描述
希菲尔™ AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis Kit (No Dye) 是基于 Hifair™ 开发的快速逆转录试剂盒 III 1st Strand cDNA 合成试剂盒（无染料），适用于 PCR 扩增和 RT-qPCR 实验。与 Hifair™ 相比 III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (No Dye)，具有稳定的检测率、特异性和产量保证，总逆转录时间可能缩短至6分钟以内，大大缩短实验时间。
试剂盒内含gDNA Digester Mix，可消除RNA模板中残留的基因组DNA污染，确保后续结果更可靠。试剂盒提供两种cDNA合成引物：Random Primers N6和Oligo (dT)18. 用户可以选择随机引物 N6、Oligo (dT)18或根据需要选择基因特异性引物作为逆转录引物，合成的单链cDNA产物可直接用于后续的PCR或qPCR反应。
规格
| 货号 | 11150ES10 / 11150ES60 |
| 尺寸 | 10吨/100吨 |
成分
| 部件编号 | 姓名 | 11150ES10 | 11150ES60 |
| 11150-A | 4× Hifair™AdvanceFast SuperMix（无染料） | 50 μL | 500 微升 |
| 11150-B | 5×gDNA 消化混合物 | 20 μL | 200 μL |
| 11150-C | 随机引物（50 μmol/L） | 20 μL | 200 μL |
| 11150-D | 寡核苷酸 d(T)18 引物（50 μmol/L） | 20 μL | 200 μL |
| 11150-E | 无 RNase 水 | 200 μL | 2×1毫升 |
贮存
本品应储存于-25~-15℃ 1 年。
指示
- 如果实验需要去除残留的基因组 DNA
1）gDNA消化
在无RNase的离心管中，配制以下混合物，轻轻吹打混匀。42℃孵育2分钟。
| 成分 | 容量 (μL) |
| 无 RNase 水 | 至 10 μL |
| 5× gDNA 消化混合物 | 2 微升 |
| 总 RNA* | 10皮克至5微克 |
| 或 mRNA* | 10pg-500ng |
*建议Total RNA输入量不超过2 μg，若目的基因表达量较低，可增加输入量，最大为5 μg Total RNA。
2）逆转录反应体系配制（20 μL体系）
| 成分 | 容量 (μL) |
| 上一步的反应溶液 | 10 μL |
| 4×Hifair™AdvanceFast SuperMix（无染料） | 5 微升 |
| 寡核苷酸 d(T)18 引物 (50 μmol/L)** | 2 微升 |
| 或随机引物（* 代表 qPCR）（50 μmol/L）** | 或 2 μL |
| 无 RNase 水 | 至 20 μL |
* 引物的用量可根据模板输入量进行调整，若反转录产物用于qPCR实验，可按照推荐用量在体系中添加Random Primer。
**建议先加入4×Hifair™AdvanceFast SuperMix (No Dye)，混匀后再加入逆转录引物，保证引物不受gDNA Digester的影响。
3）逆转录程序设置
| 温度。 | 时间 |
| 55℃* | 5 分钟** |
| 85℃ | 5 秒 |
* 对于GC含量高或者复杂的模板，逆转录温度可以提高到60℃。
**本产品可合成14kb以下的cDNA序列，如果需要更长的cDNA产物，可以适当延长反转录时间。
- 如果实验不需要去除基因组 DNA
1）逆转录反应体系配制（20 μL体系）
| 成分 | 容量 (μL) |
| 4×Hifair™AdvanceFast SuperMix（无染料） | 5 微升 |
| 寡核苷酸 d(T)18 引物 (50 μmol/L)** | 2 微升 |
| 或随机引物（* 代表 qPCR）（50 μmol/L）** | 或 2 μL |
| 总 RNA* | 10皮克-5微克 |
| 或mRNA | 10 皮克 - 500 纳克 |
| 无 RNase 水 | 至 20 μL |
* 建议Total RNA输入量不超过2 μg，如果目的基因表达量较低，可以增加输入量，最多为5 μg Total RNA。
** 引物用量可根据模板投入量进行调整，若反转录产物用于qPCR实验，可按照推荐用量在体系中添加Random Primer。
2）逆转录程序设置
| 温度。 | 时间 |
| 55℃* | 5 分钟** |
| 85℃ | 5 秒 |
* 对于GC含量高或者复杂的模板，逆转录温度可以提高到60℃。
**本产品可合成14kb以下的cDNA序列，如果需要更长的cDNA产物，可以适当延长反转录时间。
笔记
- 所有操作都应在冰上进行，并应以避免 RNase 污染的方式进行。
- 本产品仅供研究使用。
- 为了您的安全，请穿着工作服和戴一次性手套进行操作。
文件：
付款和安全
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