描述
这是一种工程化的 T7 RNA 聚合酶变体（低 dsRNA），源自野生型 T7 RNA 聚合酶，在大肠杆菌中产生。它显著减少了双链 RNA (dsRNA) 的产生，同时有效地整合了帽类似物，并且 表现出与野生型T7 RNA聚合酶相当的高效率体外转录（IVT）。 它催化双链 DNA 上 RNA 从其 T7 启动子序列 (5'-TAATACGACTCACTATAG*-3') 的 5'→3' 合成，并使用 NTP 作为底物。
注意：G* 是 RNA 转录本的第一个碱基。
特征
- dsRNA 水平低至约 1/100000
- 与 Trilink CleanCap AG、LZCap 兼容
- 与野生稻相当的高产量
- 下限输入
- 无动物来源 (AOF)
成分
| 部件编号 | 姓名 | 10629ES10 | 10629ES60 | 10629ES72 | 10629ES86 |
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| （10千焦） | （100千单位） | （250库） | （2,500 库单位） |
| 10629 | CleaScrip™ T7 RNA 聚合酶（GMP 级，低 dsRNA，250 U/μL） | 40 微升 | 400 μL | 1 毫升 | 10 毫升 |
规格
| 来源 | 重组 大肠杆菌 含有 T7 RNA 聚合酶基因 |
| 最佳温度 | 37℃ |
| 存储缓冲区 | 50 mM Tris-HCl、1 mM EDTA、10 mM DTT、100 mM NaCl、0.1% Triton X-100，50% (v/v)甘油，pH7.9 25℃ |
| 单位定义 | 加入 1 nmol [3H] GMP在37°C和pH 8.0下1小时内转化为不溶于酸的沉淀 定义为1个单位。 |
| 推荐 Mg2+ | 30mM 醋酸镁 |
质量控制 标准
| 我术语 | 规格/标准 |
| 酵素 活动 | 250-300单位/微升 |
| 蛋白质纯度 | ≥95% |
| 内毒素 | <20 欧盟/毫克 |
| 蛋白酶 | 消极的 |
| 外切酶 | 消极的 |
| 切口酶 | 消极的 |
| 核糖核酸酶 | 消极的 |
| 大肠杆菌宿主蛋白 | <50百万分之一 |
| 埃.coli 宿主 脱氧核糖核酸 | <10 飞克/单位 |
| 支原体检查 | 消极的 |
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数字
图 2. IVT 产品在小鼠 RA 中的免疫原性评估W264.7 细胞（图 2A 和 2B）。RA 中 IFN-β mRNA 和蛋白质水平降低W264与野生型相比，转染了突变体产生的 mRNA 的 .7 细胞表现出更高的免疫反应，表明野生型 T7 RNAP 合成的 mRNA 引发了最强的免疫反应，而来自突变体的 mRNA 则显示出显著降低的反应。
图 3. 用 CleaScript™ T7 RNA 聚合酶合成的 mRNA 中的 dsRNA 含量低于纤维素处理后用野生型酶合成的 mRNA 中的 dsRNA 含量。
运输和储存
这 产品采用干冰运输，可在-15℃~-25℃保存一年。
发布：
FADS 和半合理设计改良的 T7 RNA 聚合酶降低了 dsRNA 的产生，降低了末端转移酶和 RDRP 活性
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