您还在为多片段或超长片段同源重组效率低、菌落数量少而烦恼吗?

还是因载体或片段较珍贵,产量较低,为了节省原料,采用小体系低浓度连接,但为连接效率低而苦恼?

Yeasen 产品: 显著提高,低浓度、小体系及超长片段的连接效率,高阳性克隆率,帮您轻松完成 结扎

一步法克隆与传统酶切克隆方法的比较

方法

插入片段准备

限制位点的限制

通用属性

连接时间

阳性率

一步快速重组克隆技术

步骤 1 净化

没有任何

★★★★★

最快时间为 5 分钟

高达 95%

限制性消化和连接克隆技术

第 2 步净化

是的

★★

过夜

不同基因差异很大

产品优势

方向: 1-7 DNA片段的一步克隆。

简单:一个管内可以连接多个片段。

快速:最快连接只需5分钟。

效率高:阳性克隆率高。

系统小:整个连接系统可低至 6 μL。

超长:连接长度超过 25 kb(载体+片段长度)。

表现 展示

  • 单片段高效重组6μL小系统

图 1 10 ng 低输入单片段 被结扎 6 μL小系统非复苏受体细胞状态。结果显示10923ES性能优于竞争产品,连接效率高,菌落数多,阳性率达100%。AB:重组转化板,载体(10kb)与插入片段(1kb)摩尔比为1:2。C:插入片段PCR鉴定。M: Yeasen 10505ES。载体体积:40ng/6μL反应体系,反应条件:50℃,15min。

  • 多片段高效重组

图 2 六个片段(7.6 kb)已连接。 结果显示10923ES性能优于竞争产品,菌落数较多,阳性率达100%。AB:重组转化板,载体(11.6kb)与插入片段(7.6kb)摩尔比为1:2。C:插入片段PCR鉴定。M: Yeasen 10505ES,PCR长度2.6kb。载体体积:200ng/20μL反应体系,反应条件:50℃,50min。

  • 低浓度多片段高效重组

图 3 分别连接低浓度的五个和六个片段。 结果显示,10923ES在低浓度下连接稳定,菌落计数较高,阳性率达100%。AB:重组转化板。CD:插入片段PCR鉴定电泳图,M: Yeasen 10505ES,PCR长度2.6kb。

  • 试剂稳定性

图 4 37℃放置7天后结果显示,10923ES在低浓度下仍能稳定连接5个和6个片段。 AF:重组转化板。GH:插入片段PCR鉴定电泳图,M: Yeasen 10505ES,PCR长度2.6kb。

客户案例

  • 高效重组小型系统

图 5 10923ES 连接到 10 μL小反应体系,阳性率100%。A:重组转化板。B:插入片段PCR鉴定。载体大小:5,631bp;目的片段大小:1,384bp。

图 6 10 μL小系统单片段连接及点突变克隆,阳性率100%。 A、C:重组转化板。B:插入片段PCR鉴定,1-5泳道分别为菌落1、菌落2、阴性对照、阳性对照(基因组为模板)、阳性对照(PCR纯化片段为模板)。D:插入片段PCR鉴定电泳图。

  • 低浓度短片段高效重组

图 7 10923ES 连接 低浓度碎片。与竞品相比,菌落数较高,阳性率(10/11)>90.9%。AB:重组转化板。C:插入片段PCR鉴定。载体大小:3,000bp;目的片段大小:441bp。

  • 高效快速的多段连接

如图。8 10923ES四片段连接,高GC、短片段组合连接,相较于S品牌,10923ES菌落计数较高,阳性率达100%。D:重组转化片。E:插入片段测序鉴定图谱。F:Sanger测序证实载体与片段连接成功,连接位点测序正确。

实力明星产品推荐

10923ES 下单渠道

产品定位

英文

货号

年代规格

一步连接1 – 7个片段,最快5分钟完成重组反应

希夫克隆商标 通用 II 一步法克隆试剂盒

10923ES20/50

20吨/50吨

R兴高采烈 产品

产品定位

英文

货号

年代规格

高保真 PCR

2× 希夫·卡纳斯商标 AdvanceFast PCR 预混液(含染料)

10164ES03/08

1毫升/5×1毫升

PCR快速升级,可进行菌落PCR,适合复杂模板扩增

2×希夫商标 超快速 II 热启动 PCR 预混液

10167ES03/08

1毫升/5×1毫升

询问