希夫NGS™ One Pot Flash DNA Library PrepKit 是一种快速酶法 DNA 文库制备试剂盒，巫婆 含有高质量的 DNA 片段化酶，将 DNA 片段化、末端修复和 dA 加尾结合为一个步骤，大大减少了文库制备的时间和成本。

本文库制备试剂盒兼容所有常见动物、植物、微生物等100 pg-500 ng样本。

单管快速实现DNA片段化、末端修复及A尾添加反应。该试剂盒需配套接头及引物，兼容Illumina 和麦肯锡 高通量测序平台。

特征

1） 适用于100 pg-500 ng的基因组DNA样本。

2）与 Illumina 兼容 和麦肯锡 高通量测序平台。

3）碎片化、末端修复和 A 尾添加 内部反应 5 分钟

4）高效的文库转化率和扩增效率。

规格

成分

笔记： * 表示该试剂不包含在该试剂盒中，需要额外试剂。套件 是 兼容双平台 Illumina 与 MGI，但额外的引物混合物（CAT # 13334 MGI 引物混合物 需要 Illumina 的 Cat# 13335 Primer Mix。

贮存

本产品应储存在-25~-15℃ 1 年。

数字

图1 10种微生物DNA检测

使用以下方法制备文库： 猫号#12316 协议 ，10 ng ZymoBIOMICS 微生物群落 DNA 标准 (Zymo Research® #D6306)。将文库汇集并在 Illumina 上测序 (SE75）。测序数据均质化至20M 并对两种输入水平的预期和检测组成进行了比较。特定微生物 gDNA 的检测与预期组成一致。预期组成：新型隐球菌 2%、酿酒酵母 2%、枯草芽孢杆菌 12%、大肠杆菌 12%、粪肠球菌 12%、发酵乳杆菌 12%、单核细胞增生李斯特菌 12%、铜绿假单胞菌 12%、金黄色葡萄球菌 12% 和肠道沙门氏菌 12%。

关于手术

1. 请穿戴工作服和一次性手套进行操作，为了您的安全。

2. 在室温下解冻组件。 解冻后，通过涡旋充分混合，短暂旋转管子并将它们放在冰上以备后用。

3.各步配制反应液时建议用移液器吹打混合均匀或轻轻震荡，剧烈震荡可能会造成文库产量下降。

4. 为避免样品交叉污染，建议使用带过滤元件的枪头，吸取不同样品时请更换枪头。

5. 建议各反应步骤在配有加热盖的PCR仪上进行，使用前应将PCR仪预热至设定温度。

6. 操作不当极易造成气溶胶污染，影响结果准确性。建议对PCR反应混合区域和PCR产物纯化检测区域进行强制物理隔离。配备建库专用移液器等设备。

7.本产品仅供研究使用。

关于 DNA 碎片

1. 本试剂盒兼容范围为100 pg–500 ng 输入 DNA。应尽可能使用 A260/A280 = 1.8-2.0 的高质量输入 DNA。

2. 如果Input DNA中含有高浓度的金属离子螯合剂或其他盐类，可能会影响后续实验，建议用ddH2O或Tebuffer（10 mm tris-HCl，pH 8.0-8.5；0.1 mM EDTA）稀释DNA。

3. 对于大多数高质量基因组DNA，酶切时间如表1所示。该试剂盒偏好性较低，能耐受各种GC含量的模板。

表 1. 常规基因组 DNA 片段化建议时间

接头连接

1. 接头的浓度直接影响连接效率和文库产量。接头用量过多可能产生较多接头二聚体；用量过低可能影响 结扎 效率和文库产量。表 2 和表 3 列出了推荐用量 使用此试剂盒为不同的输入 DNA 输入提供适配器。

表 2. 推荐的 Illumina 不同输入 DNA 的接头数量

表 3. 推荐的 MGI 不同输入 DNA 的接头数量

文库扩增

应严格控制扩增循环数。扩增不足可能导致文库产量低；过度扩增可能引入偏差、错误、重复读取和嵌合产物增加。表 4 列出针对库产量 1 的推荐循环次数 μg.

表 4. 建议循环 100 pg-500 ng 输入 DNA

基于珠子的 DNA 清理和尺寸选择

1。 文库构建过程中有多个步骤需要使用 DNA 纯化磁珠。我们推荐 Hieff NGS™ DNA 选择珠（Yeasen 目录号 12601) 或 AMPure™ XP 磁珠（Beckman Cat#A63880）用于 DNA 纯化和尺寸选择。

2。 磁珠使用前应先在室温下平衡，否则产量会下降，并且影响大小选择效果。

3。 使用前应通过涡旋或移液将磁珠混合均匀。

4。 转移上清液时不要吸出珠子，即使是微量的珠子也可能影响接下来的反应。

5。 80%乙醇应新鲜配制，否则影响回收效率。

6。 磁珠在洗脱产品前需室温干燥，干燥不充分易造成乙醇残留影响后续反应；干燥过度则易造成磁珠破裂，降低纯化产率。一般室温干燥3-5分钟即可使磁珠充分干燥。

7。 如果需要，纯化或大小选择的 DNA 样本洗脱于 0.1× TE 缓冲液可在 4°C 下保存 1-2 周，或在 -20°C 下保存一个月。

图书馆质量分析

1. 构建的文库质量一般通过测量浓度和粒径分布来分析。

2. 可以通过基于荧光的方法（例如 Qubit 和 PicoGreen 或 qPCR）测量文库浓度。

3. 不建议使用基于吸光度的定量方法，例如NanoDrop。

4. 建议使用qPCR方法进行文库定量：Qubit、PicoGreen等荧光方法无法区分不完整的dsDNA结构（无接头或仅一端连接接头的插入片段）和完整的文库，而qPCR方法只会对两端连接接头的完整文库（可测序文库）进行扩增和测定，从而为上样提供更准确的测量。

5. 可以使用Agilent Bioanalyzer或其他基于毛细管电泳或微流体原理的设备来分析文库的大小分布。

文件：

安全数据表

12316_MSDS_HB250211_EN.PDF

手册

12316_手册_版本 E否20241225.pdf