Quick T4 DNA Ligase 为单酶产品，可用于NGS建库过程中DNA片段及接头的连接。本产品经过高通量测序验证，品质优异。对于不需要实验体系调整的客户，建议购买Hieff NGSTM Fast-Pace DNA Ligation Module（Cat#12607）。

产品组件

运输和储存

产品附带冰袋运输，可在-20°C保存两年。

单位定义

在20 μL连接反应体系中，6 μgλDNA-Hind Ⅲ于16℃反应30 min，使DNA片段连接率达到50%以上所需的酶量定义为一个酶单位（U）。

注意事项

1.缓冲液融化时若有少量沉淀，请倒置混匀后使用；

2、为了您的安全和健康，操作时请穿着工作服，佩戴一次性手套。

3.本产品仅供研究使用！

指示

1. 目前主流的DNA文库构建试剂盒一般不经过末端修复和A-Tailing处理后进行纯化，直接进行接头连接。反应体系请参考下文配制。充分涡旋，短暂旋转，20°C孵育15分钟。

[注]：*试剂盒中不提供50% PEG 6000，需自行配制。

**请参阅下表了解适配器的数量。

***Quick T4 DNA Ligase 的用量可根据需要添加 1-5 μL。

2. 接头的质量和浓度直接影响连接效率和文库产量。接头用量过多可能产生较多的接头二聚体，用量过低则会影响连接效率和文库产量。下表列出了本试剂盒在不同Input DNA情况下接头的推荐用量。

[注]：输入DNA摩尔数(pmol)≈输入DNA(ng)/[0.66×输入DNA平均长度(bp)]。

接头连接计算示例：输入DNA为100ng，长度为300bp，应加入多少接头？

步骤1：计算输入DNA的摩尔数。公式：输入DNA摩尔数（pmol）≈输入DNA（ng）/[0.66×输入DNA平均长度（bp）]；输入DNA摩尔数（pmol）=100÷（0.66×300）=0.5 pmol；

步骤2：根据上表计算加入的adapter摩尔数；当Input DNA为100ng时，adapter：input DNA的摩尔比为100:1，加入的adapter摩尔数=100×0.5 pmol=50 pmol；

步骤3：计算Adapter的加入体积。Adapter浓度=15 μmol/L（若使用其他公司的Adapter，需根据其说明书确定其浓度）；Adapter加入体积=Adapter加入摩尔数（50 pmol）÷Adapter浓度（15 μmol/L）= 3.34 μL（注：15 μmol/L=15 pmol/ μL）；

综上所述，Adapter可加入的体积为3.4 μL。（注：Adapter最大加入体积不超过5 μL）。