NGS kütüphane kantifikasyonunun özü nükleik asit (DNA veya RNA) kantifikasyonudur. Yüksek kaliteli dizileme verileri elde etmek için NGS kütüphane kantifikasyonunun doğru analizi çok önemlidir. NGS kütüphanesinin kantifikasyonunun kantifikasyonu yüksekse, yetersiz kümeleme nedeniyle dizileme verilerinin verimi düşük olabilir. Ancak, düşük kantitatif konsantrasyon kümeler arasında sinyal girişimine neden olarak düşük kaliteli veriler üretebilir ve hatta dizileme başarısızlığına yol açabilir. Ayrıca, dizileyicilerin dizileme akışındaki artışla birlikte, dizileme için genellikle birden fazla NGS kütüphanesi birleştirilir. Dizileme verilerinin boyutunun gereksinimlerine göre, her örnek verisinin boyutunun çıktısını sabitlemek için karşılık gelen molar miktarlara sahip NGS kütüphaneleri kantifikasyon sonuçlarına göre karıştırılır. Bu nedenle, kütüphanelerin doğru NGS kütüphane kantifikasyonu çok önemlidir.

Şu anda, NGS kütüphanesi kantifikasyonunun iki ana yöntemi vardır, ultraviyole emilim yöntemi ve floresan boya yöntemi. NanoDrop, ultraviyole emilim ilkesine göre tasarlanmış bir DNA kantifikasyon cihazıdır; Qubit, floresan boya ilkesine göre geliştirilmiş bir DNA kantifikasyon cihazıdır. Bu iki yöntemin kantitatif doğruluğu ve maliyeti farklıdır. Burada esas olarak kübit yöntemi önerilir. Peki size kübiti neden öneriyoruz? Yeasen tarafından tedarik edilen Qubit ürünlerinin özellikleri nelerdir? Lütfen okumaya devam edin...

1. Neden Qubit’i size öneriyoruz?

2. Yeasen tarafından tedarik edilen Qubit ürünlerinin özellikleri nelerdir?

• Qubit nasıl çalışır?
• Yeasen tarafından tedarik edilen popüler ürün
• Ürün Özellikleri

3. Farklı örnekler için Qubit nasıl seçilir?

1. Neden Qubit’i size öneriyoruz?

Qubit'in Nanodrop'tan daha iyi olduğuna şüphe yok. Peki qubit neden nanodrop'tan daha iyidir? Qubit ve nanodrop arasındaki fark nedir? Öncelikle, daha önce de belirtildiği gibi, DNA kantifikasyonu ilkesinde farklılık gösterirler, NanoDrop ultraviyole absorpsiyona dayalı olarak tasarlanmıştır. Ultraviyole absorpsiyon yönteminin ilkesi, nükleik asit bileşenlerinde purin ve pirimidin bazlarının bulunması ve bu bazların konjugat çift bağlara sahip olmasıdır. UV bölgesinde 250-280 nm'de güçlü ışık absorpsiyonu vardır ve maksimum absorpsiyon değeri yaklaşık 260 nm'dir. Bu nedenle, nükleik asidin UV absorpsiyonu konsantrasyon kantifikasyonu için kullanılabilir. NanoDrop basit ve kullanımı hızlıdır, ancak DNA, RNA, bozunmuş nükleik asitler, serbest nükleotidler ve diğer safsızlıklar arasında ayrım yapamaz. Doğru kütüphane kantitatif verileri elde etmek için uygun değildir. Ancak, Qubit kantitasyon, özellikle DNA kantitasyonu için doğru NGS kütüphane kantifikasyonu için en iyi seçimdir. Peki kübit DNA kantifikasyonunun özellikleri nelerdir? Lütfen aşağıdaki tabloyu inceleyin:

2. Yeasen tarafından tedarik edilen Qubit ürünlerinin özellikleri nelerdir?

Yeasen tarafından tedarik edilen Qubit ürünlerinin özelliklerini tanıtmadan önce, nasıl çalıştığını anlayalım.

2.1 Qubit nasıl çalışır?

Qubit'in prensibi, floresan boyaları kullanarak floresan yaymak için DNA moleküllerine bağlanmak ve ardından nükleik asit konsantrasyonunu elde etmek için floresan yoğunluğunu ölçmektir. Floresan boyalar yalnızca DNA çift sarmalına bağlandıktan sonra floresan yayar ve ortaya çıkan floresan DNA konsantrasyonuyla orantılıdır.

2.2 Yeasen tarafından sağlanan popüler ürün

The Qubit® için 1×dsDNA HS Analiz Kiti (Kat#: 12642ES), temel alınarak geliştirilmiştir Qubit® kiti için dsDNA HS Assay Kit (Kat#: 12640ES), orijinal kitteki konsantre boyaları bir çalışma solüsyonuna önceden seyreltmek için kullanıma hazır bir Qubit ön karışım solüsyonudur. Çalıştırma sırasında, Qubit® florometresi ile numune konsantrasyonunu belirlemek için sadece çalışma sıvısını test edilecek numuneyle karıştırmanız gerekir, bu kullanımı daha kolaydır.

2.3 Ürün Özellikleri

Kullanımı basit ve kolaydır: kullanıma hazır önceden karıştırılmış sıvı, çalışma sıvısı hazırlamaya gerek yoktur, basit kullanım, niceliksel olarak daha fazla zaman tasarrufu;

Şekil 1. Qubit için dsDNA HS Analiz Kitinin süreçleri

Ultra yüksek hassasiyet: 64x gradyan seyreltme hassas kantifikasyon, 0,2-100 ng dsDNA iyi doğrusal ilişkiye sahiptir;

Süper özgüllük: Spesifik dsDNA tespiti, bazı geleneksel kirleticilere karşı mükemmel toleransa sahiptir;

Boyanın hızlı bağlanma hızı: doygunluğa 2 dakika içinde ulaşılabilir, bu nedenle doğru kantitatif sonuçların hızlı okunması için beklemeye gerek yoktur;

Yüksek kararlılık: Floresan sinyali 3 saat sürdü ve kantitatif doğruluk oda sıcaklığında 20 gün sonra etkilenmedi.

Şekil 1. Ürün kararlılık testi. Sonuçlar, ürünün Oda sıcaklığında 2 hafta saklandıktan sonra stabildir (ölçülen değer ile teorik değer arasındaki sapma <%10'dur)

Not: İki farklı dsDNA konsantrasyonu seçildi ve 4℃'de saklanan Thermo#Q33230, 4℃'de saklanan Yeasen#12642 ve oda sıcaklığında (yaklaşık 25℃) saklanan Yeasen#12642'nin farklı zamanlardaki konsantrasyon değerleri belirlendi ve her ölçüm ile ilk ölçüm arasındaki sapma oranı (0d olarak gösterildi) hesaplandı.

Şekil 2. Ürün kararlılık testi. Süper kararlılık, geçerlilik süresi içinde test sonuçlarının yüksek alakalılığı

3. Farklı örnekler için Qubit nasıl seçilir?

Qubit, hızlı niceleme! Qubit'i kütüphane nicelemesi için kullanmanın birçok avantajı vardır. Tespit süreci hızlı ve etkilidir.Dizileme sonuçları tek bir örnek için birkaç saniye içinde elde edilebilir ve konsantrasyon doğrudan çıktı olarak alınabilir, bu çok sezgiseldir. Aynı zamanda, geleneksel kütüphane kantifikasyonu ve dsDNA kantifikasyonu için ilk tercih olan toplu örnek kantifikasyonu için enzim etiketli cihazların çoğuyla da uyumlu olabilir.