |
| HeLa | İnsan | Uterus | DMEM | 3-10 |
| HEK293 | İnsan | Böbrek | DMEM | 3-10 |
| B16 | Fare | Melanom | RPMı | 3-10 |
| Bilgisayar1.0 | Hamster | Adenokarsinom | RPMı | 10-30 |
| ÇÖP | Hamster | Yumurtalık | DMEM | 5-15 |
- Bakteriyel seçilim: Bakteri kültüründe önerilen 25-100 µg/mL konsantrasyonu, direnç genleri olmayan hücrelerin hızla ölmesine neden olabilir.
E.coli, Blasticidin S'ye karşı biraz daha az duyarlıdır, ancak transformantlar Blasticidin S'ye karşı toleranslıdır ve 50-100 μg/mL Blasticidin S konsantrasyon aralığında düşük tuzlu LB besiyerinde (pH 8) taranabilir ve yüksek pH, Blasticidin S aktivitesini artırır.
- Bitki hücreleri: Bitki hücrelerinde gen transferi deneylerinde de kullanılabilen bsr ve BSD, tarama belirteçleri olarak yaygın olarak kullanılmaktadır.
2.2 Protein Sentezi Üzerine Araştırma
- Blasticidin Swas, özellikle TLR-2 yapılarının HEK293-T hücreleri ve HEK-D5 hücrelerinde, peptit bağı oluşumu düzeyinde protein sentez sürecini incelemek için kullanıldı.
2.3 Antifungal Özellik
- Ayrıca pirinç patlamasının önlenmesi ve tedavisi için kullanılabilen belirli bir antifungal aktiviteye sahiptir. Bakterisidal etkisi esas olarak protein sentezini etkilemektir ve spor çimlenmesini, hif gelişimini ve spor oluşumunu engelleyebilir.
2.4 Diğer Uygulamalar
- Blasticidin ayrıca tümör hücrelerinin inhibe edici etkisinin incelenmesinde de kullanılmıştır.
- Ayrıca bls, bsr veya BSD direnç genini içeren dönüştürülmüş hücreler için bir seçilim ajanı olarak da görev yapar.
Blasticidin S ile İlgili 3 Deneysel Prosedür (Memeli Kararlı Transfektanların Taranması)
1) Blasticidin S tipik olarak 10 μg/mL konsantrasyonunda kullanılır. Hücreler bsr veya BSD genini taşıyan plazmitlerle transfekte edilir ve stabil transfektanlar seçmek için Blasticidin S içeren normal büyüme ortamında inkübe edilir.
2) Transfeksiyondan 48 saat sonra hücreleri uygun konsantrasyonda Blasticidin S içeren taze ortama geçirin (Not: Antibiyotikler hücreler aktif bölünme fazındayken en iyi şekilde çalışır. Hücre yoğunluğu çok yüksekse antibiyotiklerin etkinliği azalır. Hücreleri bölerken birleşme %25'i geçmemelidir).
3) Her 3-4 günde bir kullanılmış besiyerini alıp yerine antibiyotik içeren yeni besiyeri ekleyin.
4) 7 gün sonra hücre kolonilerinin oluşumunu kontrol edin. Konak hücre tipine ve transfeksiyon/seçim verimliliğine bağlı olarak, koloni oluşumu ek bir hafta veya daha uzun sürebilir.
5) 5-10 dirençli klonu 35 mm hücre kültürü kaplarına aktarın ve 7 gün boyunca seçici ortamda tutun. Daha sonra test için sitotoksisite deneyleri gerçekleştirin.
4 Ürün önerisi
Yeasen Biyoteknoloji'nin Blastisidin S (60218ES) iki formda mevcuttur: toz (1 g) ve çözelti (10 mg/mL).
| Ürün adı | Kedi# | Şartname | Dış görünüş |
| Blastisidini S CAS：3513-03-9 | 60218ES10 | 10 mg | Çözüm (10 mg/mL, HEPES'te) Tampon，pH 7.5） |
| 60218ES50 | 5×10 mg | ||
| 60218ES60 | 10×10 mg | ||
| 60218ES80 | 1 G | Toz (Kullanırken steril su veya tampon ile 5-10 mg/mL'lik bir stok solüsyonu hazırlayın) |
5 Reaktiflerimizle yayınlanan makaleler
[1] Mo J, Tan K, Dong Y, Lu W, Liu F, Mei Y, Huang H, Zhao K, Lv Z, Ye Y, Tang Y. FACT kompleksinin inhibisyonu yoluyla Ewing sarkomunda onkojenik sürücü EWSR1::FLI1'i hedefleyen terapötik yöntem. Onkogen. 2023 Ocak;42(1):11-25. doi: 10.1038/s41388-022-02533-1. Epub 2022 Kasım 10. PMID: 36357572. (EĞER:8.0)
[2] Tan K, Mo J, Li M, Dong Y, Han Y, Sun X, Ma Y, Zhu K, Wu W, Lu L, Liu J, Zhao K, Zhang L, Tang Y, Lv Z. SMAD9-MYCN pozitif geri bildirim döngüsü, MYCN ile güçlendirilmiş nöroblastoma için benzersiz bir bağımlılığı temsil eder. J Exp Clin Cancer Res. 2022 Aralık 20;41(1):352. doi: 10.1186/s13046-022-02563-3. PMID: 36539767; PMCID: PMC9764568.(EĞER:11.3)
6 İlgili Ürünler
| Ürün adı | Kedi# | Şartname |
| Siprofloksasin hidroklorür | 60201ES05/25/60 | 5/25/100 gr |
| Ampisilin, Sodyum Tuzu | 60203ES10/60 | 10/100 gr |
| Doksisiklin hidroklorür | 60204ES03/08/25 | 1/5/25 gr |
| Kloramfenikol, USP Sınıfı | 60205ES08/25/60 | 5/25/100 gr |
| Kanamisin Sülfat | 60206ES10/60 | 10/100 gr |
| Tetrasiklin HCl Tetrasiklin hidroklorür (USP) | 60212ES25/60 | 25/100 gr |
| Vankomisin Hidroklorür | 60213ES60/80/90 | 100mg/1g/5g |
| Gentamisin Sülfat Tuzu | 60214ES03/08/25 | 1/5/25 gr |
| Spektinomisin Hidroklorür | 60215ES08 | 5 gr |
| Fleomisin (çözeltide 20 mg/mL) | 60217ES20/60 | 20/5×20mg |
| Blastisidin S (Blastisidin) | 60218ES10/60 | 10/10×10mg |
| Nistatin | 60219ES08 | 5 gr |
| G418 Sülfat (Geneticin) | 60220ES03/08 | 1/5 gr |
| Puromisin (Çözelti 10 mg/mL) | 60209ES10/50/60/76 | 1×1 /5 ×1 / 1 0 ×1 /50 ×1 mL |
| Puromisin Dihidroklorür | 60210ES25/60/72/76/80 | 25/100/250/500 mg / 1 gr |
| Higromisin B (50 mg/mL) | 60224ES03 | 1 gr (20 mL)/10×1 gr (20 mL) |
| Higromisin B | 60225ES03/10 | 1/10g |
| Eritromisin | 60228ES08/25 | 5/25 gr |
| Zamanlama | 60230ES07/32 | 3.2/10×3.2 gr |
| Aureobasidin A (AbA) | 60231ES03/08/10 | 1/5×1/10×1mg |
| Polimiksin B Sülfat | 60242ES03/10 | 1/10MU |