Hücre kültürü sürecinde sıklıkla hücre sindirimi gerekmektedir, dolayısıyla hücreleri sindirmek için kullanılan tripsin hücre kültürü için vazgeçilmez olacak ve aynı zamanda hücrelerin büyüme durumunu etkileyecek çok önemlidir.

Tripsin genel olarak iki tipe ayrılır; biri rekombinant tripsin, diğeri ise rekombinant olmayan tripsindir.

• Non-rekombinant tripsin, hayvansal kökenli, hayvansal ekstraksiyonla elde edilen ve aynı zamanda hayvan sindirim sisteminde yaygın olarak bulunan ve doğrudan sığır veya domuzların pankreas dokusundan elde edilen tripsinin geleneksel kullanımıdır.
• Rekombinant tripsin, genetik rekombinant teknoloji kullanılarak üretilir ve hayvansal kökenli değildir.

Ürün tanıtımı ve uygulaması

Rekombinant olmayan tripsin (hayvansal kaynaklı)

Ürün özellikleri：

Non-rekombinant tripsin (tripsin olarak da bilinir), sığır, koyun ve domuz pankreasından elde edilen, pozitif yüklü lizin ve argininin karboksil terminalini spesifik olarak parçalayabilen, çoklu kristalizasyonla saflaştırılan ve daha sonra kromatografi ve ultrafiltrasyon teknolojisi ile hazırlanan, hayvansal kökenli bir serin proteolitik enzimdir.

Pankreas enzimleri, kaderin, integrin vb. gibi transmembran proteinler ve hücre dışı matristeki proteinler üzerinde etki gösterebildiğinden, artık dokuları ve tek katmanlı hücreleri ayırmak için yaygın olarak kullanılmaktadır. Tripsin, hücreler arasındaki proteolizi ayrı hücrelere hidrolize edebilmesine rağmen, farklı dokuların veya hücrelerin tripsine tepkisi farklıdır ve dağılmış hücrelerin aktivitesi de tripsin konsantrasyonu, reaksiyon sıcaklığı ve süresiyle ilişkilidir ve tripsinin hücreleri dağıtma yeteneği pH 7-9 ve sıcaklık 37 °C koşulları altında en güçlüdür. EDTA'nın tripsin çözeltisine bir şelatlama maddesi olarak eklenmesi, kalsiyum ve magnezyumu altı dişli bir yapıya bağlar, bu da hücre-hücre yapışmasını zayıflatabilir ve tripsinin hidrolize hedeflenmiş peptit bağlarını edinmesini artırabilir.

Tripsinin biyofarmasötik alanındaki ilk zamanlardaki ana uygulaması insülin üretimiydi ve kısa süre sonra diğer hücre kültürü alanlarında da kullanılmaya başlandı. Hayvan pankreas enzimleri genellikle serum kültüründe kullanılır ve farklı hücrelere eklenen tripsinin bileşimi ve konsantrasyonu farklıdır.

Uygulamalar

1. insülin ve inaktif aşı üretimi;
2. Doku hücrelerinin izolasyonu ve kültürü;
3. Klinik ve cerrahi kullanım;
4. Gıda sanayinde işleme yardımcıları;

Rekombinant tripsin (hayvansal kaynaklı olmayan)

Ürün özellikleri

Rekombinant tripsin, iyi stabilite, yüksek saflık ve hayvansal kökenli olmaması gibi avantajlara sahip genetik mühendisliği teknolojisi kullanılarak üretilen bir enzimdir. Modern biyofarmasötiklerin üretim sürecinde, hayvansal kökenli ham maddelerin kullanımı, deli dana hastalığının BSE'si, ağız ve ayak hastalığı virüsü vb. gibi zoonotik hastalıklara neden olan potansiyel virüs kaynaklarını ürüne getirebilir. Kirlilik kaynağını azaltmak için tripsin, geleneksel domuz veya sığır tripsininin getirebileceği virüs kontaminasyonu riskini çözen genetik mühendisliği teknolojisi ile sentezlenir.

Rekombinant tripsin çoğunlukla rekombinant E. coli veya maya sistemi tarafından ifade edilen ve kimotripsin gibi heterozim kontaminasyonu olmadan çok adımlı kromatografi ile saflaştırılan bir rekombinanttır. Rekombinant tripsin, polipeptit zincirindeki lizin ve arginin kalıntılarındaki karboksil gruplarını özel olarak kesen, domuz tripsin dizisine homolog bir amino asit dizisi ile doğal olarak ekstrakte edilen tripsin ile aynı özelliklere sahiptir.Hayvansal kaynaklı kirliliği olmaması ve yüksek saflıkta olması nedeniyle ilaç geliştirme, biyokimyasal araştırma, proteomik ve diğer alanlarda geniş uygulama alanına sahiptir.

Piyasadaki ana akım rekombinant tripsin, DNA rekombinant teknolojisi kullanılarak Escherichia coli veya mayada ifade edilen rekombinant bir domuz tripsinidir ve amino asit dizisi, doğal tripsinle aynı aktivite ve özgüllüğe sahip olan domuz tripsiniyle tamamen tutarlıdır. 223 amino asitten oluşur ve 6 çift disülfür bağı içerir. Enzim, iki aktif tripsin formu içerir: α-tripsin ve β-tripsin. Aktivitesi, PMSF ve TLCK gibi serin proteaz inhibitörleri, EDTA gibi metal iyon şelatörleri vb. tarafından inhibe edilir. Rekombinant tripsin, serumsuz kültürde kullanılır ve tripsin gibi, farklı hücrelere farklı bileşenler ve tripsin konsantrasyonları eklenir.

Uygulamalar

1. aşı ve rekombinant insülin üretimi;
2. Hücre analizi için doku örneklerinin hazırlanması;
3. Bağışıklık hücre tedavisi;
4. Biyofarmasötik üretimi;
5. Protein dizisi, yapısı ve omik araştırması

Ürünlerin detaylı karşılaştırması

ürünler	Rekombinant olmayan tripsin (hayvansal kaynaklı)	Rekombinant tripsin (hayvansal kaynaklı olmayan)
Öğe	40123ES（fenol kırmızısı(-),EDTA(+)） 40124ES（fenol kırmızısı(-),EDTA(-)） 40126ES（fenol kırmızısı(+),EDTA(-)） 40127ES（fenol kırmızısı(+),EDTA(+)）	40512ES 20416ES（MS-GÜVENLİ）
Kaynak	Sığır, domuz ve koyun pankreasından elde edilir	kolibasil（40512ES） Pichia pastoris（20416ES）
Güvenlik	Potansiyel patojenlerle kontaminasyon	Ekzojen viral kontaminasyon yok
Saflık	1:250 tripsin çözeltisinin %90'ından fazlası safsızlıktır	Yüksek saflıkta (β-tripsin≥ %70, α-tripsin≤%20）
Sindirim hücre tipi	En bitişik, güçlü şekilde yapışan hücre hatları	En bitişik, güçlü şekilde yapışan hücre hatları
Kimotripsin sınırı	2500 ünite tripsine karşılık en fazla 50 ünite kimotripsin.	Mirosinaz ve diğer saf olmayan enzim kontaminasyonu yok
Belirli aktivite	≥2500 USP birimleri/mg protein	≥3800 USP birimleri/mg protein
Sindirim etkisi	istikrarsızlık	Güçlü sindirim ve düşük enzim miktarı
Kendi kendini kesme oranı	Kendi kendini kesmek ve kendi kendini kesen parçalar üretmek kolaydır, bu da kütle spektrometrisi analizinin sonuçlarını etkiler	Kendi kendini kesmek ve kendi kendini kesen parçalar üretmek kolaydır, bu da kütle spektrometrisi analizinin sonuçlarını etkiler
Erimiş sıvı	Ca2+, Mg2+ içeren veya içermeyen HBSS çözeltisi	Ca2+ ve Mg2+ içeren veya içermeyen HBSS çözeltisi (40512ES); 1 mM HCL（20416ES）
Hücrenin hayatta kalması	Normal	Normal
Donma-çözülme işleminin gerekli olup olmadığı	Evet	Evet

Hücre sindiriminde en yaygın kullanılan tripsinin yanı sıra, aşağıdakiler gibi birçok başka sindirim enzimi ürünü de kullanılabilir.

Kolajenazın uygulama alanı hakkında

Kolajenaz, Pro-X-Gly-Pro dizisini spesifik olarak tanıyabilen ve dizideki nötr amino asit (X) ile glisin (Gly) arasındaki peptit bağını kesebilen bir peptidaz endonükleazdır, kolajenaz, üç zincirli süper sarmal yapı ile doğal kolajen fibrillerini parçalayabilen ve bağ dokusu ve epitel dokusunun ekstraselüler matrisindeki diğer proteinleri, polisakkaritleri ve lipitleri etkili bir şekilde hidrolize edebilen tek proteazdır, bu da bu ürünü doku sindirimi için çok uygun hale getirir.

1. Kolajenaz I., genellikle epitel hücreleri, karaciğer, akciğer, yağ ve böbrek üstü doku hücrelerinin preparatı olarak kullanılır;
2. Kalp, kemik, kas, karaciğer, tiroit ve kıkırdak gibi doku kökenli hücrelerin hazırlanmasında kullanılan kolajenaz II;
3. Meme hücrelerinin hazırlanmasında yaygın olarak kullanılan Kolajenaz III;
4. Pankreas adacık hücrelerinin hazırlanmasında veya reseptör bütünlüğünün korunması gereken hücre hazırlama deneylerinde yaygın olarak kullanılan kolajenaz IV.
5. Kollajenaz V., pankreas adacık hücreleri ve bağ dokusu hücrelerinin izolasyonunda uygundur.

Bileşik tripsinin uygulama alanı hakkında

Accutase, proteolitik ve kolajenaz aktivitesi içeren bir hücre sindirimidir ve geleneksel doku kültürü kaplarından ve yapışık kültür kaplarından hücreleri sindirmek için tripsin-EDTA sindirimlerinin mükemmel bir ikamesidir. Accutase, izole edilen hücreler sağlam yüzey antijenlerini koruduğu ve herhangi bir hayvan veya bakteri kaynaklı bileşen içermediği için doku ayrışması ve hücre izolasyonu için uygundur ve bu da hücre yüzeyi etiketleme, viral büyüme analizi, akış sitometrisi ve biyoreaktörle ilgili analizler gibi sonraki deneylerin gereksinimlerini karşılayabilir.

Pankreas enzimi ikamelerinin uygulama alanları

PerfCell Tryzyme™ Express enzim ürünleri son derece saftır, hücre hasarı azdır, sindirimi kolaydır ve oda sıcaklığında stabil bir şekilde saklanabilir, bu da onları farklı hücre hattı kültürleri için ideal bir sindirim enzimi yapar. Bu tür ürünler inaktivasyon için tripsin inhibitörlerinin kullanımını gerektirmez ve hayvansal kökenli değildir, bu da bazı serumsuz büyüme yapışkan hücre deneyleri için daha uygundur.

Dispase'nin uygulama alanı hakkında

Dispase II dispase II, spesifik olmayan bir metalloproteinazdır ve hücre biyolojisinde farklı dokulardan veya organlardan tek hücreleri izole etmek için yaygın olarak kullanılır ve birincil hücrelerin izolasyonu, hücre pasajı vb. gibi sonraki hücre kültürlerinde kullanılır ve ayrıca süspansiyon hücre kültürü sırasında oluşan hücre agregasyonunu ortadan kaldırmak için de kullanılabilir. Hücre biyolojisinde yaygın olarak kullanılan diğer proteazlarla (örneğin tripsin, kolajenaz, pronaz vb.) karşılaştırıldığında, bu enzimin aşağıdaki avantajları vardır:

1. Hücrelere en az zararı veren, hücre zarlarının bütünlüğünü koruyabilen, hızlı, etkili ve nazik hücre sindirim enzimleri;
2. Bakterilerden türetilmiştir, mikoplazma veya diğer hayvansal virüs kontaminasyonu yoktur;
3. Güçlü stabilite, sıcaklık, pH ve serum bileşenlerinden etkilenmez;
4. Çeşitli tipteki doku ve hücrelerin izolasyonunda kullanılabilir.

İlgili ürün önerileri

Katalog numarası	Ürün adı	Boyut
40123ES60	PerfCel™l Tripsin-EDTA (%0,25), Fenol kırmızısı	100 ml
40124ES60	PerfCell™ Tripsin-EDTA yok (%0,25), fenol kırmızısı yok	100 ml
40126ES60	PerfCell™ Tripsin (%0,25), fenol kırmızısı	100 ml
40127ES60	PerfCell™ Tripsin-EDTA (%0,25), Fenol kırmızısı	100 ml
40101ES25	Tripsin 1:250(toz)	25 gr
40512ES10/60	PerfCell™ Rekombinant Tripsin (toz)	10 mg/100 mg
20416ES60	Rekombinant Tripsin (MS-SAFE)	100 µg
40134ES60	PerfCell Tryzyme™Ekspres	100 ml
40135ES60	PerfCell Tryzyme™Ekspres	100 ml
40506ES60	DOĞRULAMA	100 ml
40104ES60/80	Dağılma II	100 mg/1 gr