Hieff NGS™ mRNA İzolasyon Ana Kiti, özellikle mRNA saflaştırması için manyetik boncuk kitidir. mRNA Yakalama boncukları, poli A kuyruklu mRNA'ya bağlanarak 10 ng ila 4 μg tam RNA'dan mRNA'yı izole etmek için kullanılabilen Oligo dT (poli A) kuyruklarıyla birleştirilmiş mikron boyutunda paramagnetik mikro kürelerdir.

Özellikler

Bileşenler

Depolamak

Ürünün 2 ~ 8℃'de bir yıl saklanması ve dondurulmaması gerekir.

Talimatlar

1. Gerekli Malzemeler Dahil Değildir

Manyetik raf, Nükleaz içermeyen PCR tüpleri

2. Operasyon

1) mRNA Yakalama Boncuklarını Dengeleyin oda sıcaklığında (~30 dk).

2) 10 ng – 4 μg toplam RNA’yı, Nükleaz içermeyen PCR tüpünde Nükleaz içermeyen su ile 50 μL’ye seyreltin, buz üzerine yerleştirin.

3) Manyetik boncukları ters çevirerek veya vorteksleyerek karıştırın. 50 μL manyetik boncukları 50 μL toplam RNA örneğine ekleyin ve iyice karışması için 6 kez pipetleyin. Tüpün dibine doğru kısa bir süre döndürün.

4) Manyetik boncuk ve RNA karışımını termal döngü cihazında inkübe edin ve aşağıdaki programı çalıştırın: 65°C, 5 dk; 25°C, 5 dk; 25°C, tutun.

5) Tüpü manyetik bir yüzeye yerleştirin raf mRNA'yı toplam RNA'dan ayırmak için 5 dakika bekletin. Üstteki sıvıyı dikkatlice çıkarın.

6) Tüpü manyetik alandan çıkarın raf ve manyetik boncukları 200 μL Boncuk Yıkama Tamponu ile tekrar süspanse edin. Tüm hacmi 6 kez yukarı aşağı pipetleyerek iyice karıştırın. Tüpü manyetik bir raf 5 dakika kadar bekletin ve üstteki sıvıyı dikkatlice alın.

7) 6. adımı tekrarlayın.

8) Tüpü manyetik alandan çıkarın rafManyetik boncukları yeniden süspanse etmek için 50 μL Tris Tamponu ekleyin ve iyice karıştırmak için 6 kez pipetleyin.

9) Örneği bir termal döngü cihazına koyun ve mRNA'yı elüe etmek için aşağıdaki programı çalıştırın: 80°C, 2 dk; 25°C, tutun.

10) Örneği termal döngü cihazından çıkarın. 50μL Boncuk Bağlayıcı Tampon ekleyin ve iyice karışması için 6 kez pipetleyin.

11) mRNA'nın manyetik boncuklara bağlanmasını sağlamak için oda sıcaklığında 5 dakika inkübe edin.

12) Tüpü manyetik alana yerleştirin 5 dakika kadar kısık ateşte pişirin ve üstteki sıvıyı dikkatlice alın.

[Not]: Kalan sıvıyı aspire etmek için 10 μL'lik bir pipete ihtiyaç vardır.

13) Tüpü manyetikten çıkarın raf, manyetik boncukları 200 μL Boncuk Yıkama Tamponu ile tekrar süspanse edin, iyice karıştırmak için pipetleyin. Tüpü manyetik raf Oda sıcaklığında 5 dakika bekletin. Tüm üstteki sıvıyı çıkarın ve atın.

14) mRNA son elüsyonu

Şema A: Rezerv transkripsiyon reaksiyonu için

Tüpü çıkarın manyetikten raf. 12μL Nükleaz içermeyen su ekleyin ve iyice karışması için pipetle 6 kez tekrar tekrar karıştırın. Tüpü termal döngü cihazına yerleştirin ve aşağıdaki programı çalıştırın: 80°C, 2 dk. Daha sonra tüpü manyetik alana yerleştirin raf Hemen, oda sıcaklığında 5 dakika bekletin. Çözelti berraklaştıktan sonra, 10 μL süpernatantı dikkatlice başka bir yeni Nükleaz içermeyen PCR tüpüne aspire edin.

Şema B: RNA için kütüphane hazırlığı

12603 Kit, 12308 Kit ile birlikte kullanılır. Lütfen ürüne bakın:

Hieff NGS™ Ultima Çift Modlu mRNA Kütüphane Hazırlık Kiti -12308ES

Kütüphane yapımına yönelik ilgili kit talimatlarına göre uygun hacimde Frag/Primer Tamponu ekleyin.

Not

1. Kendi güvenliğiniz ve sağlığınız için lütfen operasyon sırasında laboratuvar önlüğü ve tek kullanımlık eldiven giyin.
2. Sadece araştırma amaçlıdır.
3. Manyetik boncukları kullanmadan önce oda sıcaklığına geldiğinden ve iyice karıştırdığınızdan emin olun, aksi takdirde numunelerin geri kazanım verimliliği etkilenebilir.
4. Operasyon kesinlikle RNase ve nükleik asit kontaminasyonundan arındırılmış olmalıdır.
5. Bu ürün diğer reaktiflerle birlikte kullanıldığında, çalıştırmak için lütfen özel deneysel talimatları izleyin.
6. İyi bir saflaştırma sonucu elde etmek için toplam RNA bütünlüğünün iyi olması ve RIN değerinin >7.0 olması gerekir.