您还在为多片段或超长片段同源重组效率低、菌落数量少而烦恼吗?
还是因载体或片段较珍贵,产量较低,为了节省原料,采用小体系低浓度连接,但为连接效率低而苦恼?
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一步法克隆与传统酶切克隆方法的比较
方法 | 插入片段准备 | 限制位点的限制 | 通用属性 | 连接时间 | 阳性率 |
一步快速重组克隆技术 | 步骤 1 净化 | 没有任何 | ★★★★★ | 最快时间为 5 分钟 | 高达 95% |
限制性消化和连接克隆技术 | 第 2 步净化 | 是的 | ★★ | 过夜 | 不同基因差异很大 |
产品优势
方向: 1-7 DNA片段的一步克隆。
简单:一个管内可以连接多个片段。
快速:最快连接只需5分钟。
效率高:阳性克隆率高。
系统小:整个连接系统可低至 6 μL。
超长:连接长度超过 25 kb(载体+片段长度)。
表现 展示
- 单片段高效重组6μL小系统
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图 1 10 ng 低输入单片段 被结扎 6 μL小系统非复苏受体细胞状态。结果显示10923ES性能优于竞争产品,连接效率高,菌落数多,阳性率达100%。AB:重组转化板,载体(10kb)与插入片段(1kb)摩尔比为1:2。C:插入片段PCR鉴定。M:
- 多片段高效重组
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图 2 六个片段(7.6 kb)已连接。 结果显示10923ES性能优于竞争产品,菌落数较多,阳性率达100%。AB:重组转化板,载体(11.6kb)与插入片段(7.6kb)摩尔比为1:2。C:插入片段PCR鉴定。M:
- 低浓度多片段高效重组
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图 3 分别连接低浓度的五个和六个片段。 结果显示,10923ES在低浓度下连接稳定,菌落计数较高,阳性率达100%。AB:重组转化板。CD:插入片段PCR鉴定电泳图,M:
- 试剂稳定性
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图 4 37℃放置7天后结果显示,10923ES在低浓度下仍能稳定连接5个和6个片段。 AF:重组转化板。GH:插入片段PCR鉴定电泳图,M:
客户案例
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高效重组小型系统
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图 5 10923ES 连接到 10 μL小反应体系,阳性率100%。A:重组转化板。B:插入片段PCR鉴定。载体大小:5,631bp;目的片段大小:1,384bp。
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图 6 10 μL小系统单片段连接及点突变克隆,阳性率100%。 A、C:重组转化板。B:插入片段PCR鉴定,1-5泳道分别为菌落1、菌落2、阴性对照、阳性对照(基因组为模板)、阳性对照(PCR纯化片段为模板)。D:插入片段PCR鉴定电泳图。
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低浓度短片段高效重组
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图 7 10923ES 连接 低浓度碎片。与竞品相比,菌落数较高,阳性率(10/11)>90.9%。AB:重组转化板。C:插入片段PCR鉴定。载体大小:3,000bp;目的片段大小:441bp。
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高效快速的多段连接
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如图。8 10923ES四片段连接,高GC、短片段组合连接,相较于S品牌,10923ES菌落计数较高,阳性率达100%。D:重组转化片。E:插入片段测序鉴定图谱。F:Sanger测序证实载体与片段连接成功,连接位点测序正确。
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