Arka Plan – ROS Nedir?
Reaktif oksijen türleri (ROS), hücre metabolizmasının normal bir ürünüdür - peroksit, süperoksit, hidroksil radikali, singlet oksijen ve α-oksijen vb. dahil olmak üzere oksijen içeren biyoaktif bir moleküldür ve apoptozis, otofaji, yaşlanma, kanser vb. gibi hücre sinyal yollarında ve transkripsiyonda önemli düzenleyici bir rol oynar.
ROS konsantrasyonunun hücreler üzerindeki etkisi – ROS neden tespit edilir?
Düşük reaktif oksijen türleri seviyelerinde, ROS "redoks habercileri" olarak hücre içi sinyalleme ve düzenlemede rol oynar. Ancak, çevresel stresler altında (örneğin, iyonlaştırıcı radyasyon, ısıya maruz kalma, ultraviyole ışınları, hipoksi, vb.), ROS seviyeleri önemli ölçüde artar, bu da DNA hasarına neden olabilir, gen ifadesini inhibe edebilir, protein yanlış katlanmasına yol açabilir ve hatta protein sentezini etkileyerek hücresel yapılara oksidatif stres olarak bilinen ciddi hasara neden olabilir.
ROS düzeyleri endojen antioksidan savunma kapasitesini aştığında, redoks dengesi bozulur ve DNA, lipitler, proteinlerde yapısal veya konformasyonel değişikliklere ve en sonunda hücre ölümüne yol açar.
ROS seviyesi, normal fizyolojik işlevler ve çevresel faktörler tarafından meydana getirilen hücre hasarının önemli bir sinyalidir ve hücre içi ROS seviyesinin tespiti, bazı ilaçların sinyal yollarını ve potansiyel etki mekanizmalarını anlamak için büyük önem taşır. Bu nedenle, ROS tespiti için uygun probların seçimi, hastalık mekanizması araştırmalarında ve ilaç taramasında önemli bir rol oynar.
ROS tespiti nasıl çalışır?
The Reaktif Oksijen Türleri Analiz Kiti (CAT# 50101ES01), floresan boya DCFH-DA'nın (2,7-Diklorodi-hidrofloresin diasetat) floresan yoğunluğundaki değişikliklere dayalı olarak hücre içi reaktif oksijen türlerinin düzeylerini ölçmek için en yaygın kullanılan yöntemdir.
DCFH-DA'nın kendisi floresansa sahip değildir ve hücre zarından serbestçe geçebilir ve hücreye girdikten sonra hücre içi esterazlar tarafından hidrolize edilerek DCFH üretebilir. Ancak DCFH hücre zarına nüfuz edemez, bu da probun etiketlenmesini ve hücre içinde toplanmasını kolaylaştırır. Hücre içi reaktif oksijen türleri, floresan olmayan DCFH'yi oksitleyerek floresan DCF oluşturabilir. DCF yeşil floresansının yoğunluğu, hücre içi reaktif oksijen türlerinin seviyesiyle doğru orantılıdır ve hücre içi reaktif oksijen türlerinin seviyesi DCF'nin floresansını tespit ederek bilinebilir.
488 nm uyarma dalga boyu ve 525 nm emisyon dalga boyu koşulları altında, hücre içi reaktif oksijen türlerinin seviyesini belirlemek amacıyla, floresan mikroskobu, lazer konfokal mikroskop, floresan spektrofotometresi, floresan mikroplaka okuyucu, akış sitometresi vb. ile DCF floresansı tespit edildi.
Bu ürünü kullanan müşteriler tarafından yayınlanan literatür (bazı örnekler)
Eylül 2022 itibariyle ROS reaktif oksijen türleri tespit kiti (50101ES01) kapsamında toplam 164 makale yayınlanmış olup, toplam etki faktörü 913,72'dir.
ROS üretiminin makrofaj polarizasyonu ve tümör hücresi öldürülmesi üzerindeki etkisi (PMID: 35665496; PMID: 35301299; PMCID: PMC8931093PMCID: PMC9353410.
SSS
S1: ROS testi için hangi numuneler uygundur?
A1: Genellikle memeli hücrelerinin tespiti için kullanılır ve sadece canlı hücrelerde veya in vivo olarak reaktif oksijen türlerinin tespiti için uygundur.
S2: ROS test kiti serumda mı yoksa plazmada mı tespit edilmeye uygundur?
A2: Serum veya doku homojenatında ROS tespiti için uygun değildir. Taze dokudan hazırlanan tek hücre süspansiyonları denenebilir.
S3: Bitkiler veya bakteriler tespit edilebilir mi?
A3: Sadece canlı hücrelerde veya in vivo reaktif oksijen türlerinin tespiti için uygundur, çünkü oksijenin hidroksil radikallerinin ve süperoksit radikallerinin yarı ömrü çok kısadır ve sadece canlı hücrelerin tespiti için uygundur. Protoplastların hazırlanmasından sonra tespit için kullanılabilen bitkiler veya bakteriler, bu kit in vivo ROS'u tespit edemez.
S4: Aşırı floresan arka planından nasıl kaçınabilirim?
C4: Prob inkübasyonundan sonra hücreye girmemiş kalan probları yıkadığınızdan emin olun.
S5: Normal hücrelerdeki ROS miktarını tespit edebilir miyim?
C5: Normal hücrelerde reaktif oksijen türlerinin içeriği çok düşüktür ve tespit etkisi çok iyi olmayabilir.
S6: Negatif ve pozitif floresan değerleri aynı, ne oluyor?
C6: Eklenen prob konsantrasyonunun çok fazla olmasından kaynaklanabilir, prob konsantrasyonunun 5-7,5 μM azaltılması ve inkübasyon süresinin 15-20 dk. olması önerilir.
S7: Pozitif kontrolün floresansı zayıf, ne oluyor?
A7: Pozitif kontrol Rosup genellikle 100 μM'de yoğunlaştırıldı ve uyarıdan 30 dakika-4 saat sonra reaktif oksijen türlerinde önemli bir artış gözlendi. Reaktif oksijen türleri pozitif kontrolünün etkisi farklı hücreler arasında büyük ölçüde değişebilir. ROS'taki artış uyarıdan sonraki 30 dakika içinde gözlenmez ise, indüksiyon süresi uzatılabilir veya Rosup konsantrasyonu uygun şekilde artırılabilir.
C8: Aynı prob bölünmemiş, ilk 5 kez etkisi çok iyi, bu sefer boyanmamış, sorun nedir?
S8: 1. Hücre durumu iyi değil, bu da düşük boyama etkinliğine neden oluyor; 2. Pozitif ilacın indüksiyon süresi çok kısa ve reaktif oksijen türlerinin seviyesi, karanlıkta 37°C'de 30 dk-4 saat inkübe edilerek önemli ölçüde artırılabilir; 3. Prob 4 kereden fazla dondurulup çözülmüş, boyama etkinliği azalmış ve floresan sinyali kararsız (bazen güçlü, bazen zayıf ve söndürülmesi kolay). Tekrarlanan dondurma-çözme döngülerinden kaçınmak için probların alikotlanması ve ışıktan korunan -20°C'lik bir dondurucuda saklanması önerilir.
S9: Test için hangi araçlar kullanılabilir?
C9: Floresan mikroskobu, lazer konfokal mikroskop, floresan spektrofotometre, floresan mikroplaka okuyucu, akış sitometresi vb. floresan değerlerini tespit edebilir.
Bu ürünü kullanan müşteriler tarafından yayınlanan bilimsel araştırma yayınları (kısmi)
[1] Zhong D, Jin K, Wang R, Chen B, Zhang J, Ren C, Chen X, Lu J, Zhou M. Enflamatuar Bağırsak Hastalığı ve İlişkili Anksiyete ve Depresyon İçin Mikroalg Bazlı Hidrojel. Adv Mater. 2024 Ocak 26: e2312275. doi: 10.1002/adma.202312275. Baskıdan önce epub. PMID: 38277492. EĞER: 29.4
[2] Zhang M, ve diğerleri. Sinerjik Tümör Eradikasyonu için Işıkla Aktifleştirilebilir Susturucu NK Türevi Ekzosom (LASNEO) ile Bağışıklık Hücrelerinin Toplanması. Adv Sci (Weinh). 2022 Ağustos;9(22): e2201135. doi: 10.1002/advs.202201135. Epub 2022 Haziran 4. EĞER: 16.806
[3] Zhang D, ve diğerleri. Kanser hastalarında bağırsak mikrobiyotası homeostazisi ve bağırsak koruması için mikroalg bazlı oral mikro taşıyıcılar radyoterapi. Nat Commun. 2022 Mar 17;13(1):1413. doi: 10.1038/s41467-022-28744-4. PMID: 35301299. EĞER: 14.919
[4] Jiao D ve diğerleri.Biyouyumlu indirgenmiş grafen oksit uyarılı BMSC'ler osteoklastogenez ve anjiyogenezi teşvik ederek kemik yeniden şekillenmesinin ve ortodontik diş hareketinin hızlanmasını sağlar. Bioact Mater. 2022 Şubat 6; 15:409-425. doi: 10.1016/j.bioactmat.2022.01.021. PMID: 35386350; PMCID: PMC8958387. EĞER: 14.593
[5] Guo G, ve diğerleri. İmplant İlişkili Enfeksiyonlar İçin CuFe5O8 Nanoküplerinin Uzay Seçici Kemodinamik Terapisi. ACS Nano. 2020 27 Ekim;14(10):13391-13405. doi: 10.1021/acsnano.0c05255. Epub 2020 22 Eylül. PMID: 32931252. EĞER: 14.588
[6] Yang C, ve diğerleri. Kırmızı Fosfor Dekorlu TiO2 Nanorod Aracılı Fotodinamik ve Fototermal Terapi Böbrek Hücreli Karsinom İçin. Küçük. 2021 Tem;17(30): e2101837. doi: 10.1002/smll.202101837. Epub 2021 Haz 19. PMID: 34145768. EĞER：13.281
[7] Xiaolu Chen ve diğerleri. Metal-fenolik ağlar kapsüllenmiş kaskad amplifikasyon iletim nanopartikülleri, kombine açlık/kemodinamik/kemoterapi yoluyla kanser ilacı direncini aşıyor. Kimya Mühendisliği Dergisi. 2022 Ağustos; 442:136221. EĞER: 13.273
[8] Hao Ding ve diğerleri. Miyokard enfarktüsü tedavisi için reaktif oksijen türlerini temizleyen ve O2 üreten enjekte edilebilir bir hidrojel içinde kapsüllenmiş mezenkimal kök hücreler. Kimya Mühendisliği Dergisi. 2022.133511:1385-8947. EĞER: 13.273
[9] Yu H, ve diğerleri. Hipoksik tümöre karşı etkili katalitik tedavi için lazerle aktive edilebilen O2 kaynağı ve fototermal iyileştirmeye sahip üçlü kademeli nanokatalizör. Biyomalzemeler. 2022 Ocak; 280:121308. PMID: 34896860. EĞER: 12.479
[10] Sun D, ve diğerleri. Siklodekstrin bazlı bir nanoformülasyon, kolorektal kanser için kemo-immünoterapide ginsenoside Rg3 ve kuersetin'in birlikte iletilmesini sağlar. Acta Pharm Sin B. 2022 Ocak;12(1):378-393. PMID: 35127393. EĞER: 11.614
[11] Xiong Y ve diğerleri. Kendiliğinden çoğalan kooperatif kanser tedavisi için hidroksietil nişasta ön ilacı ile stabilize edilen tümöre özgü aktive edilebilir biyopolimer nanopartiküller. Theranostics. 2022 Ocak 1;12(2):944-962. PMID: 34976222. EĞER: 11.556
[12] Gao J, ve diğerleri. Tümör seçici ve sinerjik kemo-radyoterapi için ikili enerji metabolizmasını aynı anda inhibe eden mitokondri hedefli supramoleküler "nano-tekne". Theranostics. 2022 Ocak 1;12(3):1286-1302. PMID: 35154487. EĞER: 11.556
[13] Zhong D, ve diğerleri. Kalsiyum fosfat, hipoksiyi yerinde düzenleyerek ve kademeli radyo-fototerapi uygulayarak hipoksik tümörle savaşmak için fotosentetik mikroalgleri tasarladı. Theranostics. 2021 Ocak 22;11(8):3580-3594. PMID: 33664849. EĞER: 11.556
[14] Sun J, ve diğerleri. Stabilize edilmiş/katılaştırılmış belediye katı atık yakma uçucu külünün sitotoksisitesi. J Hazard Mater. 2022 Şubat 15;424(Pt A):127369. doi: 10.1016/j.jhazmat.2021.127369. Epub 2021 Eylül 29. PMID: 34879564. EĞER: 10.588
[15] Zhu C ve diğerleri. Osteoartrit'teki mikroçevreyi polarize eden ve RONS'ları temizleyen çok işlevli termo-duyarlı hidrojel. J Nanobiotechnology. 2022 Mayıs 7;20(1):221. EĞER: 10.435
[16] Pan X ve diğerleri. Kolorektal kanserin hidrojen sülfür giderimi ve ferroptozisi için çinko oksit nanoküresi. J Nanobiotechnology. 2021 Kasım 27;19(1):392. doi: 10.1186/s12951-021-01069-y. PMID: 34838036; PMCID: PMC8626909. EĞER: 10.435
[17] He J, ve diğerleri. Altın-gümüş nano kabuklar, ilaca dirençli bakteri enfeksiyonundan kaynaklanan yara iyileşmesini destekler ve yüzey destekli Raman saçılması görüntüleme yoluyla izlemeyi mümkün kılar. Biyomalzemeler. 2020 Mar; 234:119763. PMID: 31978871. EĞER: 10.317
[18] Cheng Q ve diğerleri. Nanoterapötikler, son derece iyileştirilmiş fotodinamik terapi için hücresel redoks homeostazına müdahale eder. Biyomalzemeler. 2019 Aralık; 224:119500. doi: 10.1016/j.biomaterials.2019.119500. Epub 2019 Eyl 17. PMID: 31557591. EĞER: 10.273
[19] Zhong D ve diğerleri. Lazer tetiklemeli toplanmış kübik α-Fe2O3@Au nanomanyetik rezonans görüntüleme ve fototermal/geliştirilmiş radyasyon sinerjistik tedavisi için kompozitler. Biyomalzemeler. 2019 Ekim; 219:119369. PMID: 31351244. EĞER: 10.273
[20] Sun C, ve diğerleri. Selenoksit eliminasyonu, antitümör etkinliğini artırmak için oksidatif stresi manipüle eder. Biyomalzemeler. 2019 Aralık; 225:119514. doi: 10.1016/j.biomaterials.2019.119514. Epub 2019 Eylül 24. PMID: 31569018. EĞER: 10.273
Önerilen ürünler
| Ürün adı | Katalog numarası | Boyut |
| 50101ES01 | 1 Kit (1000 test) |