Yeasen的逆转录酶原料促进高质量 cDNA 合成

逆转录酶又称RNA依赖性DNA聚合酶,是一种将单链RNA转录为DNA的DNA聚合酶。逆转录酶的性能将直接影响分子诊断试剂的最终性能。针对分子诊断试剂厂家的痛点, Yeasen 对逆转录酶进行了定向改造,逆转录酶性能优异,深受客户好评!

1. 逆转录酶的作用是什么?
2.如何选择逆转录酶?
3. 为什么选择 Yeasen的逆转录酶?
4. 相关产品及业绩
5. 相关产品

1. 逆转录酶的作用是什么?

逆转录酶是一种依赖RNA的DNA聚合酶。它可以转录模板RNA并形成互补DNA(cDNA)。单链cDNA通过DNA聚合酶转化为双链DNA。因此,逆转录酶通常与聚合酶链式反应技术(称为RT-PCR)结合使用,以量化mRNA合成水平。定量RT-PCR检测通常用于疾病诊断。因此,逆转录酶在科学研究和实际应用中发挥着重要作用。

2.如何选择逆转录酶?

常见的逆转录酶有M-MLV和AMV,其中M-MLV优于AMV。但传统的RT酶有两个活性位点,一个执行聚合酶活性,另一个执行核糖核酸酶H活性。RNase H是一种能够降解DNA-RNA杂交体家族的RNA部分的核酸内切酶。因此,缺乏RNase H活性的逆转录酶有利于cDNA合成。此外,使用耐热版本的RT有利于降低非特异性核酸扩增并最大限度地减少复杂二级结构的影响。

3. 为什么选择 Yeasen的逆转录酶?

Yeasen 对逆转录酶进行了定向改造,去除RNase H活性,从而提高了cDNA合成的能力。利用蛋白质进化技术,提高逆转录的热稳定性。

Yeasen的逆转录酶不仅合成能力强,耐受能力也强。另外, Yeasen 对品质要求严格,是逆转录酶的最佳选择。

4. 相关产品及业绩

4.1 耐65°C高温

以500ng 293T细胞总RNA为模板,采用Hifair™ Ⅲ逆转录酶于42℃-65℃进行逆转录,取1μL cDNA为模板,扩增TFRC基因(4.4kb)。

Figure 1. Perform reverse transcription at 42°C-65℃

图1. 在42°C-65℃条件下进行逆转录

4.2 兼容复杂模板

反应温度55℃可以满足常规模板和二级结构模板的逆转录,高GC模板的反应温度可以适当提高到65℃。

Figure 2. Suitable for GC-rich templates and secondary structure templates

图 2.适用于富含GC的模板和二级结构模板

4.3 优异的扩展性能

以500ng 293T细胞总RNA为模板,以Oligo(dT)为引物,使用Hifair™ Ⅲ逆转录酶进行cDNA合成。取1μL cDNA为模板,扩增DY1C1N1基因5'500bp(19.9kb),结果显示Hifair™ Ⅲ逆转录酶可以合成最长19.8kb的cDNA。

Figure 3. Up to 19.8kb cDNA can be synthesized

图 3. 可合成长达19.8kb的cDNA

4.4 快速合成

以293T细胞RNA为模板,按照说明书标准流程进行逆转录,分别按照5、10、15、30、45、60分钟设定逆转录时间,Hifair™ III逆转录酶可在5分钟内合成6kb cDNA,且特异性和产量均优于V品牌。

Figure 4. 6kb cDNA can be synthesized within 5 minutes

图4. 5分钟内即可合成6kb cDNA

4.5 线性范围宽

以293T细胞5pg-5μg总RNA为模板,采用Hifair™ III逆转录酶进行cDNA合成,以1μL cDNA为模板,对4个基因进行qPCR检测,结果显示扩增效率均在98%~100.10%之间,说明在较宽的模板线性范围内均能高效合成cDNA。

Figure 5. cDNA can be synthesized efficiently in a wide template range

图 5. 可在广泛的模板范围内高效合成 cDNA

4.6 严格的质量控制

确保性能稳定 Yeasen的逆转录酶, Yeasen 生产过程中严格执行要求,稳定生产工艺,确保批次稳定性。同时加强质量检测,检测包括外切酶、切口酶、RNase等残留物,确保 确保没有残留,以免影响下游实验。

Figure 6.Residue detection

图6.残留物检测

5. 相关产品

提供的产品 Yeasen 如下。

表 1. 相关产品

产品定位 产品名称 库存单位
逆转录酶 Hifair™ Ⅲ逆转录酶 (200 单位/微升) (适用于 RT-LAMP 和快速 RT)查询 11111ES
希菲尔™ V 逆转录酶 (200 U/μL) (用于 RT-qPCR 11300ES
Hifair™ IV 逆转录酶(200 U/μl) (为了 NGS使用) 11112ES
希菲尔™ V 逆转录酶 11301ES
小鼠 RNase 抑制剂 小鼠 RNase 抑制剂 (40 U/µL) 10603ES
小鼠 RNase 抑制剂(200 U/µL,不含甘油) 10703ES
热启动 Taq DNA 聚合酶 希夫 Unicon™ Hotstart Direct Taq DNA聚合酶,50 U/μL (查询 10718ES
希夫 UNICON™ Hotstart E-Taq DNA 聚合酶,5 U/μL 10726ES

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