描述
萤火虫荧光素酶是一种分子量约为61kDa的蛋白质,在有ATP、镁离子和氧气存在的情况下,能催化荧光素氧化为氧化荧光素,发出波长在560nm左右的生物发光。海肾荧光素酶是一种分子量约为36kDa的蛋白质,在有氧气存在的情况下,能催化腔肠素氧化为腔肠酰胺,氧化过程中发出波长为480nm的光。关于生物发光。两种生物发光均可通过化学发光法进行测量。检测原理如图1所示:
图 1:萤火虫和海肾荧光素酶检测示意图
通常将目的基因5´UTR或启动子克隆至萤火虫荧光素酶上游,或将3´UTR克隆至萤火虫荧光素酶下游,通过检测萤火虫荧光素酶的量来检测启动子或调控元件的转录调控效果。以海肾荧光素酶作为内参,消除细胞数量、转染效率等差异。双荧光素酶报告基因检测试剂盒以荧光素为底物,检测萤火虫荧光素酶报告基因活性,再以腔肠素为底物,在猝灭荧光反应的同时检测海肾荧光素酶报告基因活性。该试剂盒具有灵敏度高的特点。
特征
增强的裂解能力:能够完全裂解绝大多数细胞类型。
更强的信号:精确检测弱启动子表达。
灵敏度更高:可检测到低至 10-20 皮摩尔的荧光素酶分子。
更宽的线性范围:线性检测范围超过酶浓度的8个数量级。
应用
miRNA与靶基因3'UTR相互作用的验证
lncRNA-miRNA相互作用的验证
启动子区转录因子调控的验证
信号通路分析
SNP活性分析
规格
形式 | 液体 |
荧光素酶 | 萤火虫和海肾 |
信号半衰期 | 30分钟 |
产品组件数量 | 5 |
工作流 | 二 年代特普 |
成分
部件编号 | 姓名 | 11402ES60 | 11402ES80 |
11402-A | 细胞裂解物 | 20 毫升 | 10×20毫升 |
11402-B | 萤火虫荧光素酶缓冲液 | 10 毫升 | 10×10毫升 |
11402-C | 萤火虫荧光素酶底物(50 ×) | 200 μL | 10×200μL |
11402-D | 海肾荧光素酶缓冲液 | 10 毫升 | 10×10毫升 |
11402-E | 海肾荧光素酶底物 (50 ×) | 200 μL | 10×200μL |
运输和储存
双荧光素酶报告基因检测试剂盒产品应保存于-15℃ 〜-25℃ 为了 1 年。
数字
图1.
数字2。 是宜生 (猫#:11402)检测试剂与荧光素酶相互作用,达到最佳发光强度。加入海肾荧光素酶底物后,萤火虫荧光素酶的生物发光被猝灭:可以基本完全猝灭。
文件:
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手册
引文及参考文献:
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