描述
植物组织直接PCR试剂盒是一种可对不同类型植物叶片进行PCR扩增的试剂盒,适应性广,稳定性强。该试剂盒采用独特的裂解缓冲液体系,可快速裂解多种植物样本并释放基因组DNA。释放出的基因组DNA可直接作为模板,无需去除PCR反应中的蛋白质、RNA或次生代谢产物。另外,该试剂盒所需样本量小,小至1mm的植物叶片即可用于实验。
本试剂盒提供的2×Plant Master Mix具有很强的扩增兼容性,可以直接利用样本的裂解液作为模板进行高效、特异的扩增。该试剂为2倍浓缩的PCR反应混合物,含有除模板和引物外PCR扩增所用到的所有成分,大大简化了操作流程,减少了污染的机会。
该试剂盒可用于转基因植物的鉴定、植物基因分型等。
船运
产品随附冰袋运输。
贮存
1. 试剂10187-A[Buffer P1]可在4℃保存1年。
2、试剂10187-B[Buffer P2],用于中和裂解物,有利于样本更长时间的保存,4℃下可保存1年。
3. 试剂10187-C [2×Plant Master Mix] 可在-20℃保存一年,避免反复冻融。
注意事项
1. 做叶片实验时,建议使用新鲜采集的叶片组织,如果是长期冻存的组织,需要-80℃保存,尽量避免反复冻融,避免模板降解,影响PCR效率。叶片组织以幼嫩叶片为宜,如果是成熟叶片,避免使用叶片主脉的组织。
2.建议扩增片段长度在1kb以内,以获得最佳扩增效率。
3. 取样时,用打孔器或小刀取合适大小的样品。当样品不同时,每次处理样品前需将打孔器或小刀清洗干净。
4. 对于叶片组织,建议取1-10mm叶片,叶片长度过小会导致PCR扩增产量低,过多会抑制PCR反应,采用热裂解、用移液器枪头捣碎、用研磨机粉碎的方法处理植物叶片。处理后需震荡离心,务必取上清液进行检测,沉淀会严重抑制PCR反应。
5、为了您的安全和健康,操作时请穿着工作服,佩戴一次性手套。
6.本产品仅供研究使用!
常见问题 | 可能的原因 | 解决方案 |
阳性对照及待测样品均未出现条带。 | PCR反应体系或反应条件不合适。 | 利用梯度PCR探索PCR的最佳反应条件。 |
PCR 试剂储存不当会导致其失活。 | 2×PCR Mix 应保存于-20℃,使用时避免反复冻融。若频繁使用,可短暂保存于4℃。 | |
引物设计问题。 | 尝试重新设计引物进行检查。 | |
阳性对照有目的条带,而待测样品无条带或条带较弱。 | 裂解液与中和液的配比不合适,裂解液会影响PCR体系的pH值。 | 正常情况下,中和后的裂解液pH应在7-8左右(裂解产物与Buffer P2应严格按照5:1的比例进行中和)。 |
样品裂解混合物储存不当或储存时间过长,DNA基因组已降解。 | 裂解物混合物可以在 4°C 下保存 5 天,尽量使用新鲜制备的裂解物混合物进行 PCR。 | |
模板添加量不适合。 | 优化模板添加量,在反应体系<5%范围内。 | |
PCR 循环次数不足。 | 适当增加PCR循环数,最好为35-40个循环。由于模板的复杂性,一般比使用纯化的DNA模板多进行5-10个循环的PCR反应效果更好。 | |
非特异性扩增 | PCR 退火温度太低、循环次数、引物浓度或模板浓度过高。 | 增加 PCR 退火温度并减少 PCR 循环数、引物浓度或模板浓度。 |
PCR 引物不匹配。 | 重新设计 PCR 引物。 | |
配制PCR反应体系时温度过高或配制后放置时间过长。 | PCR反应体系的制备在低温下进行,制备完成后尽快进行PCR扩增反应。 | |
阴性对照中出现目标条带 | 操作工具或试剂受到污染。 | 实验中的所有试剂或设备都应高压灭菌。处理时要小心、轻柔,以防止目标序列被吸入样品枪或溢出离心管。 |
样品之间的交叉污染。 | 每个采样器只用于一个样品;或者在采集一个样品后,将采样器刀片浸入2%次氯酸钠溶液中,反复冲洗,然后用干净的纸巾擦干残留物。 |
付款和安全
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常问问题
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