希夫·卡纳斯^商标 尿嘧啶+高保真DNA聚合酶，是新一代 高保真DNA 基于 Pfu DNA 聚合酶的聚合酶。Hieff Canace^商标 Uracil+高保真DNA聚合酶可实现复杂模板的快速、准确的PCR反应，保真度显著提高，完全避免了使用含dUTP的引物/模板/dNTPs导致的扩增失败。产品配有优化的酶缓冲液，并添加PCR增强组分，使酶高效、模板适应性广，适合复杂模板的扩增。

产品组件

运输和储存

组件随冰袋一起运输，可以在-20°C 下保存 1 年。

产品应用

使用含有 dUTP 的引物/模板/dNTP 进行高保真文库扩增。

注意事项

1、为了您的安全和健康，操作时请穿着工作服，佩戴一次性手套。

2.仅供研究使用！

指示

希夫·卡纳斯^商标 Uracil+高保真DNA聚合酶的使用方法与传统高保真酶略有不同，使用前请仔细阅读说明书。

1. 推荐反应体系

所有操作均应在冰上进行。2×Canace^商标 Uracil+ PCR buffer 解冻后需充分混匀，系统配置前请预热PCR仪，加入各组分后用移液器充分混匀样本并离心至管底，再放入预热好的PCR仪中进行扩增，使用后请将所有组分放回-20℃保存。

表1 PCR扩增反应

[笔记]：

1）试剂：使用前请充分解冻各组分；

2)模板：使用纯化的高质量DNA模板可以显著提高扩增的效率和成功率；

3）dNTPs：建议dNTPs终浓度为200 μM，试剂盒提供的dNTPs不含dUTP，如特殊情况需要制备含dUTP的模板，可额外添加dUTP至终浓度为400 μM。

4）聚合酶浓度：建议1 U/50 μL，可在0.5-2 U/50 μL之间优化，请勿超过2 U/50 μL。为防止聚合酶因3'→5'外切酶活性而降解引物，建议在反应体系最后一步加入聚合酶。

5)Mg2+终浓度：体系终浓度为2mM，如有特殊需要请要求我公司提供低Mg2+浓度或不含Mg2+的缓冲液。

2. 推荐的反应程序

表2 PCR扩增反应步骤

[笔记]：

1）起始变性温度及时间：建议98℃，质粒DNA等简单模板建议变性时间为30秒，文库建议变性时间为1分钟，cDNA、基因组DNA等复杂模板建议变性时间为3分钟，高GC含量模板建议变性时间为5-10分钟。

2）退火温度及时间：建议60℃，或根据需要设置温度梯度，找到引物退火的最佳温度。退火时间建议20秒，可在10-30秒内调整。退火时间过长可能导致扩增产物在胶上分散。

3）延伸温度及时间：建议72℃，延伸时间根据实际需要调整。