1 杀稻瘟素S的作用机理

杀稻瘟素S 是从灰产色链霉菌中提取的一种核苷类抗生素,通过干扰核糖体中肽键的形成,特异性地抑制原核生物和真核生物的蛋白质合成。其作用机制包括阻断释放因子诱导的肽基-tRNA水解,增强tRNA与核糖体大亚基的结合,从而在一定程度上抑制肽键的形成。

杀稻瘟素S作用迅速、强效,极低抗生素浓度即可导致细胞快速死亡。它不仅对细菌和真核生物的蛋白质合成有显著抑制作用,而且对真菌、线虫和肿瘤细胞也有活性。杀稻瘟素S常用于筛选携带bsr或BSD基因的转染细胞。

2 杀稻瘟素S的应用

2.1 细胞培养与筛选

  • 哺乳动物细胞:blast S 常用于筛选携带 bsr 或 BSD 基因的转染细胞。这些抗性基因分别来自蜡状芽孢杆菌和曲霉,能够将 murancidin 转化为无毒衍生物,从而能够选择性杀死不携带抗性基因的细胞,哺乳动物细胞中 Blasticidin S 的工作浓度范围为 1 至 50 μg/mL。

艾尔

埃努斯

組織

培养基

杀稻瘟素S浓度(μg/mL)

海拉

人类

子宫

培养基

3-10

HEK293

人类

培养基

3-10

B16

老鼠

黑色素瘤

远程管理信息系统

3-10

个人电脑1.0

仓鼠

腺癌

远程管理信息系统

10-30

胆固醇

仓鼠

子房

培养基

5-15

  • 细菌选择:在细菌培养中,建议浓度25-100µg/mL,可快速导致不含抗性基因的细胞死亡。

大肠杆菌对杀稻瘟菌素S的敏感性稍低,但转化子对杀稻瘟菌素S有耐受性,可在50-100 μg/mL杀稻瘟菌素S浓度范围内用低盐LB培养基(pH 8)进行筛选,高pH可提高杀稻瘟菌素S活性。

  • 植物细胞:也适用于植物细胞内的基因转移实验,bsr和BSD常作为筛选标记。

2.2 蛋白质合成研究

  • 杀稻瘟素用于在肽键形成水平上研究蛋白质合成过程,特别是在 TLR-2 构建体的 HEK293-T 细胞和 HEK-D5 细胞中。

2.3 抗真菌特性

  • 它还具有一定的抗菌活性,可用于稻瘟病的防治,其杀菌作用主要是影响蛋白质的合成,并能抑制孢子萌发、菌丝发育和孢子形成。

2.4 其他应用

  • 杀稻瘟素也被用来研究其对肿瘤细胞的抑制作用。
  • 它还可作为含有抗性基因 bls、bsr 或 BSD 的转化细胞的选择剂。

3 与杀稻瘟菌素S相关的实验步骤(哺乳动物稳定转染子的筛选)

1) 杀稻瘟素 S 的常用浓度为 10 μg/mL。用携带 bsr 或 BSD 基因的质粒转染细胞,并在含有杀稻瘟素 S 的正常生长培养基中培养,以筛选出稳定的转染子。

2) 转染48小时后,用含有适当浓度Blasticidin S的新鲜培养基传代细胞(注意:抗生素在细胞处于活跃分裂期时效果最佳,细胞密度过高时抗生素效果会降低,分裂细胞时汇合度不要超过25%)。

3) 每3-4天,除去用过的培养基并添加含有抗生素的新鲜培养基。

4) 7天后,检查细胞集落的形成。根据宿主细胞类型和转染/选择效率,集落形成可能还需要一周或更长时间。

5) 将5-10个抗性克隆转移至35mm细胞培养皿中,在选择性培养基中培养7天。随后进行细胞毒性试验进行测试。

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Yeasen 生物科技 杀稻瘟素 S (60218ES) 有两种形式:粉末(1克)和溶液(10毫克/毫升)。

产品名称

猫#

规格

外貌

杀稻瘟素S

CAS:3513-03-9

60218ES10

10 毫克

溶液(10 mg/mL,于HEPES中) 缓冲液,pH 7.5)

60218ES50

5×10 毫克

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10×10 毫克

60218ES80

1 克

粉末(使用时用无菌水或缓冲液配制成5-10 mg/mL的原液)

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[1] Mo J, Tan K, Dong Y, Lu W, Liu F, Mei Y, Huang H, Zhao K, Lv Z, Ye Y, Tang Y. 通过抑制 FACT 复合物靶向尤文氏肉瘤中的致癌驱动因子 EWSR1::FLI1 的治疗方法。Oncogene。2023 年 1 月;42(1):11-25。doi: 10.1038/s41388-022-02533-1。电子版 2022 年 11 月 10 日。PMID:36357572。 (如果:8.0

[2] Tan K, Mo J, Li M, Dong Y, Han Y, Sun X, Ma Y, Zhu K, Wu W, Lu L, Liu J, Zhao K, Zhang L, Tang Y, Lv Z. SMAD9-MYCN 正反馈回路代表 MYCN 扩增神经母细胞瘤的独特依赖性。J Exp Clin Cancer Res。2022 年 12 月 20 日;41(1):352。doi:10.1186/s13046-022-02563-3。PMID:36539767;PMCID:PMC9764568。(如果:11.3

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1×1 /5×1 /10×1 /50×1毫升

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