Dairesel RNA (circRNA), kodlamayan RNA moleküllerinin benzersiz bir sınıfıdır. Geri ekleme adı verilen bir mekanizma yoluyla oluşurlar. Öncül mRNA'nın iki eksonu ekleme sırasında kapalı bir halka yapısına bağlanır. Bu, doğrusal RNA moleküllerinde bulunan yaygın 5' başlık ve 3' kuyruk yapılarından kaçınılmasını sağlar. Bu dairesel yapı circRNA'ya yüksek stabilite kazandırır, hücre içindeki nükleazlar tarafından parçalanmaya karşı daha az duyarlı hale getirir. Bu nedenle hücrelerde daha uzun bir yarı ömre sahiptirler, bu da pratik uygulamalarda düşük dozlu ve uzun süreli etkiler elde etmelerini sağlar. Ek olarak, circRNA, nispeten basit bir üretim sürecinin avantajına sahiptir çünkü , modifiye edilmiş nükleotidler kapaklama veya poliadenilasyon, dairesel RNA'yı ilaç geliştirmede önemli bir nokta haline getiriyor.
İlaç geliştirmede önemli avantajları vardır, bunların detayları esas olarak şunlardır: listelenmiş Aşağıdakilerde:
01 Daha yüksek stabilite
CircRNA'nın yapısı onu nükleazlar tarafından parçalanmaya karşı dirençli hale getirir, bu nedenle İlaçların kalıcı etkisi için hayati önem taşıyan, daha uzun yarı ömre ve hücrelerde daha yüksek stabiliteye sahip olmasıdır.
02 Düşük immünojenite
Doğrusal RNA ile karşılaştırıldığında circRNA'nın daha düşük immünojenitesi vardır, bu da bağışıklık reaksiyonlarının olasılığını azaltır ve circRNA'yı ilaç taşıyıcısı olarak daha uygun hale getirir.
03 Verimli protein ifadesi
Araştırmalar, tasarlanmış circRNA'ların ökaryotik hücrelerde proteinleri stabil ve etkili bir şekilde ifade edebildiğini gösteriyor; bu, protein replasman tedavisi için özellikle önemli.
04 Potansiyel hastalık tedavi uygulamaları
circRNA'nın nadir görülen hastalıklar, kanser tedavisi ve aşı geliştirmenin bir parçası olmak üzere çeşitli hastalıkların tedavisinde potansiyel gösterdiği görülmüştür.
05 Yenilikçi teslimat sistemi
Yeni geliştirilen lipid nanopartiküller (LNP'ler) gibi iletim sistemleri, ilaçların hedeflenmesi ve etkinliği açısından kritik öneme sahip olan circRNA'yı hedef hücrelere etkili bir şekilde iletebilmektedir.
06 Aşı geliştirme
circRNA aşıları, COVID-19 aşılarının geliştirilmesinde potansiyel göstermiş olup, daha nötralize edici antikor üretimi ve etkili T hücresi tepkileri sağlama yeteneğine sahip olup, doğrusal mRNA'ya kıyasla ortam sıcaklıklarında daha kararlıdır, bu da depolama ve taşıma koşullarını basitleştirmeye yardımcı olur.
07 Gen düzenleme
circRNA ayrıca gen düzenleme alanında da potansiyel gösteriyor, gen düzenleme sistemleri için bir şablon görevi görebiliyor, daha kalıcı ve kararlı protein ifadesi sağlayabiliyor.
CircRNA üretim süreci; şablon hazırlama, in vitro transkripsiyon, DNA şablonunun çıkarılması, sirkülerizasyon ve saflaştırmayı içerir. RNA sirkülerizasyonundan sonra, sirkülerleşmemiş RNA'nın sirküler RNA'yı zenginleştirmek için Ribonükleaz R (RNase R) ile sindirilmesi gerekir.
EVET çift yönlü moleküler enzim rasyonel tasarım ve yönlendirilmiş evrim platformuna ve GMP düzeyindeki ürünler için özel olarak tasarlanmış moleküler enzim üretim üssüne sahiptir. Yüksek saflıkta ve güçlü sindirim aktivitesine sahip GMP sınıfı RNase R ürünleri geliştirin ve üretin, yeni RNA aşılarının/ilaçlarının piyasaya sürülmesine destek sağlayın.
Şekil 1: Dairesel RNA üretim süreci diyagramı
(Kaynak:Front Immunol 2023 Jan 12:13:1091797. doi: 10.3389/fimmu.2022.1091797. eKoleksiyon 2022.)
RNase R (Ribonuclease R, RNase R), Mg2+-bağımlı 3'→5' ekzoribonükleazdır ve şu şekildedir: Escherichia coliTüm doğrusal RNA'yı sindirebilir ve circRNA, Lasso RNA'yı sindirmekte zorluk çeker. veya 3' ucunda 7'den az nükleotid çıkıntısı bulunan çift sarmallı RNA molekülleri. RNase R, genellikle doğrusal RNA moleküllerini uzaklaştırmak ve circRNA ve lariat RNA gibi doğrusal olmayan RNA'ları zenginleştirmek amacıyla kullanılır.
Ana uygulama bölgeler şunlardır:
- Gen ifadesi araştırması;
- Alternatif ekleme üzerine araştırmalar;
- Biyolojik örneklerden circRNA'yı zenginleştirin;
- İntronik lariyat yapısı RNA'yı tanımlayın;
- Ekzon circRNA'yı tanımlayın.
Ürün Özellikleri
- Protein saflığı (SDS-PAGE) ≥%95;
- Ekzonükleaz kalıntısı yok;
- Rakipleriyle karşılaştırıldığında ürün, doğrusal RNA'yı sindirmede eşdeğer kabiliyete sahiptir;
- Ürünün, rakipleriyle karşılaştırıldığında circRNA zenginleştirmesi üzerinde benzer bir etkisi bulunmaktadır.
Performans gösterimi
Protein saflığı (SDS-PAGE) ≥%95
Şekil 2: Protein Saflık Testi: Soldan sağa, sonuçlar aynı ürün konsantrasyonunun farklı hacimleri (1 μL, 2 μL, 3 μL) içindir. Sonuçlar YEASEN'in protein saflığının RNase R ürünü ≥%95'tir.
Ekzonükleaz kalıntısı yok
Şekil 3: Ekzonükleazın Kalıntı Tespiti: 20 U YEASEN ekleyin λDNA-Hind III sindiriminin 0,5 μg'ına RNase R ekleyin, 37°C'de 4 saat inkübe edin ve ardından agar jel elektroforezi yapın. Sonuçlar DNA bantlarının değişmediğini, YEASEN'de artık ekzonükleaz olmadığını gösteriyor RNase R ürünü.
Doğrusal RNA'nın sindirilmesinde ithal markalı RNase R ürünü ile karşılaştırılabilir
Şekil 4: YEASEN RNase R ürünlerinin ve ithal bir üreticinin RNase R ürünlerinin doğrusal RNA'yı sindirme yeteneğinin karşılaştırılması: YEASEN RNase R ürünü ve ithal bir üreticiden gelen RNase R ürünü doğrusal RNA substratları içeren bir reaksiyon sistemine eklendiğinde, sonuçlar eklenen RNase R ürünü miktarı 2-4 U'ya ulaştığında RNA bantlarının zayıfladığını veya hatta kaybolduğunu gösterdi, bu da RNase R'nin doğrusal RNA molekülleri üzerinde sindirim etkisi olduğunu gösteriyor. Dahası, YEASEN'in sindirim kapasitesi RNase R ürünü ve ithal üretici A'dan gelen doğrusal RNA molekülleri üzerindeki RNase R ürünü karşılaştırılabilir.
A'nın ithal ettiği markalı RNase R ürününün circRNA zenginleştirme etkisine eşdeğerdir
Şekil 5: YEASEN tarafından circRNA'nın zenginleştirme etkisinin karşılaştırılması RNase R ürünü ve ithal bir üreticiden RNase R ürünü A: circRNA substratlarını içeren reaksiyon sistemi YEASEN ile reaksiyonlara tabi tutuldu ürünleri ve RNase R ürünleri sırasıyla ithal üretici A'dan gelmektedir.Sonuçlar, YEASEN'in RNase R ürünü ile ithal üretici A'dan gelen RNase R ürünü ile muameleden sonra RNA bantlarının parlaklığında önemli bir fark olmadığını gösterdi; bu da circRNA'nın RNase R ile sindirime dayanabileceğini göstermektedir. Yukarıdaki sonuçlar her iki YEASEN'in de Ürünler ve ithal edilen bir üreticinin RNase R ürünleri circRNA zenginleştirmesinde etkili bir şekilde kullanılabilir.
Müşteri geri bildirimi
SenKOLAYLAŞTIRMAK RNase R, diğer markalara kıyasla doğrusal RNA üzerinde daha iyi kesme etkisine sahiptir.
Şekil 6: YEASEN arasındaki doğrusal mRNA molekülleri üzerinde RNase R sindiriminin etkilerinin karşılaştırılması Ürünler ve üreticiler A ve B: Reaksiyon, YEASEN eklenerek gerçekleştirildi RNase R ürünü ve üreticiler A ve B'den RNase R ürünleri, 1 μg doğrusal mRNA substratı içeren bir reaksiyon sistemine. Sonuçlar, YEASEN'in RNase R ürünü, A ve B üreticilerinin RNase R ürünlerine kıyasla doğrusal RNA üzerinde daha iyi sindirim verimliliğine sahipti.
Ürün Bilgileri
| Ürün Adı | Ürün Kodu | Ürün Özellikleri |
| 14615ES | 500U/5000U/20KU/200KU | |
| 14616TS | 500 µl/1 mL/5 mL/10 mL/100 mL |
Referanslar
1.Qu L, Yi Z, Shen Y, ve diğerleri. SARS-CoV-2'ye ve ortaya çıkan varyantlara karşı dairesel RNA aşıları. Hücre. 2022;185(10):1728-1744.e16. doi:10.1016/j.cell.2022.03.044
2. Chen L, Wang C, Sun H, ve diğerleri. CircRNA keşfi ve analizi için biyoenformatik araç kutusu. Kısa Biyoinform. 2021;22(2):1706-1728. doi:10.1093/bib/bbaa001