Hieff NGS® DNA&RNA 文库共制备试剂盒 V2 是针对Illumina®&MGI®测序平台的DNA&RNA共文库试剂盒，包含高效的cDNA合成试剂和酶切试剂。与传统文库相比 建造 方法，本产品可高效完成cDNA合成及DNA&RNA文库构建 建造 该试剂盒含有用于 DNA 片段化的高质量酶，并将 DNA 片段化、末端修复和 dA 加尾结合为一个步骤，大大减少了文库制备的时间和成本。 该文库制备试剂盒具有优异的文库转化率，适用于所有常见动物、植物、微生物等样本，也适用于FFPE样本。本次升级的试剂盒采用最新优化的连接酶，大大降低了接头连接过程中的自连接率。此外，新型高保真聚合酶的引入，进一步提高了扩增的均一性和保真度。

试剂盒提供的所有组分均经过严格的质量控制和功能验证，最大程度保证了建库的稳定性和可重复性。

规格

成分

笔记： * 表示该试剂不包含在该试剂盒中，需要额外添加试剂。该试剂盒 是 兼容双平台 伊路明纳^®麦吉尔^®，但额外的引物混合物（CAT # 13334 MGI 引物混合物^® 和 Cat# 13335 Illumina 引物混合物^®） 是必须的。

工作流程：

贮存

本品应储存于-25~-15℃ 1 年。

笔记

关于手术

1. 1.为了您的安全，请穿工作服，戴一次性手套进行操作。
2. 在室温下解冻组件。解冻后，涡旋充分混合，短暂旋转管子并将它们放在冰上以供日后使用。
3. 建议每个反应步骤在带有加热盖的热循环仪中进行，使用前应将热循环仪预热至设定温度。
4. 请使用不含RNase的耗材污染。并清洁实验区域 定期检测。ThermoFisher 的 RNAZap^商标 建议使用高效核酸去除喷雾去除RNase污染。
5. 操作不当很容易造成气溶胶污染，影响结果的准确性。建议对PCR反应混合区域和PCR产物纯化检测区域进行强制物理隔离。配备建库专用移液器等设备。
6. 6.本产品仅供研究使用。

接头连接

1. Illumina或MGI长适配器（Barcoded Adapter）套件和短适配器套件可供客户根据实验需求进行选择。
2. 建议选用优质、商业化的接头，如选用自制接头，请委托有NGS引物合成经验的公司，并注明需严格控制污染。此外，建议在超净台中配制DNA退火溶液，每次仅操作一种接头，防止交叉污染。
3. 请在冰上或 4°C 下解冻适配器；室温操作时，实验室温度不应超过 25°C，以防止适配器变性。
4. 接头的浓度直接影响连接效率和文库产量，试剂盒中加入的接头体积固定为5μl，建议用0.1×TE缓冲液稀释接头，稀释后的接头可在4℃保存48小时。表1 列出了针对不同量 RNA 输入的推荐接头数量。

表 1-1 推荐的 Illumina^® 不同输入的适配器数量 DNA和RNA

表 1-2 推荐的 MGI^® 不同输入的适配器数量 DNA和RNA

*可根据Total RNA样本类型及投入量调整Adapter的使用。

文库扩增

应严格控制扩增循环数。扩增不足可能导致文库产量低；过度扩增可能导致偏差增加、错误、重复读取和嵌合产物。表 2 列出了针对 1 μg 文库产量的建议循环数。

桌子 2 建议生成 DNA&RNA 文库的循环次数 *

注：*文库产量不仅与投入量、扩增循环数有关，还受样本质量、打断条件、分选条件等影响，在建库过程中应根据实际情况选择最合适的条件。

基于珠子的 DNA 清理和尺寸选择

1. 1.文库构建过程中有多个步骤需要使用 DNA 纯化磁珠。我们推荐使用 Hieff NGS™ DNA Selection Beads（Yeasen 使用 AMPure® XP 磁珠 (Beckman Cat#A63880) 进行 DNA 纯化和尺寸选择。
2. 2.磁珠使用前需先在室温下平衡，否则会降低产量并影响大小选择效果。
3. 3.使用前应将磁珠通过涡旋或移液器吹打混合均匀。
4. 4.转移上清液时请勿吸出珠子，即使是微量的珠子也可能影响接下来的反应。
5. 5.80%乙醇应新鲜配制，否则影响回收效率。
6. 6.洗脱产品前磁珠需室温干燥，干燥不充分易造成乙醇残留影响后续反应；干燥过度则磁珠易破裂，降低纯化产率，一般室温干燥3-5分钟即可使磁珠充分干燥。
7. 7.如果需要，将纯化或大小选择的 DNA 样本洗脱于1× TE 缓冲液可在 4°C 下保存 1-2 周，或在 -20°C 下保存一个月。

图书馆质量分析

1. 通常通过测量浓度和尺寸分布来分析构建的文库质量。
2. 可以通过基于荧光的方法（例如 Qubit 和 PicoGreen 或 qPCR）测量文库浓度。
3. 不建议使用基于吸光度的定量方法，例如 NanoDrop。
4. 建议使用qPCR方法进行文库定量：Qubit、PicoGreen等荧光方法无法区分不完整的dsDNA结构（无接头或仅一端连接接头的插入片段）和完整的文库，而qPCR方法只会扩增和测量两端连接接头的完整文库（可测序文库），从而为上样提供更准确的测量。
5. 可以使用 Agilent Bioanalyzer 或其他基于毛细管电泳或微流体原理的设备来分析文库的大小分布。

其他材料

1. 1.DNA纯化磁珠：Hieff NGS™ DNA Selection Beads（Yeasen 目录号 12601) 或 AMPure^®XP Beads（A63880）或其他同等产品。

2.适配器：Illumina 完整适配器（Yeasen Cat#13519-13520 或其他同等产品）或 MGI 完整适配器（Yeasen Cat#13360-13362或其他同等产品）。

3. 文库质量分析：Agilent 2100 Bioanalyzer DNA 1000 Chip/High Sensitivity Chip或其他同等产品；文库定量试剂。
4. 其他材料：无水乙醇，无菌超纯水，低保留移液器吸头，PCR管，磁力架，热循环仪等。

文件：

手册

12305ES-Hieff NGS® DNA&RNA 文库共制备试剂盒 V2.pdf