图 3.超长片段的连接。 结果显示10923ES菌落数较高,阳性率为100%。A:重组转化板,载体(21kb)与插入片段(4.5kb)的摩尔比为1:2。B:插入片段PCR鉴定电泳图,M:
描述
Hieff Clone™ Universal II 一步式克隆试剂盒是新升级的克隆试剂盒。
精心优化的第二代 2× Hieff Clone™ Universal II Enzyme Premix将重组酶与重组反应所需的缓冲液结合在一起,并添加独特的重组增强剂,可显著提高重组克隆的效率。
该试剂盒可将PCR产物定向克隆到任意载体的任意位点,兼容未纯化的PCR产物、直接回收的PCR产物、低浓度的胶状回收产物,本品可重组出GC含量为30%-70%的接头片段同源臂。将载体完全线性化,在插入片段正、反向PCR引物的5’端引入15-25bp的线性化载体末端同源序列,使插入片段PCR产物的5’和3’端分别具有与线性化载体两端相对应的完全相同的序列。在重组酶作用下,50℃最快5min即可完成PCR产物与线性化载体的重组反应,克隆阳性率可达95%以上。
特征
简单:在一次反应中克隆最多六个 DNA 片段。
灵活:设计指南允许组装成您选择的任何载体。
高效:可高效连接一至七个片段。
应用
迅速的 克隆:它允许多个重叠的 DNA 片段在一步 5-50 分钟的等温反应中无缝连接。
定向克隆; 定点诱变。
规格
结扎 | 最多 7 个片段 |
产品类型 | DNA组装 |
成分
部件编号 | 姓名 | 10923ES05(五 T) | 10923ES20(二十 T) | 10923ES50(50吨) |
10923-一个 | 2 × 希夫克隆商标 通用 II 酶预混料 | 50 μL | 200 μL | 500 μL |
10923-B | 500 bp 对照插入片段(25 纳克/微升) | 5 微升 | 5 微升 | 5 微升 |
10923-C | pUC 19 对照载体,线性化(50 ng/微升) | 5 微升 | 5 微升 | 5 微升 |
贮存
本产品应在-25~-15℃下保存1 年。
数字
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F形象 1. 在6μL小系统的非复苏接受状态下连接10ng低输入单片段。 结果显示10923ES性能优于竞争产品,连接效率高,菌落数多,阳性率达100%。AB:菌落板,载体(10kb)与插入片段(1kb)摩尔比为1:2。C:插入片段PCR鉴定的电泳图谱,M:

图 2. 将 6 个片段(总长度 7.6 kb)克隆到 11.6 kb 质粒中。 结果显示10923ES性能优于竞争产品,菌落数较多,阳性率达100%。AB:菌落板。载体(11.6kb)与插入片段摩尔比为1:2。C:插入片段电泳分析,M:
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相关引文和参考文献:
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