1. RNA'nın parçalanması nasıl önlenir?

2. RNase inhibitörleri nelerdir?

3. RNase İnhibitörü ne işe yarar?

4. Murin RNase İnhibitörünün özellikleri nelerdir?

5. İlgili ürünler ve performans

6. İlgili ürünler

7. Sıkça Sorulan Sorular

1. RNA'nın parçalanması nasıl önlenir?

RNase, nükleik asit metabolizmasında önemli bir rol oynar ve hemen hemen her tür prokaryot ve ökaryotta bulunabilir. RNase, mikroorganizmaların istilasına karşı savunmak için gözyaşı, tükürük ve ter gibi vücut sıvılarında salgılanır ve RNase ayrıca cilt döküntülerinde de bulunur. Ancak, çoğu ortamda RNase'nin ana kaynağı mikroorganizmalardır, yani bakteriler ve mantarlardır. RNase'in etkisizleştirilmesi son derece zordur ve yüksek stabilite, ısı direnci, asit direnci ve alkali direnci gösterir. Termal denatürasyondan sonra, orijinal yapısını hızla geri kazanabilir. RNase genellikle çok aktiftir ve hem ökaryotik hem de prokaryotik hücrelerde ve dokularda yaygın olarak dağılmıştır. Örnekteki RNA, sadece eser miktarda RNase kontaminasyonuyla tamamen bozulabilir. Çalışmalardaki RNase kontaminasyonu hem iç hem de dış kaynaklardan gelebilir. Hücrelerdeki RNase, öncelikle endojen bir kontaminasyon kaynağıdır, ekzojen kaynaklar ise deneysel malzemeleri, laboratuvar ortamını ve deneycilerin kendilerini içerir. RNase'ler, özellikle RNase A ailesinin üyeleri, birçok molekül içi disülfür bağı oluşturabilen birkaç sistein kalıntısı içeren küçük, kompakt proteinlerdir. Oda sıcaklığına döndükten sonra, bir denatüre edici ajanın yokluğunda, denatüre edilmiş RNase doğal yapısını ve bazı işlevlerini geri kazanacaktır. Bu nedenle, RNase'ler otoklavlamadan sonra bile tekrarlanan dondurma-çözme döngülerinden sonra önemli ölçüde aktivitelerini korurlar. Bu enzimlerin kararlı yapısı, onları genellikle yüzeylerden ve çözeltilerden RNase'leri ortadan kaldırmak için agresif kimyasal yöntemler gerektiren birçok dekontaminasyon yöntemine dirençli hale getirir.

Hassas RNA'nın bozunmasını önlemek için, RNA ile çalışırken özel önlemler alınmalıdır. Ekzojen RNaz'ı kontrol etmek için, operatörün deney sırasında eldiven giymesi ve cilde, kapı kollarına ve sıradan nesnelerin yüzeyine dokunduktan sonra eldivenlerini değiştirmesi gerekir. Ve operatörün RNA çalışması için özel bir pipet tabancası kullanması ve RNaz içermeyen duvar uçları, santrifüj tüpleri, bileşikler ve reaktifler kullanması gerekir. Havalandırma deliklerinden uzak durun veya bunları kapatın ve pencereleri açın ve daha az kullanılan alanları RNaz içermeyen alanlar olarak kullanın. Ve RNA ekstraksiyonu ve analizi sırasında, RNaz kontaminasyonuna neden olabilecek başka deneyler yapmayın.
Endojen RNase aktivitesini engelleme yöntemi öncelikle numuneyi korumaktır. Doku örneklendikten sonra RNA doğrudan çıkarılmamalıdır. Bunun yerine, hızla dondurulmalı ve zamanında sıvı nitrojenle -80°C'lik bir ortamda saklanmalı ve RNA'nın bozunmasını en aza indirmek için deney mümkün olan en kısa sürede gerçekleştirilmelidir.Hücre lizatına RNaz inhibitörleri eklenerek, hücreleri aynı anda parçalamak ve RNaz'ı inaktif hale getirmek suretiyle hücre kırılması sırasında açığa çıkan RNaz'ın aktivitesi en aza indirilir. Tüm reaktifler ve ekipmanlar, kullanımdan önce RNazları inaktive etmek için özel olarak işlenmelidir.

Ayrıca RNA inhibitörleri, RNaz aktivitesini inhibe etmek ve RNA'nın RNaz tarafından parçalanmasını önlemek için kullanılabilir. Birkaç tip RNA inhibitörü vardır:

• Dietil pirokarbonat (DEPC): Güçlü ancak tam bir RNase inhibitörü değildir. RNase'nin aktif gen grubundaki histidinin imidazol halkasının birleşimi yoluyla proteini denatüre eder ve böylece enzimin aktivitesini inhibe eder.
• Guanidin izotiyosiyanat: Günümüzde en etkili RNaz inhibitörü olarak kabul edilen bu madde, dokuyu parçalayarak RNaz'ı inaktive edebilir, bu da hücre yapısını tahrip edebilir ve nükleik asidi nükleoproteinden ayırabilir ve ayrıca RNaz üzerinde belirli bir etkiye sahiptir. Güçlü denatüre edici etki.
• Vanadyl ribonükleozid kompleksi: Vanadyum oksit iyonları ve nükleozidlerden oluşan, RNase ile birleşerek geçiş analoğu oluşturabilen ve RNase'nin aktivitesini neredeyse tamamen inhibe eden bir kompleks.
• RNazın protein inhibitörü (RNasin): Sıçan karaciğerinden veya insan blastodiskinden elde edilen asidik bir glikoprotein olan RNasin, çeşitli RNazlara bağlanarak onu inaktive edebilen, RNazın rekabetçi olmayan bir inhibitörüdür.
• Diğerleri: SDS, üre, diatomlu toprak vb. de RNaz üzerinde belirli bir inhibitör etkiye sahiptir.

2. RNase inhibitörleri nelerdir?

RNase inhibitörleri, RNase aktivitesini inhibe edebilen bir madde sınıfıdır. Yaygın RNase inhibitörleri arasında Dietil Pirokarbonat (DEPC), Guanidin İzotiyosiyanat, Ribonükleozid Vanadyl Kompleksleri (RVC) ve RNase'nin protein inhibitörleri (RNasin) bulunur. Bunlar arasında, DEPC ve guanidin izotiyosiyanat belirli bir toksisiteye sahiptir ve RVC, PCR polimeraz üzerinde inhibitör bir etkiye sahiptir ve bu, sonraki deneylere elverişli değildir. RNasin toksik değildir ve RNase'nin rekabetçi olmayan bir inhibitörüdür ve çeşitli RNase'lere bağlanarak onları etkisiz hale getirebilir.

3. RNase İnhibitörü ne işe yarar?

RNase inhibitörleri, bu tür kirleticileri engellemek ve kontrol etmek için RNA'nın enzimatik manipülasyonlarında genellikle bir önlem olarak kullanılır. RNasin, sıçan karaciğerinden veya insan blastoderminden elde edilen asidik bir glikoproteindir ve RNase'e kovalent olmayan bir şekilde spesifik olarak bağlanarak bir kompleks oluşturabilir, RNase inaktivasyonuna neden olarak RNA'nın bütünlüğünü koruyabilir. Şu anda, RNase İnhibitörü cDNA sentezi, RT-PCR, in vitro transkripsiyon/translasyon reaksiyonları veya RNA saflaştırması gibi uygulamalarda RNA bozunmasını önlemeye yardımcı olur.

4. Murin RNase İnhibitörünün özellikleri nelerdir?

Rekombinant fare RNaz inhibitörleri, insan kökenli RNaz inhibitörlerinde bulunan 2 oksidasyona duyarlı sistein içermez. Bu nedenle fare RNaz inhibitörü yüksek anti-oksidasyon aktivitesine sahiptir ve düşük DTT deneyleri için daha stabildir. Ek olarak, Yeasen'in Fare RNaz İnhibitörü aşağıdaki özelliklere sahiptir:
1) Genel RNaz inhibisyonu: YEASEN'in fare RNaz inhibitörü, spesifik olarak RNaz A, RNaz B, RNaz C vb.'yi inhibe eder.
2) Çok yönlü reaksiyon koşulları: RNase inhibitörü, termostabil ters transkriptaz için uygun olan pH 5.0-9.0 ve 25℃-55℃'de aktiftir.
3) Çoklu alt akış deneyleri mümkündür: RNase İnhibitörü, Taq DNA Polimeraz, AMV veya M-MuLV Ters Transkriptaz veya Faj RNA Polimerazlar (SP6, T7 veya T3) ile birlikte kullanıldığında polimeraz aktivitesinde herhangi bir inhibisyon gözlenmez.
4) Seri üretim malları: 2 milyar U'luk tek bir üretim kapasitesi, ürün homojenliğini, tedarik istikrarını ve zamanında teslimatı sağlayarak maliyet yönetimine yardımcı olur.
5) Partiden partiye tutarlılık: ISO13485 kalite yönetim sistemi tarafından olgun protein ekspresyonu ve saflaştırma platformu, partiler arasında ürün stabilitesini sağlamak için kalite gereksinimlerine göre kalite kontrol testleri.

5. İlgili ürünler ve performans

A. RNase İnhibitörü RNase aktivitesini engeller

1μg HEK hücre toplam RNA'sı, 1μL RNaz inhibitörü 5ng RNaz'ı etkili bir şekilde inhibe edebilir.

Şekil 1. Fare RNaz İnhibitörünün inhibitör etkisi.

B. RNase İnhibitörü qPCR testinde yabancı ürünleri geride bırakıyor

Yeasen ve R* Şirketi fare kaynaklı RNase inhibitörlerinin (MRI) inhibitör etkisi, aynı deneysel koşullar altında qPCR tekniği kullanılarak ölçüldü ve YEASEN Murin kaynağının RNase inhibitörü, sistemdeki RNase A'yı etkili bir şekilde inhibe etti. İnhibisyonun etkisi, rakiplerin etkisinden üstündü.

Şekil 2. R* MRI RNase inhibisyon testi

Not: Şekildeki eğriler soldan sağa şöyledir: Pozitif kontrol (sadece RNA, RNase ve MRI yok), 40 U MRI, 30 U MRI, 20 U MRI, 10 U MRI ve Negatif kontrol (RNA + RNase, MRI yok).

Şekil 3. Yeasen MRI RNase inhibisyon testi

Not: Şekildeki eğriler soldan sağa şöyledir: Pozitif kontrol (sadece RNA, RNase ve MRI yok), 80 U MRI, 60 U MRI, 40 U MRI, 30 U MRI, 20 U MRI, 10 U MRI, Negatif kontrol (RNA+RNase, MRI yok).

Şekil 4. Yeasen MRI ve R* MRI'nın RT-qPCR sonuçlarının BT'si

6. İlgili ürünler

Yeasen'in sağlayabileceği ilgili ürünler Tablo 1'de gösterilmektedir:

Tablo 1.Ürün Listesi

7. Sıkça Sorulan Sorular

S1: Murin RNaz inhibitöründe RNaz olacak mı?
A: Her reaktif, Murin RNaz inhibitörünün RNaz kontaminasyonuna yol açmamasını sağlamak için RNaz aktivitesini tespit edecektir.
S2: Murin RNaz inhibitörlerinin alt akış PCR deneyleri üzerinde bir etkisi olacak mı?
A: Hiçbir etkisi olmayacaktır. Her Murin RNase inhibitörü partisi kalite testinden sonra genomik kontaminasyondan arındırılmıştır ve RT-PCR ve RT-qPCR araştırmalarında kullanılabilir.
S3: Murin RNase inhibitörü etkisiz hale getirilecek mi?
C: İnhibitörler 65°C'nin üzerindeki sıcaklıklarda inaktif hale gelirler ve şiddetli karıştırma da inaktivasyona neden olur.
S4: Reaksiyon sistemini hazırlamak için Murin RNaz inhibitörü kullanılırken hangi önlemler alınmalıdır?
Cevap: Sistem hazırlanırken, RNase kontaminasyon kaynakları oluşturabilecek diğer bileşenler eklenmeden önce bir RNase inhibitörü eklenebilir.
S5: Murin RNase inhibitörlerinin endonükleaz ve ekzonükleaz aktivitesi var mıdır?
Cevap: Ürün verimini artırmaya yardımcı olan endonükleaz ve ekzonükleaz aktivitesi yoktur.

Okuma ile ilgili olarak:

Fare RNaz İnhibitörleri ——RNaz kontaminasyonunu başarıyla ortadan kaldırın ve RNA'yı koruyun

Ters Transkriptaz Seçimi

YEASEN Isıya duyarlı UDG——Aerosol kirliliğini kolayca kontrol edin

Yüksek kaliteli izotermal amplifikasyon hammaddeleri - RT-LAMP'ı daha hassas ve daha hızlı hale getiriyor!