描述
Hieff® Blood Advanced Direct PCR Kit 是一种无需DNA纯化或样本预处理，即可直接扩增全血样本的试剂盒，并且兼容含有EDTA、肝素、柠檬酸盐等常规抗凝剂的新鲜血液、冷藏（冷冻）血液和市售干血迹。该试剂盒含有高保真度、抗PCR抑制剂的基因工程DNA聚合酶组合，具有强延伸因子、扩增增强因子的2×Hieff® Blood Advanced PCR Buffer，以及优化的缓冲系统，可在快速延伸条件下高效扩增8kb的基因组片段，对2kb以下的片段设定3-5sec/kb的延伸时间，从而大大缩短血液样本鉴定和检测的时间。
规格
| 保真度 (与 Taq 相比) | 1 × |
| 热启动 | 是的 |
| 悬垂 | 3'-A |
| 聚合酶 | Taq DNA 聚合酶（目录号：10726） |
成分
| 不。 | 姓名 | 10188ES20 | 10188ES60 |
| 10188-A | 2× 希夫® 血液高级 PCR 缓冲液 | 500 μ大号 | 2.5 毫升 |
| 10188-B | 希夫® 高级高保真 DNA 聚合酶混合物 | 20 μ大号 | 100 μL |
| 10188-C | 阳性对照引物混合物（各 10 μM） | 100 μL | 200 μL |
| 10188-D | 10× DNA 上样缓冲液 | 1 毫升 | 1 毫升 |
指示
推荐的PCR反应体系。
| 成分 | 容量（μL） |
| 氢键2哦 | 至 50 μL |
| 2× 希夫® 血液高级 PCR 缓冲液 | 25 微升 |
| 正向引物（10 μM） | 2 微升 |
| 反向引物（10 μM） | 2 微升 |
| 希夫® 高级高保真 DNA 聚合酶混合物 | 1 微升 |
| 血液样本 | 十 |
2. 建议每个引物的终浓度为0.4 μM，浓度过高会导致非特异性扩增。
3、最佳全血模板浓度范围为0.5%~20%，建议使用10%作为初试条件，即在50 μL反应体系中加入5 μL全血作为模板，注意不要吸入血凝块。对于保存在Whatman®滤卡上的干血迹，可取约1 mm2带有血迹的圆形纸片，无需预处理，直接加入PCR反应中进行扩增。
反应程序
| 循环 步 | 温度。 | 时间 | 周期 |
| 初始变性 | 95℃ | 5 分钟 | 1 |
| 变性 | 95℃ | 15 秒 | 30-35 |
| 退火 | 60℃ | 15 秒 | |
| 扩大 | 72℃ | 3-10秒/kb | |
| 最终的 扩大 | 72℃ | 5 分钟 | 1 |
退火温度为通用Tm值或比引物Tm值低1-2℃，若扩增产物特异性不强，可建立退火温度梯度，寻找最佳退火条件。
延伸时间10sec/kb可扩增大部分8kb以下的目的片段，3-5sec/kb可扩增大部分2kb以下的片段，若扩增效率较低，可适当延长时间至20-30sec/kb，且不宜超过60sec/kb。
运输和储存
产品应储存于-15℃ 〜-25℃ 为了 1 年
数字
笔记
1、建议血液模板为总反应体积的10%，即在50μL反应体系中加入5μL全血作为模板，注意避免吸入血凝块。
2. 延伸时间10sec/kb可扩增大部分8KB以下的目的片段，3-5sec/kb可扩增大部分2KB以下的片段，若扩增效率较低，可将时间延长至30sec/kb。
3. PCR反应结束后，建议将反应产物以4000 rpm（1000×g）离心1-3分钟，以沉淀血细胞碎片，取上清液进行下游分析。
4.本产品不能直接用于医疗诊断。
5.为了您的安全和健康，请穿上工作服并戴上一次性手套。
付款和安全
您的付款信息已安全处理。我们无法存储信用卡详细信息，也无法访问您的信用卡信息。
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