1. 如何防止RNA降解？

2. 什么是RNase抑制剂？

3. RNase抑制剂有什么作用？

4. 鼠 RNase 抑制剂有哪些特点？

5. 相关产品及业绩

6. 相关产品

7. 常见问题

1. 如何防止RNA降解？

RNase在核酸代谢中起着重要作用，几乎存在于任何类型的原核生物和真核生物中。泪液、唾液、汗液等体液中分泌RNase以防御微生物的入侵，皮肤碎屑中也存在RNase。但大多数环境中RNase的主要来源是微生物，即细菌和真菌。 RNase极难失活，稳定性高，耐热、耐酸、耐碱，热变性后能很快恢复原有结构。RNase通常活性很高，广泛分布于真核和原核细胞及组织中。样本中只要有微量的RNase污染，RNA就可完全降解。实验中RNase污染可来自内源和外源，细胞内RNase主要是内源性污染，外源性污染包括实验用品、实验室环境、实验者本身等。 RNase，尤其是 RNase A 家族的成员，是小而紧凑的蛋白质，含有少量半胱氨酸残基，能够形成许多分子内二硫键。在没有变性剂的情况下，恢复到室温后，变性的 RNase 将恢复其天然结构和一些功能。因此，RNase 在反复冻融循环后仍能保持相当大的活​​性，即使在高压灭菌后也是如此。这些酶的稳定性使它们能够抵抗许多净化方法，这些净化方法通常需要采用激进的化学方法来消除表面和溶液中的 RNase。

为了避免脆弱的RNA降解，操作RNA时必须采取特别的预防措施。为控制外源性RNase，操作者需要在实验过程中戴手套，在接触皮肤、门把手和普通物体表面后更换手套。并且操作者需要使用专门用于RNA操作的移液枪，使用不含RNase的壁吸头、离心管、化合物和试剂。远离或遮盖通风孔和开窗，将人迹罕至的区域作为无RNase区域。并且在RNA提取和分析期间，请勿进行其他可能导致RNase污染的实验。
抑制内源性RNase活性的方法首先是样本的保存，组织取样后不要直接提取RNA，而应及时用液氮快速冻存于-80℃环境中，并尽快进行实验，以最大程度减少RNA的降解。在细胞裂解液中添加RNase抑制剂，同时破碎细胞并灭活RNase，最大限度地降低细胞破碎过程中释放的RNase活性。 所有试剂和设备在使用前都必须经过特殊处理以灭活 RNases。

此外，可以使用RNA抑制剂来抑制RNase活性，防止RNase降解RNA。 RNA 抑制剂有以下几种类型：

• 焦碳酸二乙酯（DEPC）：是一种强但不完全的RNase抑制剂，通过与RNase活性基因组中的组氨酸的咪唑环结合，使蛋白质变性，从而抑制酶的活性。
• 异硫氰酸胍：目前被认为是最有效的RNase抑制剂，它在裂解组织的同时，还能使RNase失活，能破坏细胞结构，使核酸与核蛋白解离，同时对RNase也有一定的变性作用。
• 钒核糖核苷复合物：钒氧离子与核苷形成的复合物，能与RNase结合形成过渡类似物，几乎完全抑制RNase的活性。
• RNase蛋白抑制剂（RNasin）：RNasin是从大鼠肝脏或人胚盘中提取的一种酸性糖蛋白，是一种非竞争性的RNase抑制剂，能与多种RNase结合，使其失活。
• 其他：SDS、尿素、硅藻土等对RNase也有一定的抑制作用。

2. 什么是RNase抑制剂？

RNase抑制剂是一类能够抑制RNase活性的物质。常见的RNase抑制剂有DEPC、异硫氰酸胍、核糖核苷钒基复合物（RVC）、RNase的蛋白抑制剂（RNasin）。其中DEPC和异硫氰酸胍具有一定的毒性，RVC对PCR聚合酶有抑制作用，不利于后续实验。RNasin无毒性，是RNase的非竞争性抑制剂，可以与多种RNase结合，使RNase失活。

3. RNase抑制剂有什么作用？

RNase抑制剂通常用作RNA酶促操作中的预防措施，以抑制和控制此类污染物。RNasin是一种从大鼠肝脏或人胚盘中提取的酸性糖蛋白，它可以以非共价方式特异性地与RNase结合形成复合物，导致RNase失活，从而保护RNA的完整性。目前，RNase抑制剂有助于防止RNA在cDNA合成、RT-PCR、体外转录/翻译反应或RNA纯化等应用中降解。

4. 鼠 RNase 抑制剂有哪些特点？

重组鼠源RNase抑制剂不含人源RNase抑制剂中含有的2个氧化敏感的半胱氨酸。因此，鼠源RNase抑制剂具有较高的抗氧化活性，并且在低DTT实验中更稳定。此外，鼠源RNase抑制剂 Yeasen 具有以下特点：
1）全方位RNase抑制：鼠RNase抑制剂 Yeasen 特异性抑制RNase A、RNase B、RNase C等。
2）反应条件多样：RNase抑制剂在pH 5.0-9.0、25℃-55℃下有活性，适用于耐热逆转录酶。
3) 可进行多个下游实验：当 RNase 抑制剂与 Taq DNA 聚合酶、AMV 或 M-MuLV 逆转录酶或噬菌体 RNA 聚合酶（SP6、T7 或 T3）一起使用时，未观察到聚合酶活性的抑制。
4）量产商品：单笔制造能力20亿U，保证产品同质化、供应稳定性、时效性，有利于成本管理。
5）批次间一致性：成熟的蛋白表达及纯化平台，通过ISO13485质量管理体系，按质量要求进行质控检测，保证产品批次间稳定性。

5. 相关产品及业绩

A. RNase抑制剂阻断RNase活性

1μg HEK细胞总RNA，1μL RNase抑制剂可有效抑制5ng RNase。

图1. 鼠RNase抑制剂的抑制效果。

B. RNase Inhibitor在qPCR检测中超越国外产品

抑制作用 Yeasen 在相同的实验环境下，采用 qPCR 技术测定了 R* Company 小鼠来源的 RNase 抑制剂 (MRI) 的含量，其中 RNase 抑制剂 Yeasen 鼠源有效抑制了系统中的RNase A。抑制效果优于竞争对手。

图 2. R* MRI RNase 抑制试验

注：图中曲线从左到右分别为：阳性对照（仅RNA，无RNase和MRI）、40 U MRI、30 U MRI、20 U MRI、10 U MRI、和阴性对照（RNA+RNase，无MRI）。

图 3. Yeasen MRI RNase 抑制试验

注：图中曲线从左到右分别为：阳性对照（仅RNA，无RNase和MRI）、80 U MRI、60 U MRI、40 U MRI、30 U MRI、20 U MRI、10 U MRI、阴性对照（RNA+RNase，无MRI）。

图 4. RT-qPCR 结果的 CT Yeasen MRI 和 R* MRI

6. 相关产品

相关产品 Yeasen 可以提供如表1所示：

表 1.产品列表

7. 常见问题

Q1：Murine RNase抑制剂里会有RNase吗？
答：每个试剂都会检测RNase活性，确保Murine RNase抑制剂不会带来RNase污染。
Q2：鼠RNase抑制剂会对下游PCR实验产生影响吗？
答：不会有影响。每一批Murine RNase抑制剂经过质量检测，没有基因组污染，可以用于RT-PCR和RT-qPCR研究。
Q3：Murine RNase抑制剂会失活吗？
答：抑制剂在65°C以上会失活，剧烈搅拌也会导致失活。
Q4: 使用Murine RNase抑制剂配制反应体系时应注意事项是什么？
答：在制备体系时，可以先加入RNase抑制剂，然后再加入其他可能引入RNase污染源的组分。
Q5：鼠 RNase 抑制剂是否具有内切酶和外切酶活性？
答：不具有内切酶和外切酶活性，有助于提高产品产量。

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