嘌呤霉素 是由白黑链霉菌产生的一种氨基糖苷类抗生素，是氨酰基-tRNA分子3’端的类似物，能与核糖体的A位结合，掺入延长的肽链中，破坏核糖体上肽的易位，导致翻译过程中链过早终止，从而抑制蛋白质的合成。
图1 嘌呤霉素（CAS NO.53-79-2）结构式
pac基因编码嘌呤霉素N-乙酰转移酶（pac），是在产生嘌呤霉素的细菌Streptomyces alboniger中发现的，该基因赋予了嘌呤霉素抗性。这一特性目前被广泛用于筛选携带带pac基因质粒的哺乳动物稳定转染细胞株。嘌呤霉素在稳定细胞株筛选中的广泛应用与慢病毒载体的特性有关，商业化的慢病毒载体中大部分都带有pac基因。在某些特定情况下，嘌呤霉素也可用于筛选转化了携带pac基因质粒的大肠杆菌菌株。嘌呤霉素作用迅速，低浓度下即可迅速导致细胞死亡。贴壁哺乳动物细胞对2-5µg/mL浓度敏感 嘌呤霉素对悬浮细胞具有较高的耐药性，而对0.5-2 µg/mL浓度的嘌呤霉素，悬浮细胞就已经很敏感，一周之内就能产生对嘌呤霉素具有稳定耐药性的哺乳动物细胞。
稳定细胞系筛选
实验原理
通过将外源DNA/shRNA克隆到携带pac基因的载体中，重组载体转染到宿主细胞中并整合到其染色体上，随细胞分裂而稳定传递，最后用嘌呤霉素进行筛选。
准备和预实验
1 建议使用浓度
哺乳动物细胞：1-10 μg/mL，最佳浓度需通过预实验确定。
大肠杆菌：在 LB 琼脂培养基上筛选携带 pac 基因的稳定转化大肠杆菌时，使用浓度 125 μg/mL。大肠杆菌稳定转化子的嘌呤霉素筛选需要精确的 pH 调节。
2 溶解方法
将嘌呤霉素溶解于蒸馏水中，制成50 mg/mL的原液，用0.22 μm滤膜过滤除菌，分装，-20°C保存。
3 嘌呤霉素杀伤曲线测定（以shRNA转染或慢病毒转导为例）
嘌呤霉素的有效筛选浓度与细胞种类、生长状态、细胞密度、细胞代谢、细胞周期位置等有关，确定嘌呤霉素杀死未转染细胞的最低浓度至关重要，首次实验必须进行嘌呤霉素梯度筛选预实验，建立杀伤曲线。
- 接种密度为5~8×104将 24 孔板中的每孔细胞放入培养箱中并培养过夜。
- 制备筛选培养基：含有不同浓度嘌呤霉素（例如0-15μg/mL，至少5个梯度）的新鲜培养基。
- 换上新鲜配制的筛选培养基，继续培养，观察细胞生长情况，每2-3天更换一次新鲜的筛选培养基。
- 每日观察细胞存活情况，4-6天内能有效杀死所有未转染细胞的药物浓度为最低浓度。
稳定转染子的筛选
- 慢病毒感染48-72h（70-80%汇合度）后，将细胞放入含有适当浓度Puromycin的培养基中培养至少48h，当未转染Puromycin对照组细胞全部死亡后，病毒感染组剩余细胞均为阳性细胞。
【注】：①抗生素在细胞处于活跃分裂期时效果最明显，细胞过于密集会显著降低抗生素疗效，细胞密度不宜超过25%。②每天观察细胞生长情况；嘌呤霉素筛选至少需要48h，嘌呤霉素筛选有效浓度通常持续3~10天。病毒的MOI越高，每个细胞含有的shRNA和嘌呤霉素抗性基因拷贝数越多。在进行嘌呤霉素筛选时，MOI越高，细胞含有的pac拷贝数越多，能耐受的嘌呤霉素浓度越高。调整嘌呤霉素浓度来筛选转染细胞，但嘌呤霉素浓度不能低于杀伤曲线的最低有效浓度；
- 加入含最低浓度Puromycin的培养基扩增细胞，qPCR检测结果合格后进行冻存。
| 产品s 姓名 | 猫＃ | 规格 | 外貌 |
| 嘌呤霉素 二盐酸盐 CAS：58-58-2 | 60210ES25 | 25 毫克 | 白色至类白色粉末 |
| 60210ES60 | 100毫克 | ||
| 60210ES72 | 250毫克 | ||
| 60210ES76 | 500 毫克 | ||
| 60210ES80 | 1 克 | ||
| 嘌呤霉素 （溶液 10 毫克/毫升） CAS：58-58-2 | 60209ES10 | 1×1毫升 | 溶液（10 mg/mL于H2中）2（哦） |
| 60209ES50 | 5×1毫升 | ||
| 60209ES60 | 10×1毫升 | ||
| 60209ES76 | 50×1毫升 |
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