HEK293 hücrelerinde eksprese edilen insan wnt3a, organoidlerin yetiştirilmesini teşvik eden yüksek aktivite sergiliyor

Organoidler, doğal dokulara veya organlara çok benzeyen, in vitro oluşturulmuş üç boyutlu modellerdir ve hastalık modelleme, organ gençleştirme ve kişiselleştirilmiş tıbbi bakım alanlarında önemli bir öneme sahiptirler. Bu organoidlerin yetiştirilmesi, çeşitli sitokinlerin dikkatli bir şekilde yönetilmesini gerektirir ve Wnt3a, çok çeşitli dokulardan türetilen organoidleri beslemede önemli bir rol üstlenen, sıklıkla kullanılan bir faktör olarak öne çıkar.

Wnt-3a nedir?

Wnt-3a, Wnt1, Wnt2, Wnt2b (Wnt13), Wnt3, Wnt3a, Wnt4, Wnt5a, Wnt5b, Wnt6, Wnt7a, Wnt7b, Wnt8a, Wnt8b, Wnt9a (Wnt14 olarak da bilinir), Wnt9b (Wnt14b), Wnt10a, Wnt10b, Wnt11 ve Wnt16 dahil olmak üzere 19 insan varyantını içeren salgılanan proteinler grubu olan Wnt ailesine aittir. Bu aile, korunması ve sistein açısından zengin bileşimi ile karakterize edilir. Wnt proteinleri, hücre zarı reseptörlerine veya komşu hücre zarı reseptörlerine bağlanarak Wnt sinyal yolunu kolaylaştırır. Bu yol, Wnt1, Wnt2, Wnt2b, Wnt3, Wnt3a, Wnt7a, Wnt8, Wnt8b ve Wnt10a'yı içeren β-katenin tarafından aracılık edilen kanonik yol ve Wnt4, Wnt5a, Wnt6 ve Wnt11'i kapsayan β-katenin'den bağımsız kanonik olmayan yol olmak üzere kategorize edilebilir. Wnt ailesinin temel üyesi olan Wnt3a, her yerde dağılmıştır ve kendini yenileme, çoğalma, farklılaşma ve hareketlilik gibi çeşitli hücresel işlevleri yönetmede önemli bir rol oynar.

Wnt-3a Sinyal Yolu Transdüksiyon Mekanizması

Wnt sinyal yolu, esas olarak embriyonik gelişim ve kanserle ilişkili çok yönlü bir protein etkileşimleri ağıdır. Ancak, yetişkin organizmalardaki normal fizyolojik süreçlerde de rol oynar. Wnt3a, reseptörü Frizzled (Fz) proteinine, yardımcı reseptör lipoprotein reseptör ilişkili protein (LRP5/6) ile birlikte bağlanır ve daha sonra iskele proteini Disheveled'i (Dvl) aktive eder. Bu aktivasyon, Kazein kinaz 1 (CK1), glikojen sentaz kinaz-3β (GSK-3β) ve iskele proteinleri adenomatöz polipozis koli (APC), Axin1 ve Axin2'den oluşan "yıkım kompleksinin" parçalanmasına yol açar. Bu kompleksin çözülmesi, sitoplazmadaki serbest β-Katenin proteinini stabilize eder. Sitoplazmada biriken β-Katenin daha sonra çekirdeğe taşınır ve burada TCF/LEF ailesinin transkripsiyon faktörlerine bağlanır ve en sonunda c-myc ve Cyclin D1 gibi alt akış hedef genlerini aktive eder. Bu kaskad daha sonraki hücresel tepkileri tetikler. Özetle, Wnt sinyal yolu aşağıdaki gibi basitleştirilebilir: Wnt3a→FZD→DVL→kompleks çözünmesi→β-Katenin çekirdeğe girer→TCF/LEF→alt akış gen transkripsiyonu. Wnt3a olmadan, β-katenin normalde sitoplazmada "yıkım kompleksi" tarafından parçalanır ve bu kompleks onu ubiquitinasyon ve ardından proteazomda parçalanma için hedefler. Sonuç olarak, alt akış genlerinin transkripsiyonunu başlatmak için çekirdeğe giremez. Wnt/β-katenin sinyal yolu evrim boyunca oldukça korunmuştur ve embriyonik gelişim, hücre büyümesi, farklılaşma, polarite oluşumu, sinir gelişimi ve karsinogenezde temel bir rol oynar.

Wnt3a ve Organoidler

Wnt3a, organoid üretimi için en sık kullanılan kültür faktörlerinden biri olarak merkezi bir konuma sahiptir. Yüksek aktivitesi, partiler arasındaki tutarlılığı, kontaminasyon eksikliği ve serumsuz hazırlanması, organoid deneylerinin başarısına katkıda bulunan temel faktörlerdir.Wnt3a, bağırsak, mide, pankreas, karaciğer, tiroid, yemek borusu ve sinir sistemi dahil olmak üzere çeşitli dokuların organoid kültürlerinde yaygın bir kullanım bulmuştur. Bilimsel araştırmacılara ve ilaç şirketlerine organoid oluşumu ve tümör araştırmasında Wnt3a'nın klinik uygulamasına ilişkin çalışmalarında yardımcı olmak amacıyla YEASEN, organoid kültürünü kolaylaştırmak için tasarlanmış oldukça aktif bir Wnt3a protein ürünü (Katalog: 92276ES) tanıttı.

Şekil 3. HEK293T insan embriyonik böbrek hücrelerinde Topflash muhabir aktivitesini indükleme yeteneği ile ölçüldü. Bu etkinin ED50 değeri 25 ng/mL'dir.

Organoid Kültür Doğrulaması

Yeasen Sitokinlerin, akciğer kanseri, rahim ağzı kanseri, yumurtalık kanseri, pankreas kanseri ve bağırsak kanseri gibi insan tümör organoidleri ile insan ve fare ince bağırsak organoidleri gibi normal organoidlerde doğrulandığı görülmüştür.

İlgili Sitokinler bilgi