UCF.ME™ UltraNuclease, alternatif olarak Totipotent nükleaz, geniş spektrumlu nükleaz ve sınırlayıcı olmayan İnhibitör endonükleaz olarak da bilinir, Serratia Marcescen'den türetilmiştir ancak daha sonra Yeasen Araştırma ve Geliştirme ekibi tarafından yeniden tasarlanmış ve üretilmiştir, E. coli'de ifade edilmiştir. 26,5 kD'lik bir moleküler ağırlığa ve 6,85'lik bir izoelektrik noktaya sahiptir. Şaşırtıcı bir şekilde, Nükleik asidi 2 ila 5 baz uzunluğunda 5'-monofosfat oligonükleotitlere tamamen parçalama yeteneğine sahiptir. Hem UltraNuclease hem de Salt Active UltraNuclease, Benzonase'a mükemmel alternatifler olarak hizmet eder.
1. Totipotent nükleaz nedir?
2. Totipotent nükleazın kullanım senaryoları nelerdir?
3. Totipotent nükleazın sahip olması gereken avantajlar nelerdir?
4. SSS
5. İlgili Ürünler
1. Totipotent nükleaz nedir?
Totipotent nükleazlar, tek zincirli, çift zincirli, doğrusal, doğal ve denatüre nükleik asitleri kapsayan geniş bir nükleik asit form yelpazesini parçalama yeteneğine sahip genetik olarak modifiye edilmiş endonükleazlardır. 3 ila 5 baz arasında değişen uzunluklarda 5'-monofosfat oligonükleotidler üretirler ve belirli bir baz tanıma göstermezler. Bu çok yönlü nükleazlar, çeşitli koşullar altında sağlam bir kararlılık ve sindirim aktivitesi sergilerler ve bu da onları numunelerdeki veya ürünlerdeki nükleik asit kalıntılarını ortadan kaldırmak için oldukça etkili hale getirir. Bu, numune saflığını ve ürünlerin biyolojik etkinliğini artırarak totipotent nükleazları bilimsel araştırma, aşılar ve protein ve polisakkarit ilaçları gibi endüstriler için tercih edilen enzim preparatı haline getirir.
Ayrıca, totipotent nükleazlar aşı, antikor, hücre terapisi ve diğer biyolojik ürünlerin hazırlanması sırasında nükleik asitlerin uzaklaştırılmasında önemli bir rol oynar ve terapötik kullanım için son üründeki kalıntı nükleik asidin doz başına 10 pg'yi geçmemesi gerektiğini belirten FDA düzenlemelerine uyumu sağlar. Nükleik asitleri parçalayarak, totipotent nükleazlar hücre lizatlarının viskozitesini azaltır ve virüsler, AAV vektörleri ve inklüzyon gövdeleri gibi hücre kaynaklı parçacıkların saflaştırılması sırasında çözelti filtrasyonu/ultrafiltrasyon sürecini kolaylaştırır. Bu, işlemeyi kolaylaştırır, santrifüjlemeyi iyileştirir, çökelme ve süpernatantın ayırma verimliliğini artırır ve kromatografik saflaştırmanın etkinliğini artırarak nihayetinde verimi ve ürün saflığını artırır.
2. Totipotent nükleazın kullanım senaryoları nelerdir?
UltraNuclease'ın çok çeşitli uygulama alanları vardır ve özel kullanım senaryoları şunlardır.
2.1 Virüs saflaştırma (lentivirüs, AAV, rekombinant adenovirüs aşısı, inaktif virüs, onkolitik virüs, vb.)
Biyomedikal sektöründe virüslerin kullanımı önemli ölçüde genişliyor ve aşılar, hücre terapisi, gen terapisi ve diğer çeşitli alanlar gibi uygulamaları kapsıyor. Virüs üretiminden sorumlu konak hücreler ağırlıklı olarak sürekli geçiş hücreleridir (CCL'ler). CCL'ler düzensiz büyümeye karşı genetik bir yatkınlık sergiler ve bu da onlara süresiz çoğalma yeteneği verir. Ancak, CCL'lerden kalan DNA'nın varlığı, tümör oluşumuna yol açan kontrolsüz insan hücresi çoğalması gibi potansiyel riskler oluşturabilir. Dahası, bu kalan DNA parçaları bulaşıcı viral genomlar içerebilir ve bu da tümör oluşumuyla birlikte enfeksiyon riski konusunda endişelere yol açar. Sonuç olarak, biyolojik ürünlerdeki kalan DNA'yı yönetmek ve güvenliklerini sağlamak için sıkı kontrol önlemleri zorunludur. Bu bağlamda, UCF'miz.ME™ UltraNuclease virüs arıtımı için güvenli bir çözüm sunuyor.
Tuz, protein veya virüs agregasyonunu azaltmada önemli bir rol oynar ve DNA ve RNA'nın proteinlerden ve diğer hücresel bileşenlerden ayrılmasını kolaylaştırır. Spesifik olmayan bir endonükleaz olan Salt Active UltraNuclease, yüksek tuz konsantrasyonlarında optimum aktivite gösterir. Yüksek tuz koşullarında, enzimler salınan DNA ve RNA'ya daha iyi erişim kazanır ve bunların bozunmasını artırır. Yüksek tuz ortamlarında artan aktiviteye sahip nükleazlar, saflaştırma süreçlerini geliştirmede daha etkili olduklarını kanıtlar. Salt Active UltraNuclease, hücre süpernatantlarında ve lizatlarında viskoziteyi azaltmak için kullanılabilir ve yüksek tuz koşulları altında saflaştırma verimliliğini artırır. Bu enzim ayrıca konak nükleik asit kalıntılarını pikogram düzeyine indirerek virüs saflaştırma, aşı üretimi ve protein ve polisakkarit farmasötiklerinin üretimi dahil olmak üzere çeşitli biyolojik ürün uygulamalarının performansını ve güvenliğini artırır.
2.2 E. coli'de ifade edilen rekombinant proteinin saflaştırılması
E. coli'de ifade edilen belirli proteinler, inklüzyon gövdelerinde birikme eğilimindedir ve bu da sıklıkla konak DNA'sıyla iç içe geçtikleri için saflaştırma sürecini karmaşıklaştırır. Sonuçta oluşan parçalanmış bakteri hücreleri yüksek viskozite sergileyebilir ve protein saflaştırma verimliliğini önemli ölçüde azaltabilir. Ancak, ultrasonik parçalanma sırasında bakteri solüsyonuna 10-50 U/mL UCF.ME™ UltraNuclease eklenerek ve parçalanma tamamlandıktan sonra numune 37°C'de 30 dakika veya 4°C'de bir gece inkübe edilerek, bakteri solüsyonundaki viskozite etkili bir şekilde azaltılabilir. Bu da saflaştırma sürecinin verimliliğini önemli ölçüde artırır. Özetle, proteinin etkili bir şekilde saflaştırılmasını kolaylaştırmak için UCF.ME™ UltraNuclease'ımıza güvenebilirsiniz.
2.3 Hücre kümelenmesini önleyin
Son yıllarda, immünolojik testlerde kriyoprezervasyonlu periferik kan mononükleer hücrelerinin (PBMC) kullanımı önemli ölçüde artmıştır. PBMC hücrelerinin en büyük özelliği, resüsitasyondan sonra kümeleşmelerinin çok kolay olmasıdır; bu da kolayca düşük hücre kalitesine ve güvenilir olmayan test sonuçlarına yol açabilir. Hücreler resüsitasyona tabi tutulduğunda, kültür ortamına uygun konsantrasyonda (25-50 U/mL) UCF.ME™ UltraNuclease eklenir ve hücreler birlikte kültürlenir; bu da hücre kümeleşmesini etkili bir şekilde önleyebilir. Bu nedenle, başarılı bir sonuç elde etme şansınızı artırmak için UCF.ME™ UltraNuclease'ımızdan en iyi şekilde yararlanabilirsiniz.
3. Totipotent nükleazın sahip olması gereken avantajlar nelerdir?
3.1 Geniş uygulama yelpazesi
UCF.ME™ UltraNuclease, çeşitli deneysel koşullar altında çeşitli DNA ve RNA formlarını kesebilir ve parçalayabilir ve çeşitli biyolojik ürünlerdeki artık nükleik asidi gidermek için uygulanabilir.
3.2 Yüksek saflık, yüksek enzim aktivitesi
UCF.ME™ UltraNükleazımız için enzim saflığı %99 veya daha fazladır (HPLC) ve enzim aktivitesi 1,5*106 U/mg veya daha fazladır (genel substrat için mutlak kantitatif yöntem kullanılarak).
3.3 Güçlü uyum yeteneği
UCF.ME™ UltraNuclease, depolama ve dondurma-çözme işlemlerinde yüksek stabiliteye sahiptir. Enzim aktivitesinin eğilimini tespit etmek için UCF.ME™ UltraNuclease'ı -20 °C, 4 °C ve 37 °C'de saklıyoruz. 2 hafta boyunca 37 °C'ye yerleştirildiğinde, enzim aktivitesinde önemli bir değişiklik olmadı.Bu arada, enzimin stabilitesini sağlamak için kuru buz + buz paketi kombinasyonunu kullanıyoruz. ulaşım UCF.ME™ UltraNuclease sizin yerinize. Ayrıca güçlü bir toleransa sahiptir ve çeşitli çalışma koşullarına uyum sağlayabilir.
3.4 Farmakopeye Uygunluk
UCF.ME™ UltraNuclease, UCF.ME'de (Ultra Temiz Fabrika. Moleküler Enzim) üretilir ve bir tür Ultra-temiz enzimdir. Ultra-temiz enzim nedir? HCD, HCR, HCP, DNASE FREE, RNASE FREE, proteaz kalıntısı yok, mikrobiyal kalıntı yok, patojen yok, hayvansal kökenli, antibiyotik kirliliği, ultra düşük endotoksin kalıntısı, yüksek enzim aktivitesi ve yüksek saflık vb. kalite standartlarına ulaşan bir moleküler enzimdir. Bu nedenle ürünlerimize güvenle ve güvenilir bir şekilde güvenebilirsiniz.
3.5 GMP üretimi
UltraNuclease üretiminin tüm süreci GMP üretim atölyesinde tamamlanır ve kalite kontrol planı kesinlikle aşağıdakilere göre uygulanır: farmakope Ar-Ge'den üretime kadar geniş çaplı talebi karşılayan bir yöntemdir.
UCF.ME™ UltraNuclease'in ortağı —— UltraNuclease ELISA kiti
Normal saflaştırma adımlarında, UCF.ME™ UltraNükleaz bir kirlilik olarak kolayca uzaklaştırılır. UCF.ME™ kalıntısını tespit etmek için UltraNuclease, YEASEN, UCF.ME™ kalıntılarını doğru bir şekilde tespit edebilen destekleyici UltraNuclease ELISA kitini geliştirdi Örnekte UltraNuclease. Kit mükemmel doğrusallığa, tekrarlanabilirliğe, geri kazanım oranına ve özgüllüğe sahiptir.
UltraNükleaz ELISA kiti
Doğrusal aralık 0,047 ile 3 ng/mL arasındadır ve R2 0,99'dan büyüktür. İyi parti içi tekrarlanabilirlik ile numuneye sabit konsantrasyonda UltraNuclease ekleriz ve tespit için 3 farklı ELISA kiti partisi kullanırız. Nükleaz konsantrasyonu 3 ile 0,186 ng/mL arasında ve CV %10'dan az olduğunda tespit kurtarma oranı %70 ile %110 arasındadır. Dahası, farklı konsantrasyonlara sahip UltraNuclease'ın simüle edilmiş numune kurtarma oranlarının hepsi %70 ile %130 arasındadır ve diğer markalardan daha iyidir. Ayrıca, UltraNuclease antikorunun 8 yaygın numuneye özgü olmayan bağlanmasını değerlendirdiğimiz için güçlü bir özgüllüğe sahiptir. Müdahale grubunun ve kontrol grubunun sonuçları örtüştü ve hiçbir müdahale görülmedi.
UltraNuclease'in DMF başvurusunun ardından YEASEN, ABD FDA'dan tuz aktifli ultranükleaz.
Başvuru numarası:
| Sayı | Ürün Adı | Dosyalama Numarası |
| 1 | UltraNükleaz | MF037298 |
| 2 | Tuz Aktif UltraNükleaz | MF037815 |
4. SSS
S1: UltraNuclease hangi adımda eklenir?
A: Bu, uğraştığınız örneklere bağlıdır. Virüs saflaştırmasında, genellikle virüs berraklaştırmasından sonra eklenir; E. coli protein saflaştırmasında, hücreler lize edildiğinde eklenebilir; hücre kümelenmesiyle uğraşırken, hücrelerle birlikte kültürleme için doğrudan ortama eklenebilir.
S2: Tepkime sıcaklığı 37°C'ye ulaşamıyorsa nasıl kullanılır?
A: UltraNuclease'ın enzim aktivitesi sıcaklık, işlem süresi ve enzim aktivite birimlerinden etkilenir. Sıcaklık 37°C'ye ulaşamıyorsa, enzim miktarı uygun şekilde eklenebilir veya inkübasyon süresi uzatılabilir.
S3: UltraNuclease proteaz inhibitörleriyle uyumlu mudur?
A: Uyumlu, ancak birçok proteaz inhibitörünün EDTA içerdiğini unutmayın. EDTA 1mM'den yüksek olmaya başladığında, EDTA bazı nükleazların aktivitesini inhibe edecektir.
S4: UltraNuclease nasıl kaldırılır?
A: TFF, diyaliz, kromatografik kolonlar gibi yöntemlerle uzaklaştırılabilir.
S5: UltraNuclease ELISA kiti diğer marka totipotent nükleaz kalıntılarının tespiti için kullanılabilir mi?
A: Bunu yapmanızı önermiyoruz. ELISA kiti tamamen UltraNuclease'e dayalı olarak geliştirilmiştir ve UltraNuclease'i doğru bir şekilde ölçebilir. Diğer markaların altipotent nükleazları, dizi ve üretim süreci açısından UltraNuclease'den farklı olabilir ve test sonuçları yanlış olabilir.
5. İlgili Ürünler
Yeasen’in sağladığı ürünler aşağıdaki gibidir.
Tablo 1 İlgili Ürünler
| Ürün adı | Stok Kodu | Özellikler |
| 20157ES25/60/80/90 | 25KU/100KU/1MU/5MU | |
| 20159ES25/60/80/90 | 25KU/100KU/1MU/5MU | |
| 36701ES59 | 96T | |
| Tuz Aktif UltraNuclease ELISA kiti | 36703ES96 | 96T |