Ters transkriptaz, RNA bağımlı DNA polimeraz olarak da bilinir, tek zincirli RNA'yı DNA'ya transkribe eden bir DNA polimeraz enzimidir. Ters transkriptazın performansı, moleküler tanı reaktiflerinin nihai performansını doğrudan etkileyecektir. Moleküler tanı reaktifi üreticilerinin sorun noktalarına yanıt olarak, Yeasen ters transkriptaz üzerinde yönlü dönüşümü gerçekleştirmiştir. Ters transkriptaz mükemmel bir performansa sahiptir ve müşteriler tarafından iyi karşılanmaktadır!

1. Ters transkriptazın işlevi nedir?
2. Ters transkriptaz nasıl seçilir?
3. Neden Yeasen'in ters transkriptazını seçmelisiniz?
4. İlgili ürünler ve performans
5. İlgili ürünler

1. Ters transkriptazın işlevi nedir?

Ters transkriptaz, RNA'ya bağımlı bir DNA polimerazdır. Şablon RNA'yı transkribe edebilir ve tamamlayıcı DNA (cDNA) oluşturur. Tek zincirli cDNA, DNA polimeraz kullanılarak çift zincirli DNA'ya dönüştürülür. Bu nedenle ters transkriptazlar, RT-PCR adı verilen polimeraz zincir reaksiyonu tekniğiyle birleştirildiğinde mRNA sentezinin seviyesini ölçmek için yaygın olarak kullanılır. Kantitatif RT-PCR analizleri, hastalık teşhisinde yaygın olarak kullanılır. Bu nedenle, ters transkriptaz bilimsel araştırma ve pratik uygulamada önemli bir rol oynar.

2. Ters transkriptaz nasıl seçilir?

Yaygın ters transkriptazlar M-MLV ve AMV'dir, bunların arasında M-MLV, AMV'den daha iyidir. Ancak geleneksel RT enzimlerinin iki aktif bölgesi vardır, biri polimeraz aktivitelerini gerçekleştirirken diğeri ribonükleaz H aktivitesini gerçekleştirir. RNase H, DNA-RNA hibritlerinin RNA kısmını parçalayabilen bir endonükleazdır, aile. Bu nedenle, RNase H aktivitesinden yoksun ters transkriptaz cDNA sentezi için faydalıdır. Bunun yanı sıra, RT'nin termostabil bir versiyonunu kullanmak, spesifik olmayan nükleik asit amplifikasyonunu düşürmek ve karmaşık ikincil yapıların etkisini en aza indirmek için faydalıdır.

3. Neden Yeasen'in ters transkriptazını seçmelisiniz?

Yeasen, RNase H aktivitesini ortadan kaldıran ve böylece cDNA sentezi yeteneğini geliştiren ters transkriptaz üzerinde yönlü bir modifikasyon gerçekleştirdi. Ters transkripsiyonun termostabilitesini geliştirmek için protein evrim teknolojisini kullanıyor.

Yeasen'in ters transkriptazı yalnızca güçlü sentez yeteneğine değil, aynı zamanda güçlü bir tolerans yeteneğine de sahiptir. Ayrıca, Yeasen'in kalite konusunda katı gereksinimleri vardır. Ters transkriptaz için en iyi seçimdir.

4. İlgili ürünler ve performans

4.1 65°C'lik yüksek sıcaklığa dayanıklı

Şablon olarak 500ng 293T hücre toplam RNA'sı kullanılarak, ters transkripsiyon Hifair™ Ⅲ Ters Transkriptaz kullanılarak 42°C-65°C'de gerçekleştirildi. TFRC genini çoğaltmak için şablon olarak 1 μL cDNA alın (4,4 kb).

Şekil 1. Ters transkripsiyonu 42°C-65℃'de gerçekleştirin

4.2 Karmaşık şablonlarla uyumludur

55°C'lik reaksiyon sıcaklığı, geleneksel şablonların ve ikincil yapı şablonlarının ters transkripsiyonunu karşılayabilir ve yüksek GC şablonlarının reaksiyon sıcaklığı uygun şekilde 65°C'ye çıkarılabilir.

Şekil 2.GC açısından zengin şablonlar ve ikincil yapı şablonları için uygundur

4.3 Mükemmel uzatma performansı

Şablon olarak 293T hücrelerinin 500ng toplam RNA'sını ve primer olarak Oligo(dT)'yi kullanarak cDNA, Hifair™ Ⅲ Ters Transkriptaz kullanılarak sentezlendi. DY1C1N1 geninin 5'inin 500 bp'sini çoğaltmak için şablon olarak 1 μL cDNA alın (19,9 kb). Sonuçlar, Hifair™ Ⅲ Ters Transkriptaz'ın 19,8 kb'ye kadar cDNA sentezleyebildiğini gösterdi.

Şekil 3. 19,8 kb'ye kadar cDNA sentezlenebilir

4.4 Hızlı sentez

293T hücrelerinin RNA'sı şablon olarak kullanılarak, ters transkripsiyon kılavuzdaki standart prosedüre göre gerçekleştirildi ve ters transkripsiyon süresi sırasıyla 5, 10, 15, 30, 45 ve 60 dakikaya ayarlandı. Hifair™ III Ters Transkriptaz 5 dakika içinde 6kb cDNA sentezleyebilir ve özgüllüğü ve verimi V markasınınkinden üstündür.

Şekil 4. 6 kb cDNA 5 dakika içinde sentezlenebilir

4.5 Geniş doğrusal aralık

293T hücrelerinin 5pg-5μg toplam RNA'sını şablon olarak kullanarak, cDNA Hifair™ III Ters Transkriptaz kullanılarak sentezlendi. Şablon olarak 1 μL cDNA kullanıldı ve dört gen üzerinde qPCR gerçekleştirildi ve sonuçlar amplifikasyon verimliliğinin %98 ile %100,10 arasında olduğunu gösterdi. Bu, cDNA'nın geniş bir doğrusal şablon aralığında verimli bir şekilde sentezlenebileceğini gösterir.

Şekil 5. cDNA geniş bir şablon aralığında verimli bir şekilde sentezlenebilir

4.6 Sıkı kalite kontrolü

Yeasen'in ters enziminin istikrarlı performansını garantilemek için Yeasen, üretim sürecini stabilize etmek ve parti kararlılığını sağlamak için üretim sürecindeki gereklilikleri sıkı bir şekilde uygular. Aynı zamanda, ekzonükleaz, nikaz, RNaz vb. kalıntıları tespit etmek için kalite denetimi güçlendirilir. Sonraki deneyleri etkilememek için kalıntı kalmamasını sağlayın.

Şekil 6. Kalıntı tespiti

5. İlgili ürünler

Yeasen’in sağladığı ürünler aşağıdaki gibidir.

Tablo 1. İlgili ürünler

Okuma ile ilgili

Ters Transkriptaz Seçiminin Kılavuzu

YEASEN UDG: PCR reaksiyonlarında "anti-fouling uzmanı"