血管生成与伤口愈合、炎症、类风湿性关节炎、糖尿病视网膜病变、黄斑变性和肿瘤生长密切相关。在生物体的生长过程中,血管生成是新组织生长的重要组成部分。在成年期,除了特殊器官中受到严格调控的周期性事件外,由于促血管生成和抗血管生成的内源性因素之间的平衡,几乎所有的正常组织都缺乏大量的生理性血管生成。当这种平衡在促进血管生成的方向上被破坏时,微血管内皮细胞(EC)将转变为血管生成表型,从而启动血管生成反应,这种反应可以被消除或加速。
研究中,传统的体内血管生成实验方法包括角膜微囊、肠系膜、海绵/基质植入、圆盘分析(DAS)、斑马鱼等。但这些实验不仅技术要求高、成本高、耗时长,还涉及伦理问题。与体内血管生成实验相比,使用特殊基质体外维持细胞血管生成更为经济实用。最常用的细胞生长-维持基质是从EHS小鼠肿瘤中提取的可溶性基底膜制剂-基质凝胶。
基质胶的主要成分是层粘连蛋白、IV型胶原、硫酸肝素蛋白聚糖(HSPG)和巢蛋白,还含有TGF-β、EGF、IGF、FGF、组织型纤溶酶原激活剂等生长因子,以及EHS肿瘤中所含的其他生长因子。它为组织和细胞提供支撑、抗拉强度和支架支持,也可以作为细胞粘附和运动的三维亚结构,以及生长因子、趋化因子和细胞因子的储存器。它还可以作为细胞形态发生和分化的信号。
产品特性
安全性高: 不含 LDEV(乳酸脱氢酶增强病毒)
浓度多功能性: 浓度范围8~20 mg/mL
良好的批次稳定性: 严格的生产和质量控制流程,确保批次间性能稳定
低内毒素: 内毒素含量≤4EU/mL
污染物检测:未检测到支原体、细菌和真菌残留。
血管生成实验
- 基质凝胶制备
1) 实验前一天,取出 Ceturegel商标 将基质凝胶从冰箱中取出,放入 4°C 冰箱中过夜融化,并预冷所用的耗材。
2) 将 Ceturegel商标 实验前始终将基质凝胶放在冰盒中。
3) 打开血管生成载玻片的灭菌包装并取出载玻片。
4) 加入 10 μl Ceturegel商标 将 Matrix Gel 加入到每个孔中,注意在添加 Ceturegel 时枪尖应垂直于内孔顶部商标 基质凝胶,以防止任何基质凝胶流过上孔并留下残留凝胶。
- 凝胶
1) 首先,将载玻片盖上盖子,准备一个 10 厘米的培养皿,在其中放置浸有水的纸巾,形成湿盒。
2) 将载玻片放入培养皿并盖上盖子。
3) 将整个培养皿放入 CO2 孵育器中静置约30分钟,等待凝胶凝结,同时制备细胞悬浮液。
- 细胞扩散
1) 将消化后的细胞制成密度为2×105 细胞/毫升并混匀。
2) 取出含有已凝固成凝胶的血管的血管载玻片。
3) 每孔加入50μl细胞悬液,注意保持枪尖垂直于上孔顶部,不要接触下孔的凝胶。
4) 加入细胞培养基,盖上静置,一段时间后,所有细胞都会下沉并落在基质胶表面。
- 图像采集
根据细胞生长速度定期观察、拍照并保存图像。
- 结果展示
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笔记:血管生成和荧光结果
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