描述
Hieff NGS™ DNA 选择珠基于 SPRI（固相反向固定）原理制备，适用于制备下一代测序 (NGS) 文库期间的 DNA 纯化和大小选择。Hieff NGS™ DNA 选择珠与各种 DNA 和 RNA 文库制备试剂盒兼容，是 AMPure 珠子。
成分
| 部件编号 | 姓名 | 12601ES08 | 12601ES56 | 12601ES75 |
| 12601 | Hieff NGS™ DNA 选择珠 | 5 毫升 | 60 毫升 | 450 毫升 |
规格
| 产品线 | DNA 净化和选择珠 |
| 起始材料 | 脱氧核糖核酸 |
| 兼容性 | 脱氧核糖核酸 |
| 隔离技术 | 磁珠 |
| 最终产品类型 | 脱氧核糖核酸 |
| 适用于（应用程序） | DNA 大小选择 |
运输和储存
这些珠子用冰袋运输，可以在 2°C-8°C 下保存一年。
指示
- 1. 准备
使用前，将选择珠在室温下平衡至少 30 分钟。
- 2. DNA 大小选择
尺寸选择的操作流程如图1所示，协议如下。
图 1. DNA 大小选择流程图
2.1 每次使用前，请通过涡旋或上下移液的方式将珠子彻底混合。
2.2 将第一轮筛选珠子加入到样品中（参见表1）。通过涡旋或上下移液至少10次以充分混合。
2.3 室温下孵育5分钟。
2.4 短暂离心后置于磁力架上，待溶液澄清（约5分钟）后，将上清转移至新的PCR管中。
2.5 按照表 1 将第二轮选择珠添加到步骤 2.4 的样品中。通过涡旋或上下移液至少 10 次来充分混合。
2.6 室温下孵育 5 分钟。
2.7 短暂离心后，将离心管置于磁力架上，待溶液澄清后（约 5 分钟），弃去上清液。
2.8 将管子放在磁力架上，加入200 μL新鲜配制的80％乙醇，不要搅动磁珠，室温下孵育30秒。吸出乙醇并丢弃。
2.9 重复步骤 2.8 一次，总共清洗两次。
2.10 用10 µL 移液器吸头吸去残留乙醇，将管子放在磁力架上，打开盖子，风干筛选珠直至出现裂纹（约5分钟）。
注意：不要过度干燥选择珠。这可能会导致 DNA 目标的回收率降低。
2.11 从磁力架上取下离心管，加入适量 ddH2O（≥20 µL），旋涡震荡或上下移液至少 10 次，充分混匀。
2.12 室温下孵育 5 分钟。
将管短暂旋转并放置在磁力架上。当溶液澄清时（约 5 分钟），将 20 μL 上清液转移到新管中。
- 3.DNA 大小选择的推荐条件
将小牛胸腺DNA超声破碎，制备100~1,000 bp的片段，按照表1进行两轮大小选择，采用Agilent 2100 Bioanalyzer分析结果（图2）。
表 1. DNA 大小选择的推荐条件
| DNA片段长度 | 250-350 基点 | 320-420 碱基 | 450-550 碱基 | 550-700 碱基 | 700-900 碱基 | 800-1,000 bp |
| 珠子比例： 第一轮 DNA | 0.80× | 0.70× | 0.60× | 0.55× | 0.50× | 0.45× |
| 珠子比例： 第二个 DNA 圆形的 | 0.20× | 0.20× | 0.20× | 0.15× | 0.15× | 0.15× |
注：表中“×”表示样本DNA体积，例如文库插入片段长度为250 bp，样本DNA体积为100 μL，则第一轮分选所用磁珠体积为0.80×100 μL=80 μL；第二轮分选所用磁珠体积为0.20×100 μL=20 μL。
图2. Agilent 2100高灵敏度DNA芯片电泳图
笔记：
1、为了您的安全和健康，操作时请穿着工作服，佩戴一次性手套。
引自“Candidatus Nitrosopumilus koreensis 家族 1 胱天蛋白酶的序列特异性整合 AR1.核酸研究。2021；49(17):9938-9952。doi:10.1093/nar/gkab725”
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