- Yüksek verimli ters PCR ile desteklenen RT-qPCR transkriptaz
Ters Transkriptaz (RT enzimi), RNA şablonlarını tamamlayıcı DNA'ya (cDNA) dönüştürebilen bir enzimdir. Moleküler biyoloji araştırmalarında, ters transkriptaz yaygın olarak kullanılır ve özellikle moleküler tanı alanında vazgeçilmez bir rol oynar. Ters transkripsiyon süreciyle, virüslerin RNA genomu cDNA'ya dönüştürülebilir ve daha sonra qPCR gibi teknikler kullanılarak çoğaltılabilir ve tespit edilebilir. Bu özellik, HIV, influenza A ve influenza B gibi RNA virüslerinin doğru teşhisini sağlar.
Şekil 1. Ters transkripsiyon sürecinin şematik diyagramı
Daha hızlı, daha hassas ve kullanımı daha kolay olan RT-qPCR moleküler tanı reaktiflerinin peşinde koşmak, şu anda geliştirmenin ana eğilimi haline geldi. RT-qPCR sürecindeki temel ham maddelerden biri olarak, ters transkriptazın daha hızlı ters transkripsiyon hızına, daha yüksek sentez verimine ve daha iyi ısı direncine sahip olması gerekir. RT-qPCR için daha uygun bir ters transkriptaz elde etmek için Yeasen Hifair'i geliştirdiT.M. M-MLV'ye dayalı genetik modifikasyon yoluyla üretilen, daha düşük RNase H aktivitesine, daha yüksek termal stabiliteye ve daha güçlü sürekli sentez yeteneğine sahip bir dizi ters transkriptaz.
Şekil 2. Ters transkripsiyon eyleminin şeması
Hifair™Ters Transkriptazlar
Yeasen'in çeşitli Hifair'leri varT.M. ters transkriptaz ve enzim ve premiks dahil olmak üzere çeşitli ürün formları sağlayabilir, gerçek ihtiyaçlarınıza göre seçebilirsiniz. Aşağıdaki tabloda farklı Yeasen ters transkriptazlarının özellikleri ve önerilen uygulamaları listelenmiştir.
Tablo 1 Seçim yönergeleri Hifair'in™ Ters Transkriptazlar| Ürün Adı (Ürün Numarası) ) | Ürün özellikleri | Önerilen uygulama |
| Termal olarak kararlı (65°C'ye kadar), karmaşık şablonlar için uygundur | RT-LAMBA | |
| Güçlü uyumluluk, hızlı hız ve yüksek sentez verimi | Tek adımlı RT-PCR/qPCR |
Not: Yukarıda adı geçen enzimlerin tamamı yüksek konsantrasyonlu veya gliserolsüz formülasyonlarda mevcuttur.
Şimdi RT-qPCR moleküler tanı reaktiflerinde kullanılan bir ters transkriptazı vurguluyoruz: HifairT.M. V Ters Transkriptaz. Bu enzim, güçlü uyumluluğu, hızlı hızı ve yüksek sentez verimi ile ayırt edilir ve 58°C'ye kadar reaksiyon sıcaklıklarına dayanabilir. Özellikle RT-qPCR moleküler tanı reaktiflerinin geliştirilmesi için uygundur.
Hifair'in performans gösterimi™ V ters transkriptaz
1. 58°C'lik reaksiyon sıcaklığına dayanabilme özelliği sayesinde karmaşık RNA şablonlarının ters transkripsiyonu için uygundur.
Şekil 3. Hifair'in Ters TranskriptazıT.M. V Ters Transkriptaz ve marka T*, kalıntı enzim aktivitesini tespit etmek için sırasıyla 55℃ ve 58℃'de 30 dakika inkübe edildi. Sonuçlar Hifair'inT.M. V Ters Transkriptaz, 58℃'de 30 dakika inkübasyondan sonra hala %70 aktivitesini koruyabiliyordu; bu, marka T*'den çok daha yüksekti.
2.RT-qPCR'nin tespit oranı diğer markalara göre daha iyiydi,ve tTespit aralığı 1 pg-1 μg idi.
Şekil 4. Şablon olarak 293T hücrelerinin 1 pg-1 μg (7 gradyan) toplam RNA'sını kullanarak, ters transkripsiyon Hifair kullanılarak gerçekleştirildiT.M. V one-step RT-gDNA sindirimi qPCR için SuperMix (Kat#11142), V*, T*. Elde edilen cDNA kantitatif olarak qPCR ile analiz edildi. Sonuçlar 11142ES'nin duyarlılığının diğer markalardan daha iyi olan 1 pg'ye ulaşabileceğini gösterdi.
Ters transkriptaz mutantı Yeasen Kütüphanesi
Yeasen ters transkriptazın evrimini desteklemeye devam ediyor ile onun ZymeEditörüT.M. platform. Şimdiye kadar, farklı uygulamalarda mükemmel performans gösteren ve çeşitli uygulama alanlarında farklı müşteri gruplarının ihtiyaçlarını tam olarak karşılayabilen çeşitli ters transkriptaz mutantlarını eledik.Tablo 2. The ters transkriptaz Mutant Seçim Kılavuzu Yeasen'in
Önerilen Ürünler
| Ürün Sınıflandırması | Ürün Adı | Katalog No. |
| Yüksek performanslı PCR enzim serisi | 10726ES | |
| 11300ES | ||
| 14455ES | ||
| 10603ES | ||
| 10125ES |