描述
本产品是一种大肠杆菌重组蛋白表达的噬菌体T7 RNA聚合酶，以NTP为底物，催化T7启动子序列（5'-TAATACGACTCACTATAG*-3'）上的双链DNA进行5'→3' RNA合成。双链线性平端或5'突出端的DNA可作为T7 RNA聚合酶的模板，因此线性化质粒和PCR产物可作为模板进行体外 RNA 的合成。
注意：G* 是 RNA 转录本的第一个碱基。
本产品按照GMP规定生产，以液体形式提供。
特征
- 合成长转录本和短转录本，以1 μg DNA模板可生成100-200 μg RNA
- 产量更高且操作简便
- 降低内毒素
- 检测是否存在内切酶、外切酶、核糖核酸酶
应用
- 放射性标记RNA探针制备
- RNA 生成，用于研究 RNA 结构、加工和催化
- 通过反义RNA控制表达
- mRNA、sgRNA 合成
规格
| 来源 | 表达为 大肠杆菌 重组T7 RNA聚合酶基因 |
| 最佳温度 | 37℃ |
| 存储缓冲区 | 50 mM Tris-HCl、1 mM EDTA、10 mM DTT、100 mM NaCl、0.1% Triton X-100，50% (v/v)甘油，pH7.9 25℃ |
| 单位定义 | 在 37°C 和 pH 8.0 条件下，1 小时内将 1 nmol [3H] GMP 掺入酸不溶性沉淀所需的酶量 定义为1个单位。 |
质量
| COA 项目 | 标准 |
| 活动 | 250-300单位/微升 |
| 蛋白质 专注 | ≥0.5毫克/毫升 |
| 纯度 | ≥95% |
| 内毒素 | <20 欧盟/毫克 |
| 残留蛋白酶 | 消极的 |
| 残留的核酸外切酶 | 消极的 |
| 残留切口酶 | 消极的 |
| 残留 RNase | 消极的 |
| E. 大肠杆菌宿主蛋白 | <50百万分之一 |
| 大肠杆菌宿主 脱氧核糖核酸 | <10 飞克/单位 |
| 支原体 脱氧核糖核酸 | 消极的 |
成分
| 部件编号 | 姓名 | 10625ES10（10千单位） | 10625ES60（100 千单位） | 10625ES86（2,500 千单位） | 10625ES99 (100 亩) |
| 10625 | T7 RNA 聚合酶 GMP 级（250 U/μL） | 40 微升 | 400 μL | 10 毫升 | 400 毫升 |
运输和储存
T7 RNA Polymerase GMP级产品采用干冰运输，可在-15℃~-25℃保存一年。
数字
图 1. 使用 T7 RNA 合成试剂盒体外合成标准 RNA。
反应产物在PCR仪上37℃反应2h，经磁珠纯化（Cat#12602）后，用NanoDrop分光光度计分析产量结果，如图1所示。
图2. T7试剂盒对不同长度RNA的转录演示，分别为电泳图（图2A）、毛细管电泳图（图2B）和色谱图（图2C）
图3.体外加帽RNA的合成。
反应产物在PCR仪上37℃反应2h，经磁珠纯化（Cat#12602）后，用NanoDrop分光光度计测定产物产量如图3A所示，用毛细管电泳分析产物完整性如图3B所示。
付款和安全
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