操作环境中的气溶胶污染是造成PCR结果假阳性的最常见原因:美国科学家林达尔在大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中开创性地发现尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG),并通过使用带有dUTP的UDG酶建立了PCR污染预防系统。

目前商业化的UDG酶主要分为两类:来源于大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的常规UDG酶和来源于嗜冷海洋细菌的耐热性UDG酶。常规UDG酶的耐热性较强,在95℃处理10分钟后仍会保留少量的尿嘧啶-DNA糖基化酶活性,这会导致含有dU的目标扩增产物发生降解。另外,由于分子酶的重组表达采用工程菌(如大肠杆菌),酶中会残留一定量的宿主基因组DNA。再加上生产环境和人为因素的影响,分子酶产品极易受到DNA污染。在病原体检测过程中,污染DNA可能会掩盖低丰度的目标核酸或与低丰度的目标核酸一起被检测到,从而影响结果的解释。

Yeasen UCF.ME 尿嘧啶 DNA 糖基化酶 (UDG/UNG),不耐热

描述

UCF.ME 尿嘧啶 DNA 糖基化酶 (UDG/UNG),热不稳定,1 U/μL(Cat#14466ES) 该产品是一种源自嗜冷海洋细菌的超低残留热不稳定性UDG酶,即UCF.ME。使用该产品可以避免常规UDG酶在失活后残留活性在室温下降解含dU的扩增产物,也可以避免分子酶中存在的背景细菌导致PCR结果出现假阳性。因此,引入UCF.ME®超低残留热不稳定性UDG酶对于准确鉴定感染性病原体,辅助临床诊断感染及传染病具有重要意义。

产品优势

  • UCF.ME超低残留—大肠杆菌基因组DNA残留<0.1拷贝/U;
  • 低核酸酶残留——无残留的外切酶、切口酶或 RNase;
  • 酶切能力强——0.05 U/T可消化105拷贝/T dU-DNA产物;
  • 热不稳定性好——50℃ 10分钟、55℃ 5分钟、95℃ 5分钟任意条件下均能完全失活;
  • 兼容RT-qPCR反应体系——即使在高输入水平(2U/20μL反应体系)下也不会对检测系统产生影响。

(1)蛋白质纯度≥95%

数字 1. 蛋白质纯度(SDS-PAGE)检测结果

(2)低残留核酸酶:无残留外切酶、切口酶或核糖核酸酶

数字 2. 核酸酶残留检测结果

(3)大肠杆菌基因组DNA残留< 0.1拷贝/ U,残留水平明显低于常规试剂

数字 3. 大肠杆菌基因组DNA残留检测结果

(4)消化能力强:0.05 U/T就足以消化10^5拷贝/T的dU-DNA产物。

数字 4. 总计0.05 U的UDG酶可完全消化10^5拷贝/T的dU-DNA产物。

(5)消化能力强:0.05 U/T就足以消化10^5拷贝/T的dU-DNA产物。

    图 5. 经50℃,10min;55℃,5min;55℃,10min;95℃,5min热失活处理,14466ES丧失消化能力。

    (6)兼容RT-qPCR反应体系,高输入水平(2U/T)下也不对检测体系产生影响。

    图6. 使用ORF1ab和N基因的两个引物探针与14466ES制备RT-qPCR混合液,当14466ES以2U/20μL的量注入反应体系时,对RT-qPCR无抑制作用 反应。

    产品推荐—超低残留PCR酶原料系列

    产品定位

    产品名称

    预防热不稳定 UDG 污染

    UCF.ME 尿嘧啶 DNA 糖基化酶 (UDG/UNG),热不稳定,1 U/μL

    14466ES

    热启动 Taq DNA 聚合酶

    Hieff UCF.ME 热启动敏感 Taq DNA 聚合酶 (5 U/μL)

    14314ES

    逆转录酶

    Hifair UCF.ME V 逆转录酶 (200 U/μL)

    14608ES

    小鼠 RNase 抑制剂

    UCF.ME 鼠 RNase 抑制剂(40 U/μL)

    14672ES

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