描述
海法™ Advanced One Step RT-qPCR Kit 是一款基于 SYBR Green I 染料的荧光定量试剂盒。使用基因特异性引物，逆转录和 qPCR 反应在一个管中完成，无需反复开盖和移液操作，大大提高了检测效率并降低了污染风险。对于 RNA 样本，该试剂盒采用耐热 Hifair™ V 逆转录酶用于高效 cDNA 合成和 UNICON™ HotStart Taq DNA 聚合酶用于定量扩增。在优化的缓冲体系下，该试剂盒灵敏度可高达高表达靶标0.1 pg，中表达靶标高达1 pg，并且该试剂盒也适用于DNA样本的扩增和定量。该试剂盒适用于DNA样本的扩增和定量。它能够灵敏地检测和定量来自不同动植物样本、细胞和微生物的核酸。
规格
| 货号 | 11175ES20 / 11175ES70 |
| 尺寸 | 20 T/200 电视 |
成分
| 部件编号 | 姓名 | 11175ES20 | 11175ES70 |
| 11175-A | 2× 海菲尔™ 高级 SG 缓冲液 | 250 微升 | 2×1.25 毫升 |
| 11175-B | 海法™ 高级 UH 酶混合物 | 20 μL | 200 微升 |
| 11175-C | RNase 自由 H2哦 | 250 微升 | 2×1.25 毫升 |
贮存
本产品应储存于-25~-15℃ 离开 从 光 为了 1 年。
指示
- 反应 系统 配置*****
| 成分 | 容量 (μL)**** | 容量 (μL) | 最终浓度 |
| 2× 海菲尔™ 高级 SG 缓冲液* | 12.5 | 二十五 | 1× |
| 海法™ 高级 UH 酶混合物 | 1 | 2 | - |
| 正向引物 (10 μmol/L)** | 0.5 | 1 | 0.2 微摩尔/升 |
| 反向引物 (10 μmol/L)** | 0.5 | 1 | 0.2 微摩尔/升 |
| 核糖核酸*** | 十 | 十 | - |
| RNase 自由 H2哦 | 至 25 | 到 50 | - |
* 低Rox模型和未进行Rox校正的模型直接按照上述反应体系制备，使用高Rox模型时，将Hieff™ SP High Rox以1:250 v/v加入2 x Hifair™ Advanced SG Buffer中，混匀后离心，2×Hifair™ 带有 Hieff™ SP High Rox 的高级 SG 缓冲液不会影响 Low Rox 和 No Rox 校正模型的使用。
** 引物最终浓度为0.2 μmol/L，也可根据需要在0.1~1 μmol/L之间调整。
*** 该试剂灵敏度极高，总 RNA 范围为 1 pg-1 μg，对人体样本检测结果显示最佳输入量为 1 pg-100 ng，控制总 Ct 值在 15-30 范围内为适宜。
**** 建议使用20 μL或50 μL以保证目标基因扩增的有效性和可重复性。
*****请在超净台上准备，使用无核酸酶残留的枪头和反应管，建议使用带滤芯的枪头，避免交叉污染和气溶胶污染。
2）反应程序
| 循环 步 | 温度。 | 时间 | 周期 |
| 逆转录 | 50℃* | 6 分钟 | 1 |
| 初始变性 | 95℃ | 5 分钟 | 1 |
| 扩增反应 | 95℃ | 15 秒 | 40 |
| 60℃** | 三十 秒 | ||
| 熔化曲线阶段 | 仪器默认值 | 1 | |
*逆转录温度可根据实验需要在50-55℃之间选择，对于DNA样本，可以省略逆转录过程。
** 特殊情况下可根据引物Tm值调整退火/延伸温度，建议为60℃。
3）适用机型
不需要 Rox 校准的仪器型号：
Bio-Rad：CFX96、CFX384、iCycler iQ、iQ5、MyiQ、MiniOpticon、Opticon、Opticon 2、Chromo4；
Eppendorf：Mastercycler ep realplex、realplex 2 s；
Qiagen：Corbett Rotor-Gene Q、Rotor-Gene 3000、Rotor-Gene 6000；
罗氏应用科学：LightCycler 480、LightCycler2。0，Lightcycler 96；
Thermo Scientific：PikoReal Cycler；Cepheid：SmartCycler；Illumina：Eco qPCR；
Low Rox适用车型：
ABI 7500、7500 Fast、ViiA7、QuantStudio 3 和 5、QuantStudio 6、7、12k Flex；
Stratagene MX3000P、MX3005P、MX4000P；
高Rox适用型号*：
ABI 5700、7000、7300、7700、7900HT 快速、StepOne、StepOne Plus。
* 对于 High Rox 型号，请注意应按比例将 Hieff™ SP High Rox 添加到 2 x Hifair™ 使用前先使用高级 SG 缓冲液。
笔记
- 本产品仅供研究使用。
- 为了您的安全，请穿着工作服和戴一次性手套进行操作。
文件：
安全数据表
手册
付款和安全
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