描述
产品描述
2×希夫·卡纳斯™ Plus PCR Master Mix(含染料)是即用型 2× 预混合溶液,含有 Hieff Canace™ Plus 高保真 DNA 聚合酶、dNTP 和优化的缓冲系统。混合物包括两种单克隆抗体,可在室温下抑制聚合酶活性和 3'→5' 核酸外切酶活性,从而实现高度特异性的热启动 PCR。延长因子的添加允许长片段扩增,目标片段长达 13 kb。该酶表现出 5'→3' DNA 聚合酶活性和 3'→5' 核酸外切酶活性,保真度是 Taq DNA 聚合酶的 83 倍,是普通 Pfu DNA 聚合酶的 9 倍。它适用于扩增复杂模板,产生平端 PCR 产物。
2×希夫·卡纳斯™ Plus PCR Master Mix (With Dye) 具有操作简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点。反应体系只需添加引物和模板,采用两步PCR方案,简化操作,节省时间。产品含有电泳示踪染料,可直接上样PCR产物进行凝胶分析。此外,产品含有特殊保护剂,即使经过反复冻融循环,也能保证活性稳定。
规格
分类No。 | 10154ES01 / 10154ES03 / 10154ES08 / 10154ES60 |
尺寸 | 100 μL / 1 毫升 / 5×1 毫升 / 100×1 毫升 |
贮存
本品应储存于-25~-15℃ 1 年。
指示
1. 推荐的PCR反应体系。
成分 | 体积(微升) | 最终的 专注 |
2× 希夫·卡纳斯™ 加 PCR 预混液(含染料)* | 二十五 | 1× |
模板*** | 十 | - |
向前 磷里默(10 微摩尔/升)** | 2 | 0.4微摩尔/升 |
R永恒 磷里默(10 微摩尔/升)** | 2 | 0.4微摩尔/升 |
氢键2哦 | 最多 50 | - |
*1× 终浓度混合物含有 1 U/50 μL 聚合酶、2 mmol/L Mg2+和 200 μmol/L dNTP。
**PCR反应中引物终浓度建议为0.2-1 μmol/L,优选0.4 μmol/L。
***25 μL反应体系的推荐模板量:
模板类型 | 片段大小(1 kb-10 kb) |
基因组 DNA | 50 纳克至 200 纳克 |
质粒或病毒DNA | 10 皮克至 20 纳克 |
基因 | 1-2.5 μL(不超过PCR总体积的1/10) |
2. 反应程序。
1)两步协议(首选):
循环 步 | 电视雇员。 | 时间 | 周期 |
初始变性 | 98℃ | 3 分钟 | 1 |
变性 | 98℃ | 10 秒 | 30-35 |
扩大 | 68℃ | 三十 秒/千字节 | |
F伊纳尔 埃扩展 | 72℃ | 5 分钟 | 1 |
2)三步方案(常规):
循环 步 | 电视雇员。 | 时间 | 周期 |
初始变性* | 98℃ | 3 分钟 | 1 |
变性 | 98℃ | 10 秒 | 30-35 |
退火** | 60℃ | 20 秒 | |
扩大*** | 72℃ | 30 秒/kb | |
F伊纳尔 埃扩展 | 72℃ | 5 分钟 | 1 |
*初始变性:建议在 98°C 下持续 3 分钟(高 GC 模板为 5-10 分钟)。
**退火:建议在 60°C 下进行 20 秒(可在 10-30 秒之间调整)。长时间退火可能会导致凝胶变脏。
***延伸:建议在 72°C 下以 30 秒/kb 进行(对于复杂模板,最高可达 60 秒/kb)。
3)梯度退火协议(推荐用于困难目标):
循环 步 | 电视雇员。 | 时间 | 周期 |
初始变性 | 98℃ | 3 分钟 | 1 |
变性 | 98℃ | 10 秒 | 15(每次循环降低 1°C) |
梯度退火 | 70-55℃ | 20 秒 | |
扩大 | 72℃ | 30 秒/kb | |
变性 | 98°C | 10 秒 | 20 |
退火 | 55 摄氏度 | 20 秒 | |
扩大 | 72°C | 30 秒/kb | |
F伊纳尔 埃扩展 | 72℃ | 5 分钟 | 1 |
4)不同PCR方案的特点:
协议类型 | 速度 | 特异性 | PCR 产量 | 检测率 |
两步 | 最快的 | 高的 | 中等的 | 高的 |
三步 | 中等的 | 中等的 | 最高 | 中等的 |
梯度退火 | 慢的 | 高的 | 中等的 | 高的 |
笔记
1.本产品仅供研究使用。
2. 请穿戴工作服和一次性手套进行操作,为了您的安全。
付款和安全
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