一行动原则
潮霉素B是由吸水链霉菌代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，通过破坏易位和促进80S核糖体的误读来抑制蛋白质合成，从而杀死原核生物和真核细胞。
目前常用此方法来筛选和维持含有潮霉素抗性基因的原核或真核细胞。
2 应用
2.1筛选并维持稳定转染Hph的原核或真核细胞（植物细胞和哺乳动物细胞）的培养+向量潮霉素 乙 抗性基因（hyg或hph）来源于大肠杆菌，编码潮霉素B磷酸转移酶，该酶将潮霉素B转化为生物无活性的磷酸化产物，从而起解毒作用。从这个原理来看，潮霉素B是一种非常有用的选择标记，可以筛选和维持成功转染了潮霉素抗性基因的培养的原核或真核细胞。
2.2由于作用方式的差异，潮霉素B常与遗传霉素G418、博来霉素、杀稻瘟菌素S等联合使用，筛选稳定转染两种不同载体的细胞株。潮霉素 B 的作用方式与 G418（Cat#60220ES）、博来霉素（Cat#60257ES）不同 和杀稻瘟素（Cat#60218ES），因此非常适合在双重选择实验中与其他选择性抗生素联合使用。
2.3 抗病毒药物2.4 作为驱虫药，添加到动物饲料中，饲养动物。
2.5 稳定转染细胞的筛选
筛选稳定转染子时使用的潮霉素B工作浓度随细胞种类、培养基、生长条件、细胞代谢率等不同而不同，建议浓度为50-1000 μg/mL。对于实验体系的初次使用，建议通过建立杀伤曲线，即剂量反应曲线来确定最佳筛选浓度。一般来说，哺乳动物细胞为50-500 μg/mL；细菌/植物细胞为20-200 μg/mL；真菌为200-1000 μg/mL。
3 协议
3.1 储存溶液的制备（50 mg/mL）
称取0.5g潮霉素B，加入10mL 1×PBS（pH 7.4），充分溶解后，用0.22μm滤膜过滤除菌，将除菌溶液分装，-20℃保存。
3.2 常用筛选浓度
筛选稳定菌株时潮霉素B的工作浓度根据细胞种类、培养基、生长条件、细胞代谢速率等不同而不同，建议建立杀伤曲线（剂量反应曲线），首次确定最佳筛选浓度。 一般哺乳动物细胞：50～500μg/mL；细菌/植物细胞：20～200μg/mL；真菌：300～1000μg/mL。
3.3 杀灭曲线的建立
【注】为了筛选稳定细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素的最低浓度，可通过建立杀伤曲线（剂量反应曲线）来实现，至少要安排5个浓度。
1)第1天：将未转化细胞以20-25％的细胞密度铺板于合适的培养板中，培养过夜。【注】对于需要更高密度检测活力的细胞，可以增加接种细胞量。
2）根据细胞类型在合适的范围内设定浓度梯度，哺乳类细胞可设定50、100、250、500、750、1000 μg/mL，用去离子水或PBS缓冲液1:10稀释潮霉素B溶液至5mg/mL，然后按下表稀释至相应工作浓度。
| 最终浓度（μg/mL） | 培养基容量 (mL) | 5mg/mL潮霉素B添加量(mL) |
| 50 | 9.9 | 0.1 |
| 100 | 9.8 | 0.2 |
| 250 | 9.5 | 0.5 |
| 500 | 9.0 | 1.0 |
| 750 | 8.5 | 1.5 |
| 1000 | 8.0 | 2.0 |
3)第2天：更换新鲜配制的相应药物浓度的培养基，每个浓度做3个平行样。
4）每3-4天更换一次含有药物的新鲜培养基。
5）以固定周期（如每2天）进行活细胞计数，确定合适的浓度以防止未转染细胞的生长。选择在理想的天数内（通常为7-10天）杀死大多数细胞的最低浓度作为筛选稳定细胞株的工作浓度。
3.4 稳定转染细胞的筛选
1）转染48h后，用含有适当浓度潮霉素B的筛选培养基（直接或稀释）传代培养细胞。【注意】抗生素对活跃分裂的细胞最有效。如果细胞太密集，抗生素不会杀死细胞。分裂细胞时，细胞融合度不要超过25％。
2）每3-4天更换一次筛选培养基。
3) 筛选7天后测量细胞集落形成情况。集落形成可能还需要一周或更长时间，具体取决于宿主细胞类型、转染和筛选效果。
4)挑取5-10个抗性克隆，转移至35mm细胞培养板中，在含药物筛选培养基中培养7天。
5）更换新鲜且不含药物的培养基进行培养。
4 属性
潮霉素B为白色至黄棕色粉末，有特殊气味，易溶于水、甲醇、乙醇等，易与许多有机酸和无机酸生成盐。
5 产品储存
该溶液直接存放于2~8℃，可保存6个月以上。
6 注意
1)转染hph基因的细胞对潮霉素具有抗性，并且转染细胞稳定或暂时表达该基因。
2)除大肠杆菌外，在其他菌株中也发现了潮霉素B抗性基因（hyg或hph），包括吸水链霉菌和肺炎克雷伯菌。
7 产品推荐
| 产品名称 | 猫＃ | 规格 |
| 潮霉素 B（50 毫克/毫升） | 60224ES03 | 1克（20毫升） |
| 60224ES10 | 10×1克（20毫升） | |
| 潮霉素B | 60225ES03 | 1 克 |
| 60225ES10 | 10克 |
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| 硫酸卡那霉素 | 60206ES10/60 | 10/100克 |
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| 潮霉素 B（50 毫克/毫升） | 60224ES03 | 1克（20毫升）/10×1克（20毫升） |
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