Hieff 超快速 DNA 甲基化亚硫酸盐试剂盒（柱式）可快速将 DNA 样本中的未甲基化胞嘧啶转化为尿嘧啶，同时保持甲基化胞嘧啶不变。在高温亚硫酸盐处理过程中，双链 DNA 变性为单链。在 HSO3- 存在下，胞嘧啶残基发生脱氨并转化为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不变。在随后的 PCR 扩增中，尿嘧啶被胸腺嘧啶 (T) 取代。转化过程仅需 5 分钟，可适应 100 pg 至 2 μg 的 DNA 输入，对未甲基化胞嘧啶的转化效率可达 ≥99%。转化后的 DNA 适用于 PCR 扩增和 NGS 测序等下游应用。

特征

低输入： 适用于将 100 pg 至 2 μg 范围内的样品转换为

转换时间短： 約 5 分鐘。

最小样品损坏： 转换后保持良好的样品完整性。

高转换效率： 转化率≥99%, 高 GC 区域的转化率高，且假阳性率低。

适用于稀有样本， 例如单细胞DNA甲基化转换。

能够对RNA样本进行甲基化转换。

产品 成分

笔记：

每盒 10 次测试：向洗涤液中添加 4.4 毫升无水乙醇。

每盒 50 次试验：在洗涤液中加入 22 毫升无水乙醇。

加入无水乙醇后，倒置混匀，备用。确保瓶盖盖紧，防止乙醇挥发，影响试剂性能。

数字

图 4. 使用 12225 和竞争对手 Q 转化试剂盒对人类基因组 DNA 样本进行亚硫酸盐转化。随后，使用甲基化特异性单链 DNA 文库制备试剂盒来生成文库。文库产量和质量控制数据如上所示。结果表明，在对 12225 和竞争对手 Q 试剂盒的混合文库进行测序时，12225 试剂盒的数据产量更高，达到更高的目标率 (%)，并且重复率 (%) 更低。

运输和储存

12225-A 转化液室温避光保存，其他组分室温保存，保质期 12 个月。

笔记：

1. 为确保下游实验成功，转化步骤中需准确定量输入 DNA 总量。建议使用 Qubit 3.0/4.0 进行 DNA 定量，A260/A280 比值在 1.7 至 1.9 之间。输入 DNA 范围应在 100 pg 至 2 μg 之间，最佳范围为 100 ng 至 1 μg。DNA 输入量不足会阻碍下游检测，而输入量过大可能会降低回收率和转化效率。

2、转化液、脱磺液、洗涤液含有挥发性成分，使用后应及时拧紧瓶盖，并室温保存。

3. 转化后样品应及时进行下游实验。短期保存请保存在-20°C，长期保存请保存在-80°C。

4.为了您的安全和健康，操作时请穿戴工作服和一次性手套。

5.本产品仅供研究使用！

指示

试剂及耗材准备： 1.5mL无菌离心管、无酶水、无水乙醇、PCR管；

升 亚硫酸盐转化率：

1） 根据待检测样本数量准备相应的无菌PCR管，按下表配制反应体系：

2） 转化系统

用移液器将上述体系吹打混匀或涡旋混匀5s，短暂离心，将反应液离心至PCR管底部。

五 注：1.此时PCR管内反应液总体积为200μL，为了使转化更加彻底，应将步骤2）中吹干混匀后将反应液等分并转移至新的无菌PCR管中，运行转化程序。转化完成后将两支PCR管内反应液合并放入同一纯化柱中进行纯化。

2. 如果样品体积在 20 至 40 μL 之间，则减少转化溶液的体积以保持总体积为 200 μL。

3. 若样品体积为50μL，则加入150μL转化液，总体积维持在200μL，转化时间延长至6-10分钟。

3）CT转换程序的设置

将PCR管放置在已设定好程序的PCR仪上，进行反应。

升 纯化

1） 电视转移 200 μL 转换 解决方案 磷净化塔s，离心30-60秒13000 克，弃滤液，将纯化柱放入 碳收集管s 再次;

2） 加入 100 μL 洗涤缓冲液 进入 纯化柱 （确认已加入无水乙醇），离心30-60秒13000 克，弃滤液，将纯化柱放入 碳收集管s 再次;

3） 加入 200 μL 脱磺化缓冲液 进入 纯化柱 ，室温下反应20分钟。反应结束后，离心30-60秒13000 克，弃去滤液，将 纯化柱 在 碳收集管s 再次;

4） 加入 200 μL 洗涤缓冲液 到 纯化柱，离心30-60秒13000 克 弃掉滤液，将 磷净化塔s 在 碳收集管s 再次;

5） 重复步骤4)一次；

6） 转让 纯化柱 在准备好的1.5 mL离心管中，加入10-30 μL 洗脱缓冲液 开盖晾干后移至滤膜中央，收集 脱氧核糖核酸 室温下静置 1 分钟，然后 13000 离心 1 分钟 克；

7） 存储 脱氧核糖核酸 暂时储存于-20 ℃。如需长期储存，请将 脱氧核糖核酸 于-80℃保存，避免不必要的重复冻融。

注：纯化的转化产物可直接用于后续的PCR反应或测序过程。

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